WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 || 3 | 4 |   ...   | 9 |

Обнаружено, что при различных вариантах радиационного воздействия ИЛ-1 оказывает позитивное влияние на динамику количества лейкоцитов периферической крови и качественное состояние нейтрофилов. Выявлено, что при остром облучении с высокой мощностью дозы, при пролонгированном радиационном воздействии, при сочетанном внешнем и внутреннем облучении, при фракционированном радиационном воздействии применение ИЛ-1 способствует ускорению восстановления общего числа лейкоцитов, абсолютного количества и относительного содержания нейтрофилов и лимфоцитов периферической крови, стимуляции функциональных свойств и метаболической активности нейтрофильных гранулоцитов.

Установлено, что при внутривенном введении рекомбинантный ИЛ-1 хорошо переносится здоровыми людьми и, за исключение кратковременного повышения температуры до субфебрильных цифр, не оказывает отрицательного влияния на самочувствие и объективный статус людей, а также на биохимические показатели крови. В тоже время, препарат обладает гемо- и иммуностимулирующим действием, которое проявляется развитием умеренного нейтрофильного лейкоцитоза, повышением функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов, увеличением количества клеток, синтезирующих и продуцирующих провоспалительные цитокины.

Показано, что ИЛ-1 обладает выраженной радиозащитной активностью по отношению к лейкоцитам периферической крови и цитокиновой сети, что дополняет представления о механизмах радиопротекторного действия данного цитокина. Выявлено, что у здоровых людей максимальный радиозащитный эффект препарата, оцененный по количественным и функционально-метаболическим показателям лейкоцитов периферической крови, наблюдается через 24 ч после его парентерального введения. Установлено, что введение ИЛ-1 за 24 ч до облучения проб периферической крови людей in vitro отменяет радиационно-индуцированное снижение различных субпопуляций лимфоцитов, нормализует функционально-метаболический статус нейтрофилов, измененный вследствие облучения, снижает выраженность пострадиационных нарушений цитокиновой сети.

Сформулированы и экспериментально обоснованы возможные механизмы радиозащитного действия ИЛ-1, связанные с его способностью предотвращать постлучевую депрессию кроветворения, ускорять восстановление гемопоэза, уменьшать выраженность процесса апоптоза, а также стимулировать иммунитет и неспецифическую резистентность организма.

Практическая значимость. Разработана и экспериментально обоснована возможность применения ИЛ-1 при различных видах лучевого воздействия (острое, пролонгированное, фракционированное, сочетанное облучение) в качестве средства профилактики и ранней терапии радиационных поражений.

Уточнены оптимальные сроки и схемы применения ИЛ-1 для профилактики и лечения различных форм радиационных поражений. Показано, что введение препарата рекомбинантного ИЛ-1 испытуемым здоровым людям по субъективным, клиническим и лабораторным данным не приводит к ухудшению состояния их здоровья и дееспособности.

Разработана и на примере ИЛ-1 апробирована экспериментальная модель, позволяющая оценить эффективность радиозащитных препаратов в отношении человека, в основе которой лежит исследование реакций количественного состава различных субпопуляций лейкоцитов, параметров клеточного иммунитета, характеристик цитокиновой сети и морфофункциональных показателей нейтрофилов, развивающихся после введения здоровым людям исследуемого препарата и последующего облучения проб их периферической крови in vitro.

Реализация результатов исследования. Рекомендации, разработанные на основании полученных результатов, используются в научно-исследовательской и лечебно-диагностической деятельности сектора клинического лабораторно-диагностического Всероссийского центра экстренной и радиационной медицины им. А.М. Никифорова МЧС России, лаборатории иммунофармакологии Государственного научно-исследовательского института особо чистых биопрепаратов ФМБА России, в научной работе и учебном процессе на кафедре военной токсикологии и медицинской защиты Военно-медицинской академии им. С.М. Кирова, на кафедре военной токсикологии и медицинской защиты и кафедре гражданской обороны Московской медицинской академии им. И.М. Сеченова.

Результаты диссертационного исследования использовались при подготовке учебного пособия «Цитохимия нейтрофилов» (СПб.: ВМедА, 1999). В процессе выполнения диссертационного исследования подано и принято к использованию 5 рационализаторских предложений.

Апробация работы. Результаты исследования были представлены и обсуждены на III, IV и V съездах по радиационным исследованиям (Москва, 1997, 2001, 2006), Юбилейной конференции молодых ученых и специалистов, посвященной 200-летию ВМедА (Санкт-Петербург, 1998), Всероссийских научных конференциях «От materia medica к современным медицинским технологиям» (Санкт-Петербург, 1998), V научно-практической конференции «Радиационные поражения, перспективы развития средств индивидуальной защиты от ионизирующих излучений» (Санкт-Петербург, 2000), Российской научной конференции «Медицинские аспекты радиационной и химической безопасности» (Санкт-Петербург, 2001), Юбилейной научно-технической конференции «Фундаментальные и прикладные проблемы биотехнологии и медицины» (Санкт-Петербург, 2001), I и III съездах военных врачей медико-профилактического профиля ВС РФ (Санкт-Петербург, 2002, 2006), III съезде по радиационным исследованиям (радиобиология и радиоэкология) (Киев, 2003), Российской научной конференции «Медико-биологические проблемы противолучевой и противохимической защиты» (Санкт-Петербург, 2004), международной научной конференции «The peculiarities of medical support of armed forces in contemporary conditions» (Ереван, 2004), научно-практической конференции «Актуальные проблемы обитаемости и медицинского обеспечения личного состава ВМФ» (Санкт-Петербург, 2004), Всероссийской конференции «Механизмы стресса в экстремальных условиях» (Москва, 2004), международной научной конференции «Радиобиологические эффекты: риски, минимизация, прогноз» (Киев, 2005), Российской научной конференции с международным участием «Современные проблемы военной и экстремальной терапии» (Санкт-Петербург, 2005), XXX World Congress on Military Medicine (St. Petersburg, 2005), Российской научной конференции «Медико-биологические проблемы токсикологии и радиологии» (Санкт-Петербург, 2008), международной научно-практической конференции «Актуальные психолого-педагогические и медико-социальные проблемы социума и безопасности жизнедеятельности» (Санкт-Петербург, 2009).

Связь диссертационного исследования с плановой тематикой научно-исследовательской работы учреждения. Исследование выполнялось в соответствии с плановой тематикой научно-исследовательских работ Военно-медицинской академии им. С.М. Кирова (темы НИР № 4.01.030.п2 шифр «Беталейкин», № 4.01.034.п2 шифр «Протектор», № 03.02.012.0808/0292 шифр «Гемопоэз», № 02.02.02.0810/0192 шифр «Цитокин»).

Публикации. По теме диссертационного исследования опубликовано 45 научных работ, том числе 12 статей в научных журналах по перечню ВАК Минобрнауки РФ.

Объём и структура диссертации. Диссертация изложена на 228 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, двух глав результатов собственных исследований, обсуждения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. В диссертации приведены 45 таблиц и 19 рисунков. Список литературы содержит 333 библиографических источника, из них 162 отечественных и 171 иностранных публикаций.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

Оценку эффективности интерлейкина-1 в качестве средства профилактики и ранней терапии радиационных поражений проводили в экспериментах на мелких лабораторных животных (мышах и крысах) и в исследованиях с облучением проб периферической крови здоровых людей in vitro. В целом с использованием радиобиологических, гематологических, биохимических, иммунологических и цитохимических методов исследования было изучено более 80 клинико-лабораторных показателей.

Экспериментальные исследования выполнены на 2224 мышах-самцах (1852 белых беспородных, 124 линии BALB/c, 248 гибридах CBA x С57В1 первого поколения) массой 18-20 г и 180 белых беспородных крысах-самцах массой 180-220 г разводки питомника РАМН «Рапполово» (Ленинградская обл.). Содержание, питание, уход за животными и их выведение из эксперимента осуществляли в соответствии с требованиями «Правил проведения работ с использованием экспериментальных животных» (приложение к Приказу Минздрава СССР от 12.08.1977 г. № 755).

Рентгеновское облучение мышей осуществляли на установке РУМ-17 при напряжении 180 кВ, силе тока 15 мА, фильтре 0,5 мм Сu + 1,0 мм Al, фокусном расстоянии 70 см, мощности дозы 54 Р/мин, направлении облучения: спина–грудь. Внешнее острое -облучение мышей осуществляли на установке ИГУР-1 с изотопом 137Cs; мощность экспозиционной дозы составляла 130 Р/мин, кожно-фокусное расстояние 1 м, облучение двухстороннее боковое.

Внешнее пролонгированное (мощность дозы – 1 Р/мин, время экспозиции – 16 ч) -облучение в дозе 10 Гр проводилось с помощью -установки с источником 60Со, расположенном на расстоянии 161 см от поверхности тела лабораторных животных. Сочетанное внешнее и внутреннее радиационное воздействие проводили путем инкорпорации крысам 239Pu, 137Cs и 90Sr сразу после окончания внешнего пролонгированного -облучения в дозе 8 Гр. Суммарная удельная активность вводившихся крысам радионуклидов позволила обеспечить формирование к 30 сут опыта дозы внутреннего облучения 2 Зв, а эффективная доза сочетанного облучения составила 10 Зв.

Моделирование фракционированного радиационного воздействия осуществляли на установке РУМ-17. Животных облучали один раз в сутки в дозе 0,5 Гр в течение 50 дней до набора суммарной дозы облучения 25 Гр.

Дозиметрический контроль условий облучения осуществлялся расчетным и ферросульфатным методом с последующей оценкой результатов на спектрофотометре. Кроме того, в ходе каждого облучения животных проводилась физическая дозиметрия с помощью индивидуального дозиметра ИД-11 с последующей оценкой показаний прибора на аппарате ГО-32.

Наблюдение за животными, подвергнутыми острому рентгеновскому и -облучению, пролонгированному -облучению, сочетанному внешнему и внутреннему облучению, фракционированному облучению осуществляли в течение 30 сут после окончания радиационного воздействия.

В работе использовался стандартный фармакопейный препарат “Беталейкин” – ампулированный лиофилизированный рекомбинантный ИЛ-1 человека с добавлением в качестве стабилизатора человеческого сывороточного альбумина, созданный и выпускаемый Государственным научно-исследовательским институтом особо чистых биопрепаратов (г. Санкт-Петербург). Рекомбинантный интерлейкин-1, представляющий собой точную копию эндогенного ИЛ-1 человека, прошел все требуемые Фармакологическим комитетом МЗ РФ испытания и приказом Министра здравоохранения РФ № 51 от 18.02.1997 г. разрешен к клиническому применению. Использованная в работе серия препарата прошла биотест и по своей биологической активности была идентична предыдущим сериям.

Мышам препарат, разведенный на физиологическом растворе в объеме 0,2 мл, вводился внутрибрюшинно в дозе 50 мкг/кг (1 мкг/особь) однократно. Крысам препарат, разведенный в 0,2 мл физиологического раствора, вводился внутрибрюшинно в дозе 1 мкг/кг (200 нг/особь) однократно. Животные контрольных групп вместо препарата ИЛ-1 получали физиологический раствор в том же объеме и в те же сроки, что и животные опытных групп.

Оценку радиомодифицирующих свойств рекомбинантного ИЛ-1 проводили по разработанной нами схеме, которая включала последовательное изучение критериев выживаемости облученных животных, параметров радиочувствительности гемопоэтических клеток костного мозга, количества клеток циркулирующего пула периферической крови, показателей функционально-метаболического статуса нейтрофильных гранулоцитов крови.

Изучение выживаемости и средней продолжительности жизни экспериментальных животных проводили общепринятыми методами. По полученным результатам оценки выживаемости при дозах СД50/30 рассчитывали фактор изменения дозы (ФИД) и процент защиты препарата интерлейкина-1.

Оценку числа и функциональной активности стволовых кроветворных клеток осуществляли методами эндогенного и экзогенного колониеобразования [Till J.E., McCulloch E.A., 1961] по количеству колоний, выросших на селезенках мышей на 9 сут после облучения. Общее количество лейкоцитов определяли меланжерным методом с последующим подсчетом клеток в камере Горяева. Для исследования лейкоцитарной формулы применяли способ быстрой окраски мазков крови краской Романовского [Альтгаузен А.Я., 1964]. Суммарное цитохимическое выявление катионных белков в нейтрофилах проводили с использованием лизосомально-катионного теста [Пигаревский В.Е., 1988]. Определение уровня липидов осуществляли с использованием судана черного Б [Sheehan H.L., Storey G.W., 1947]. Оценку щелочной фосфатазы проводили методом азосочетания [Kaplow L.S., 1955]. Цитохимическое выявление миелопероксидазы осуществляли методом R.C. Graham, M.J. Karnovsky (1966).

Кроме того, в исследовании приняли участие 6 практически здоровых мужчин в возрасте 27-32 года, пробы периферической крови которых использовались для изучения реакций лейкоцитов при облучении in vitro после введения им препарата рекомбинантного интерлейкина-1. Исследования на здоровых людях выполнялись с информированного согласия испытуемых и соответствовали этическим нормам Хельсинской декларации 2000 года. Фармакопейный препарат ИЛ-1 «Беталейкин», предварительно разведенный физиологическим раствором, вводился людям внутривенно капельно в дозе 5 нг/кг в течение 3-х часов. Оценку реакций лейкоцитов у испытуемых проводили до введения препарата, через 3, 6 и 24 ч после начала введения ИЛ-1.

Облучение проб периферической крови людей in vitro проводилось на установке РУМ-17 при напряжении 180 кВ, силе тока 15 мА, фильтре 0,5 мм Cu + 1,0 мм Al, фокусном расстоянии 70 см, мощности дозы 35,5 Р/мин. Лейкоциты периферической крови обследованных людей исследовали до облучения и непосредственно после радиационного воздействия. Дозиметрический контроль осуществляли расчетным методом и с помощью дозиметра ИД-11.

Pages:     | 1 || 3 | 4 |   ...   | 9 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»