WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     || 2 | 3 | 4 |

На правах рукописи

ТЕР-АРУТЮНЯНЦ АРТЕМ АНДРЕЕВИЧ

СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ РАЗЛИЧНЫХ ГЕМОСТАТИЧЕСКИХ СРЕДСТВ МЕСТНОГО И СИСТЕМНОГО ДЕЙСТВИЯ

14.00.25 фармакология, клиническая фармакология

14.00.29. - гематология и переливание крови

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

Москва - 2009

Работа выполнена в учреждении Российской академии медицинских наук Гематологическом научном центре РАМН

Научные руководители:

доктор медицинских наук, профессор Андрей Павлович Момот

кандидат медицинских наук Галина Геннадьевна Белозерская

Официальные оппоненты:

ЗДН РФ, доктор медицинских наук, профессор Рошен Джафарович Сейфулла

Доктор медицинских наук, профессор Марина Васильевна Леонова

Ведущая организация:

Государственное учреждение научно-исследовательский институт фармакологии
им. В.В. Закусова РАМН

Защита состоится «1» июня 2009 года в 14.00 часов на заседании диссертационного совета Д 208.072.01 при Российском государственном медицинском университете Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию по адресу: 117997, г. Москва, ул. Островитянова д. 1.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО РГМУ Росздрава (117997, г. Москва, ул. Островитянова д. 1).

Автореферат разослан «30» апреля 2009 года

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор медицинских наук, профессор

Джанашия П.Х.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы исследования. Профилактика и остановка кровотечений имеют важнейшее значение в различных областях клинической медицины, прежде всего в гематологии (Воробьев А.И. 2005; Giangrande P. 2005; Yanada M., и соавт. 2007), хирургии (Fraser I.S., и соавт. 2008), травматологии (Lienhart H.G, и соавт. 2008), онкологии (Lichtiger B. and Huh Y. 2008), акушерстве (Mercier F.J. и соавт. 2008) и др. в связи с увеличением числа больных с геморрагическими проявлениями, широким использованием антикоагулянтов (гепаринов и препаратов кумаринового ряда) (Akolu E. и соавт. 1994), внедрением в медицинскую практику лекарств, обладающих наряду с необходимыми терапевтическими эффектами гепатотоксическим действием.

Особую роль играет разработка гемостатических средств в медицине катастроф и для оказания помощи при критических и неотложных состояниях в условиях боевых действий (Blackbourne L.H. 2008; Spinella P.C. 2008). Развитие военной науки и техники неизбежно сопровождается появлением новых видов поражений, увеличением их количества, усилением тяжести патологического процесса, в том числе геморрагических осложнений при огнестрельных ранениях, воздействиях ядерного и химического оружия (Hess J.R, Holcomb J.B 2008; Чазов Е.И, и соавт. 1984).

Актуальность данного исследования связана и с тем, что зачастую препараты для остановки кровотечений, традиционно применяемые в медицинской практике, недостаточно эффективны и неспособны привести к действенному снижению кровопотери, что опасно развитием геморрагического шока, острого ДВС-синдрома, ишемии и некрозов жизненно важных органов. Это обусловлено широким разнообразием причин, способствующих возникновению гематомного и/или микроциркуляторного типа кровоточивости (Баркаган З.С., Момот А.П., 2001). Клинический опыт показывает, что при плановых хирургических вмешательствах на печени, почках, селезенке при целостности магистральных артерий и вен капиллярно-паренхиматозные кровотечения являются основными источниками операционной кровопотери (Абакумов М.М. и соавт. 2002; Schuster R, и соавт. 1990; Jacobson L.E, и соавт. 1992). Для их остановки прибегают к местной гипотермии, используют лазерное облучение кровоточащих тканей (Koshelev V.N, Chalyk IuV. 1992), аппликацию жидкого азота, термо- (Schuster R, и соавт. 1990) и ультразвуковую коагуляцию (Vaezy S, и соавт. 2004), парентерально вводят свежезамороженную плазму и ее продукты - факторы свертывания крови (изолировано или в различных комбинациях), амбен, эпсилон-аминокапроновую кислоту, ингибиторы сериновых протеиназ (трасилол, гордокс), адроксон, этамзилат, серотонин, окситоцин, питуитрин и ряд других препаратов, обладающих различными механизмами остановки кровотечений (Баркаган З.С., Момот А.П. 2001; Tien H, и соавт. 2007; Ranucci M. и соавт. 2008; Hedner U, и соавт. 2007; Fraser I.S. и соавт. 2008 ; Franchini M. И соавт. 2007). В числе средств, обладающих местным гемостатическим эффектом, обычно используют тромбин, фибриноген, фактор XIII, апротинин, фибриновые и полимерные пленки и композиции (Абоянц Р.К. и соавт. 1999; Mannucci P.M., 199 8).

Тем не менее, появление новых, перспективных препаратов и композиций, обладающих системным или местным гемостатическим действием требует углубленного изучения их эффективности в контролируемых (модельных) условиях эксперимента, что и было выполнено в настоящей работе.

Цель исследования: Сравнительное исследование специфической фармакологической активности различных гемостатических средств системного и местного действия.

Задачи исследования:


  1. Провести анализ прокоагуляционной местной и системной гемостатической активности препарата «НовоСэвен» в модельных экспериментах у интактных кроликов и в условиях коагулопатии, вызванной гепарином и варфарином.
  2. Исследовать специфическую фармакологическую активность образцов отечественного активированного рекомбинантного фактора VII (рФVIIa) в условиях экспериментальной модели на интактных кроликах и при гипокоагуляции, обусловленной гепарином и варфарином.
  3. Провести сравнительный анализ результатов исследования гемостатической активности препарата «НовоСэвен» и экспериментальных серий нового отечественного рФVIIa.
  4. Провести сравнительное исследование местной кровоостанавливающей способности средств различного химического строения и механизма действия при их аппликации на раневую поверхность печени кроликов.

Научная новизна

  1. Оценена в эксперименте на кроликах гемостатическая активность отечественного рФVIIa при его внутривенном введении в дозе 90 мкг/кг в сравнении с «НовоСэвен»
  2. Выявлена высокая эффективность отечественного рФVIIa в условиях экспериментальной коагулопатии, обусловленной наиболее распространенными в клинической практике антикоагулянтами - гепарином и варфарином
  3. Сочетание системного и местного воздействия отечественного рФVIIa приводит к более результативному кровоостанавливающему эффекту по сравнению с применением его или системно, или местно
  4. Впервые в эксперименте на модели капиллярного кровотечения оценена местная гемостатическая активность аппликатов, включающих факторы свертывания крови: «НовоСэвен», отечественный препарат рФVIIa, растворимый фибрин-мономер, комбинация фибрин-мономера с эпсилон-аминокапроновой кислотой, а также активаторов факторов свертывания крови: эхитокс, либетокс, анцистрон.

Практическая значимость работы

Установлено, что отечественный рФVIIa проявляет в условиях внутривенного введения близкую гемостатическую активность к препарату «НовоСэвен», что свидетельствует о целесообразности его дальнейших доклинических и клинических испытаний.

Включение отечественного рФVIIa в состав гемостатических средств, предназначенных для местного применения (аппликации), может расширить спектр использования данного рекомбинантного белка.

Применение белка крови фибрин-мономера самостоятельно или в комплексе с эпсилон-аминокапроновой кислотой может лечь в основу разработки гемостатической композиции, предназначенной, для остановки паренхиматозных кровотечений при местном применении.

Положения, выносимые на защиту:

  1. Внутривенное введение препарата «НовоСэвен» в дозе 90 мкг/кг интактным кроликам сокращает протромбиновое время (ПВ) свертывания плазмы, повышает активность ФVII в плазме крови и сокращает время остановки кровотечения и объем кровопотери.
  2. Внутривенное введение отечественного рФVIIa приводит к сокращению значений ПВ и возрастанию активности ФVII в плазме животных. Введение отечественного рФVIIa сокращает время остановки кровотечения и объем кровопотери.
  3. При внутривенном введении в дозе 90 мкг/кг отечественный рФVIIa обладает сопоставимой специфической фармакологической активностью с препаратом «НовоСэвен»
  4. Препарат «НовоСэвен» и отечественный рФVIIa способны купировать действие гепарина, устранять антикоагулянтый эффект варфарина, уменьшая время остановки кровотечения и объем кровопотери.
  5. Местным гемостатическим действием обладают белок крови фибрин-мономер, отечественный рФVIIa и препарат «НовоСэвен», а также эхитокс.

Личный вклад автора

Автором была проведена серия экспериментов на 201 кролике породы «Шиншилла» по изучению специфической фармакологической активности средств системного и местного действия (43 образца). Диссертантом освоены и лично проводились современные методики исследования системы гемостаза, в том числе и на моделях коагулопатии: определение основных параметров активности системы гемостаза, оценка активности образцов рФVIIa in vitro и ex vivo, а также определение местной и системной гемостатической активности на модели капиллярно-паренхиматозного кровотечения в эксперименте.

Апробация диссертации

По материалам исследования были сделаны доклады на 12-ом Всероссийском съезде сердечно сосудистых-хирургов (Москва 2006) на тему «Оценка гемостатического действия рекомбинантного FVIIa (NovoSeven) в эксперименте», Всероссийской конференции молодых ученых (Москва 2008) - «Специфическая фармакологическая активность рФVIIa (НовоСэвен) в условиях экспериментальной гипокоагуляции» и Всероссийской конференции с международным участием «Тромбозы, кровоточивость ДВС-синдром: современные подходы к диагностике и лечению» - «Исследование гемостатической активности отечественного рФVIIa на модели тромбоцитопении при острой лучевой болезни у кроликов».

Апробация диссертации проведена на заседании проблемной комиссии «Патология гемостаза» (протокол №15 от 29.09.2008).

Публикации: по теме диссертации опубликовано 11 печатных работ в отечественной литературе, в том числе 3 работы в журналах, рекомендованных ВАК РФ для публикации материалов диссертационных исследований.

Объем и структура работы

Диссертация изложена на 168 страницах машинописного текста, иллюстрирована 36 таблицами и 45 рисунками. Работа состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, собственных результатов, заключения, выводов и списка литературы, включающего 241 источник, в том числе 77 отечественных и 164 зарубежных.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

В экспериментах in vitro исследовалась и сопоставлялась удельная коагуляционная активность образцов отечественного активированного фактора свертывания крови VII (рФVIIa) с активностью зарубежного препарата рФVIIa "NovoSeven®" выпускаемого в Дании фирмой «Novo Nordisk» (далее «НовоСэвен»).

В исследованиях ex vivo, были охарактеризованы плазменная и клеточная составляющие системы гемостаза у интактных лабораторных животных при введении им отечественного или зарубежного рФVIIa. Также исследование фармакологической активности отечественного рФVIIа и препарата «НовоСэвен» проводили на животных с фармакологически обусловленной гипокоагуляцией вызываемой варфарином и гепарином.

Плазменный гемостаз изучали с помощью определения времени свертывания цельной крови (ВСЦК) по методу Ли–Уайт и активированного частичного тромбопластинового времени - АЧТВ (отражающего интегральное состояние гемостаза после контактной активации), протромбинового времени - ПВ (отражающего суммарную активность факторов протромбинового комплекса, продуцируемых печенью), тромбинового времени - ТВ и концентрации фибриногена (отражающих уровень фибриногена и состояние финального этапа фибринообразования). Была определена активность ФVII в плазме животных по J. Morrissey. Исследована агрегационная способность тромбоцитов по методу G. Born, определено число тромбоцитов по методу B.Walkowiak и соавторов (данные методы отражают состояние тромбоцитарного гемостаза, наиболее быстро реагирующего на внешние воздействия).

Заключительной частью работы стали серии острых экспериментов in vivo, в которых исследования были направлены на изучение гемостатической активности рФVIIa при его внутривенном введении на моделях паренхиматозного кровотечения. Моделированное кровотечение вызывалось у интактных животных с нормальной функцией гемостаза, а также у животных с спровоцированной гипокоагуляцией, вызываемой непрямым антикоагулянтом (варфарином). С помощью специального приспособления, производили резекцию печени. Остановку развившегося капиллярно-паренхиматозного кровотечения выполняли путем равномерного наложения на всю площадь раневой поверхности марлевого тампона. Время остановки кровотечения определяли по секундомеру. Критерием оценки момента остановки кровотечения являлось полное отсутствие проникновения крови через поверхность и края наложенного марлевого тампона. Настоящий метод описан в «Руководстве по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» под редакцией В.П. Фисенко.

Pages:     || 2 | 3 | 4 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»