WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 || 3 | 4 |

Эксперименты на лабораторных животных были выполнены на 201 кролике породы «Шиншилла» обоего пола массой 2,5 – 4 кг. Количество циркулирующей крови у данных животных составляет по разным данным от 5,45% до 7,69 % массы тела. Этот факт обуславливает возможность проводить опыты сопровождающиеся кровопотерей до 40 мл крови без нарушения гемостазиологических требований. Кроме того, толерантность тромбоцитов кролика к различным лекарственным средствам близка к таковым у человека, что обуславливает схожую реакцию со стороны клеточного гемостаза на изучаемые лекарственные вещества.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследование специфической фармакологической активности препарата «НовоСэвен» в эксперименте у интактных кроликов и при индуцированной коагулопатии

В настоящее время все чаще применяются продукты генно-инженерных технологий, которые становятся альтернативой белкам из донорской крови. В результате серии научных исследований появилась новая технология остановки кровотечений с помощью препарата «НовоСэвен» – рекомбинантного активированного фактора свертывания VII (рФVIIa).

В соответствии с полученными данными клинического применения рФVIIa при острых кровотечениях и в хирургической практике определено, что наиболее эффективной является доза 90 мкг/кг.

В настоящем разделе работы была поставлена задача исследовать гемостатическую активность препарата «НовоСэвен» в эксперименте у интактных кроликов и при индуцированной коагулопатии. Во всех экспериментах по исследованию гемостатической активности данный препарат вводился в дозе 90 мкг/кг.

Коагуляционная активность препарата «НовоСэвен»

В ходе экспериментов было показано, что препарат «НовоСэвен» дозозависимо влияет на время свертывания дефицитной по фактору VII плазмы крови человека. Время образования фибринового сгустка составило 69,5±5,1; 81,0±6,4; 102,4±4,8; 143,4±8,9 сек при использовании рФVIIa в концентрации 1000; 100; 10 и 1 нг/мл, соответственно. При проведении контрольного исследования было установлено, что при инкубировании дефицитной по фактору VII плазмы с одним растворителем рФVIIa время образования фибринового сгустка составляло 262,8 сек.

Влияние препарата «НовоСэвен» на основные коагулогические показатели ex vivo

В данной серии экспериментов было исследовано влияния препарата «НовоСэвен» на основные показатели свертываемости крови при его внутривенном введении кроликам в дозе 90 мкг/кг. Показано, что через 15 и 60 мин после внутривенного введения «НовоСэвен» в дозе 90 мкг/кг укорачивалось ПВ и значительно возрастала активность ФVII по сравнению с исходной его активностью. Другие показатели коагулограммы (АЧТВ, ТВ, концентрация фибриногена) в динамике не менялись, без изменений остались также число и агрегация тромбоцитов в течение всего периода наблюдений.

Исследование гемостатической активности препарата «НовоСэвен» в эксперименте на животных

Для изучения гемостатической активности препарата «НовоСэвен» было определено время остановки кровотечения и измерен объем кровопотери в остром эксперименте на двух группах кроликов. Животным первой группы внутривенно вводился физиологический раствор (0,9% раствор хлорида натрия) в объеме, равном объему растворителя препарата «НовоСэвен» (контрольный эксперимент). Животным второй группы был введен препарат «НовоСэвен» в дозе 90 мкг/кг массы тела.

У животных первой группы через 60 мин после введения физраствора время остановки кровотечения было сокращено в среднем на 4,3% от исходных значений, а к концу наблюдения (через 180 мин) время остановки кровотечения достигало 94,6±7,1% от исходного уровня. При введении животным препарата «НовоСэвен» наблюдалось укорочение времени остановки кровотечения, через 60 мин. При этом прослеживалась аналогичная динамика изменения объема кровопотери на протяжении всего эксперимента. В контрольной группе животных данный параметр оставался в диапазоне исходных значений. Таким образом, в эксперименте на животных был продемонстрирован гемостатический эффект препарата «НовоСэвен» на протяжении первых 3-х часов после его внутривенного введения.

Исследование способности препарата «НовоСэвен» купировать гепарин-индуцированную гипокоагуляцию

Для демонстрации антикоагулянтного действия гепарина мы использовали такие показатели коагулограммы как АЧТВ и в ВСЦК. Первой группе кроликов внутривенно вводился гепарин в дозе 500 МЕ/кг (контрольная группа), второй группе (опытная группа) помимо гепарина проводилась инфузия препарата «НовоСэвен» в дозе 90 мкг/кг (инъекция препарата «НовоСэвен» производилась спустя 5 минут после введения гепарина).

Полученные данные (табл. №1) показали, что через 30 мин после инфузии гепарина в крови обеих сравниваемых групп животных произошло удлинение АЧТВ. Через 60 минут данный показатель у кроликов, которым вводили только гепарин, максимально удлинился и достиг в среднем 210 сек. В то же время бедная тромбоцитами плазма животных, получавших как гепарин, так и «НовоСэвен», показала укорочение данного показателя (до 68 сек), а через 120 мин данный показатель составил 25 сек, при этом в контрольной группе АЧТВ составило 36 сек.

Таблица №1

Влияние препарата «НовоСэвен» на длительность свертывания плазмы и крови у кроликов с гепарин-индуцированной коагулопатией, (Х+m)

Группы

животных

Временные

экспериментальные

точки

Контрольная группа

(Гепарин 500 МЕ/кг)

Опытная группа

(Гепарин 500 МЕ/кг

+

«НовоСэвен» )

АЧТВ,с (n=9)

ВСЦК, с

(n=5)

АЧТВ, с

(n=6)

ВСЦК, с

(n=5)

Исходные данные

17,2±1,7

139±10

16,9±1,9

139±10

Через 30 мин после введения

193,7±10,4

>1800

176,2±7,5

>1800

Через 60 мин после введения

210,4±9,0 *

>1800*

68,5±5,9 *

1583±112*

Через 90 мин после введения

70,7±7,2 *

1562±98*

36,4±6,2 *

1269±83*

Через 120 мин после введения

36,3±2,9 *

1029±107

25,1±4,1 *

1027±103

Через 180 мин после введения

21,2±2,3

431±20

21,1±2,6

463±31

* - достоверное различия между соответствующими данными в одном временном интервале при р<0,05

Схожие по своей динамике и направленности данные были получены и при исследовании образцов крови сравниваемых групп кроликов по методике ВСЦК.

Анализ полученных данных позволяет заключить, что введение препарата «НовоСэвен» животным с гепарин-индуцированной коагулопатией в значительной мере нейтрализует антикоагулянтное действие гепарина.

Исследование способности препарата «НовоСэвен» купировать варфарин-индуцированную гипокоагуляцию

В следующей серии экспериментов исследована способность препарата «НовоСэвен» нейтрализовать коагулопатию обусловленную медикаментозным снижением синтеза в печени факторов протромбинового комплекса – VII, IX, X и II. Коагулопатию у кроликов вызывали с помощью перорального введения антикоагулянта непрямого действия - варфарина в дозе 0,15 мг/кг массы тела, что соответствовало максимальной суточной дозе препарата при лечении больных. Животные получали варфарин на протяжении 3 дней.

Для иллюстрации действия антикоагулянта проводилось исследование ВСЦК и ПВ бедной тромбоцитами плазмы. В остром эксперименте определяли время остановки кровотечения и объем кровопотери у животных, получавших варфарин (контрольная группа) или комбинацию варфарина с препаратом «НовоСэвен». Последний вводился внутривенно в дозе 90 мкг/кг (опытная группа).

Результаты исследования показали, что по окончанию перорального введения варфарина у экспериментальных животных наступало состояние гипокоагуляции, проявляющееся удлинением ВСЦК с 225 сек до 571 сек и ПВ с 10,2 сек до 15,2 сек. Введение препарата «НовоСэвен» животных с варфарин-индуцированной гипокоагуляцией на временном экспериментальном интервале в 30 минут приводило к укорочению ПВ, данный показатель оставался стабильно коротким в течение трех часов наблюдения.

Гемостатическая активность препарата «НовоСэвен» при его введении животным с варфарин-индуцированной гипокоагуляцией проявилась сокращением времени остановки кровотечения по сравнению с аналогичным показателем в контрольной группе на протяжении всего периода наблюдений. При оценке объема потерянной крови в данных экспериментах была установлена похожая тенденция. Спустя 60 мин после введения препарата «НовоСэвен» объем кровопотери снизился в 2,6 раза по сравнению с таковым в контрольной группе.

Исследование и анализ специфической фармакологической активности отечественного препарата рФVIIa на интактных кроликах и при экспериментальной коагулопатии

В настоящем разделе работы проводилось исследование специфической фармакологической активности образцов отечественного рекомбинантного активированного фактора VII (рФVIIa), предназначенного для внутривенного введения, и представлен сравнительный анализ активности отечественных образцов рФVIIa с препаратом «НовоСэвен». Исследованные образцы рФVIIa были предоставлены Институтом биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН.

Коагуляционная активность образцов отечественного рФVIIa

Исследовалась коагуляционная активность 14 серий отечественного рФVIIa. Исследования проводили в диапазоне начальных концентраций отечественного рФVIIa в дефицитной по фактору ФVII плазме крови от 1 до 1000 нг/мл. В качестве эталона для сравнения исследуемого параметра использовали разведения препарата «НовоСэвен» в концентрациях, эквивалентных концентрациям отечественного рФVIIa.

Задачей данного исследования явилось выявление серий отечественного рФVIIa которые бы совпадали или были бы максимально близки по значениям времени образования фибринового сгустка под действием препарата «НовоСэвен». По результатам работы было выделено несколько серий отечественного рФVIIa, обладающих сопоставимой фармакологической активностью с препаратом «НовоСэвен». В данную группу вошли серии: 1, 2, 3, 4.

Влияние образцов отечественного рФVIIa на показатели гемостаза в эксперименте ex vivo

Интактным животным внутривенно вводились растворы разных серий отечественного рФVIIa или препарата «НовоСэвен» (вещество сравнения). Доза действующего вещества составляла 90 мкг/кг массы тела. Оценку основных параметров коагулограммы производили спустя 60 минут после инфузии рФVIIa.

В результате проделанной работы выяснилось, что все исследуемые серии отечественного рФVIIa вызывали увеличение активности ФVII (в среднем на 38,8%) и укорочение ПВ (в среднем до 5,4 сек) при их внутривенном введении кроликам в дозе 90 мкг/кг. В тоже время инфузия препарата «НовоСэвен» приводила к сопоставимым сокращениям значений ПВ (до 5,3 сек) и возрастанию активности ФVIIa (на 36,9%) в плазме животных. При этом показатели коагулограммы такие как АЧТВ, тромбиновое время, концентрация фибриногена, число и агрегационныя активность тромбоцитов достоверно не изменялись.

Исследование гемостатической активности отечественных образцов рФVIIa в эксперименте на животных

В данном разделе работы проводилось исследование гемостатической активности четырех серий отечественного ФVIIa. (табл. №2)

Сравнение результатов фармакологического действия четырех серий отечественного рФVIIa показало стойкий гемостатический эффект уже на 30 минуте наблюдения. При этом сокращение времени остановки кровотечения составляло от 34,3 до 57,1%. Через 60 минут после инъекции сокращение времени кровотечения достигало от 48,4 до 55,7%. При анализе результатов объема кровопотери выявлено стойкое уменьшение этого параметра, коррелирующее с сокращением времени остановки кровотечения. Уменьшение объема кровопотери через 30 и 60 минут наблюдения составляло 42,5-64,1% и 52,8-70,8%, соответственно. Показатели времени остановки кровотечения и объема кровопотери отличались при исследовании различных серий рФVIIa, но оставались соизмеримыми с результатами исследования препарата «НовоСэвен».

Таблица №2

Влияние рФVIIa (отечественные образцы, препарат «НовоСэвен») и физраствора на время остановки кровотечения и объем кровопотери в эксперименте на животных, (X±m)

Вводимое вещество

Временные экспериментальные точки

До введения

30 мин

60 мин

120 мин

180 мин

Время остановки кровотечения, %

рФVIIa серия №1

(n=4)

100

54,6±9,5*

Pages:     | 1 || 3 | 4 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»