WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 || 3 |

Содержание пепсиногена изучали у больных язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки в сыворотке крови, слюне, моче, поте и кале, взятие которых проводили в одно и то же время суток в одинаковых условиях (утром, натощак). Забор крови (в количестве 5-7 мл) для приготовления сыворотки проводили из локтевой вены. Сбор слюны (в количестве 3 мл) осуществляли после двухкратного полоскания полости рта дистиллированной водой (Кадиров Ш.К., 1994). Сбор мочи проводили общепринятым методом в течение суток. Потовая жидкость собиралась с кистей рук в полиэтиленовые пакеты с дистиллированной водой (5 мл) в течение 1 часа (Камакин Н.Ф., 1985). Для приготовления копрофильтрата 1 г исследуемого кала смешивали с 10 мл дистиллированной воды и пропускали через бумажные фильтры (Лопатина Л.А., 1998). Определение содержания пепсиногена в биосредах у больных язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки проводили по протеолитической активности при рН = 1,5-2,0 по тирозину спектрофотометрически (Кост Е.А., 1975); в качестве белкового субстрата использовалась лиофильно высушенная плазма крови; результаты исследований выражали в тир.ед/мл. Результаты этих исследований у больных ЯБДК сравнивали с данными, полученными у 44 практически здоровых детей.

С целью объективной оценки функциональной активности гемо-саливарного, гемо-ренального, гемо-эккринного и гемо-интестинального барьеров по отношению к пепсиногену у наблюдаемых больных язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки определяли коэффициент распределения (КР), который представляет собой отношение содержания исследуемого вещества в сыворотке крови к содержанию его в других биосредах (Судаков К.В., 1981). Во внимание принимали только те значения КР у больных ЯБДК, которые отличались значительно (в 1,5 раза и больше) от его величины у 44 практически здоровых детей.

Типирование лимфоцитов по антигенам HLA I класса выполнялось у 68 наблюдаемых больных язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки в стандартном микролимфоцитотоксическом тесте (Terasaki P. c соавт., 1970) с помощью гистотипирующих сывороток, выпускаемых ЗАО «Гисанс» (г. Санкт - Петербург), которые позволяют идентифицировать 15 антигенов локуса А и 32 антигена локуса В. Лимфоциты для постановки микролимфоцитотоксической пробы выделяли из гепаринизированной крови методом градиентного центрифугирования с помощью раствора фиколл-верографина; пробу выполняли в микропланшетах Терасаки.

Для выявления сдвигов иммунологической реактивности у 62 больных язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки в первые 1-2 дня пребывания в стационаре и за 1-2 дня перед выпиской исследовали содержание CD3-, CD4-, CD8- и CD20-лимфоцитов в крови, уровни иммуноглобулинов (Ig) G, A, M и концентрацию циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) в сыворотке крови, фагоцитарную активность нейтрофилов (ФАН), фагоцитарный индекс (ФИ) и тест восстановления нитросинего тетразолия (НСТ – тест) в цитоплазме нейтрофилов. Результаты исследования показателей иммунитета у больных ЯБДК сравнивали с данными, полученными у 118 практически здоровых детей.

Содержание CD3-, CD4-, CD8- и СD20-лимфоцитов в крови у больных язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки определяли методом непрямой иммунофлюоресценции с помощью моноклональных антител, выпускаемых Нижегородским предприятием «Препарат». Результаты исследования содержания популяций и субпопуляций лимфоцитов в крови выражали в процентах и абсолютных числах. Иммунорегуляторный индекс (CD4/CD8) представлял собой отношение процентного содержания указанных клеток в крови.

Уровни IgG, IgA, IgM в сыворотке крови у больных язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки определяли методом радиальной иммунодиффузии с использованием моноспецифических антисывороток, выпускаемых Нижегородским предприятием по производству бактерийных препаратов, по прилагаемым инструкциям; результаты выражали в г/л. Концентрацию ЦИК в сыворотке крови у больных язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки определяли унифицированным методом преципитации с раствором полиэтиленгликоля (Белокриницкий Д.В., 1987).

ФАН у больных язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки оценивали, используя в качестве фагоцитируемого объекта частицы латекса, по методу Потаповой С.Г. с соавт. (1977); результаты выражали в процентах. ФИ рассчитывали как среднее количество частиц латекса, поглощённое одним фагоцитом. При постановке НСТ-теста активацию нейтрофилов проводили латексом, подсчитывали количество клеток, образующих гранулы диформазана (Петров Р.В. с соавт., 1992); результаты НСТ-теста выражали в процентах.

Молекулярное типирование HLA-генов локусов DRB1 и DQB1 проводилось у 44 больных язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки методом полимеразной реакции с набором сиквенс-специфических праймеров (НПФ «ДНК-Технология», г. Москва). Используемый метод (Алексеев Л.П. с соавт., 1997) включает в себя серию амплификаций различных участков HLA-генов II класса и называется PCR-mSSR (polymerase-chain reaction sequence specific primer mixed). Набор реагентов позволяет выявлять 14 аллелей гена DRB1 и 12 аллелей и групп аллелей гена DQB1. ДНК выделяли из мононуклеаров периферической крови путём трёхкратной обработки лизирующим буфером и центрифугированием; выделенную ДНК амплифицировали в полимеразной цепной реакции.

Расчёт иммуногенетических параметров осуществляли с помощью формул, принятых в популяционной статистике. Частоту встречаемости изучавшихся антигенов определяли как процентное отношение индивидов, несущих антиген, к общему числу обследованных в группе (Зарецкая Ю.М., 1983). Частоту внутрилокусных сочетаний антигенов находили отдельно для локусов А и В, частоту межлокусных сочетаний антигенов рассчитывали по формуле Mattius P. с соавт. (1970). Для установления существенности различий в характере распределения HLA-антигенов в сравниваемых группах определяли критерий согласия (2) с поправкой на непрерывность вариаций; с помощью специальных математических формул 2 переводили в коэффициент достоверности различий (р). Для определения степени ассоциации язвенной болезни двенадцатиперстной кишки с иммуногенетическими параметрами вычисляли критерий относительного риска (RR); при нулевом значении одного из составляющих величину RR рассчитывали по формуле Haldane J. (Певницкий Л.А., 1988). Вместе с тем, при обработке материала HLA-типирования у больных язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки рассчитывали этиологическую фракцию (EF), характеризующую силу положительной HLA-ассоциации, и превентивную фракцию (PF), характеризующую силу отрицательной HLA-ассоциации (Svejgaard A., Ryder L.P., 1994).

Цифровой материал, полученный при фракционном исследовании желудочного сока, содержания пепсиногена в биосредах, показателей периферической крови и иммунологической реактивности у больных язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки обрабатывали методом вариационной статистики на персональном компьютере в программе Microsoft Excel-2007 с вычислением среднеарифметической величины (М) и среднеквадратической ошибки (m). Достоверность различий между сравниваемыми показателями (р) у больных ЯБДК и практически здоровых детей определяли по таблице Стъюдента-Фишера.

Математическую обработку результатов HLA-типирования у больных язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки выполняли на персональном компьютере с использованием специальной программы, составленной сотрудниками лаборатории иммуногематологии Кировского НИИ ГиПК. Контрольную группу в этих исследованиях составили 795 практически здоровых лиц – доноров крови, проживающих в г. Кирове и Кировской области.

Следует отметить, что имеющиеся в литературе данные по показателям функционального состояния желудка, периферической крови и иммунологической реактивности у практически здоровых детей, проживающих в разных регионах страны, несколько отличаются друг от друга. Это обстоятельство может быть обусловлено влиянием региональных климатогеографических, эндемических, экологических и социально-бытовых факторов. Поэтому в качестве контроля нами были использованы данные, полученные сотрудниками кафедры детских болезней Кировской ГМА и сотрудниками лаборатории иммуногематологии Кировского НИИ ГиПК при исследовании указанных показателей у детей соответствующего возраста I-II групп здоровья, проживающих в г. Кирове и Кировской области.

Результаты исследования и их обсуждение

Среди наблюдаемых нами детей с язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки мальчиков было 56%, девочек – 44%. Все больные являлись городскими жителями, большинство из них (64%) было из семей служащих. Продолжительность болезни у пациентов колебалась от 2 до 4 лет, рецидивы заболевания возникали 1-2 раза в год, что является признаком среднетяжёлого течения процесса. У большинства больных (68%) была выявлена наследственная отягощённость в отношении гастродуоденальной патологии; при этом 28% родителей больных детей сами страдали язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки или желудка. Формированию ЯБДК у наблюдаемых нами детей мог способствовать целый ряд неблагоприятных факторов: наличие токсикоза и разные заболевания матери во время беременности, наличие признаков анте- и интранатальной гипоксии, ранний перевод детей на смешанное и искусственное вскармливание, наличие в анамнезе перенесенных инфекционных заболеваний, аллергического диатеза, проявлений пищевой и лекарственной аллергии и др.

Все наблюдаемые больные ЯБДК поступали в стационар в фазе обострения заболевания с жалобами на боли в животе с локализацией в эпигастральной области (70%) или пилородуоденальной зоне (30%). В большинстве случаев боли в животе возникали у больных натощак, более чем у трети пациентов сильные боли в животе отмечались до приёма и после приёма пищи, а у ряда пациентов сильная боль в животе возникала в ночное время. Абдоминальный синдром почти у трети больных сопровождался рвотой, у половины больных – изжогой, более чем у четверти больных – метеоризмом, более чем у половины пациентов констатировались явления дисфагии. У всех больных отмечались изменения общего состояния, беспокойство и раздражительность, у большинства больных (85%) выявлялся красный, у остальных (15%) – белый дермографизм, почти у четверти больных отмечалась повышенная потливость ладоней. У больных ЯБДК выявлялась склонность к артериальной гипотензии, почти у половины больных выслушивался функциональной систолический шум на верхушке сердца, у многих больных (41%) констатировалась брадикардия, реже (32%) – тахикардия. Изменений на ЭКГ (неполная блокада правой ножки пучка Гиса, синусовая брадиаритмия и др.) обнаруживались у 74% больных. У больных отмечалась обложенность языка, констатировалось напряжение брюшных мышц при пальпации, выраженная болезненность в эпигастральной области или пилородуоденальной зоне, у отдельных больных отмечалось небольшое увеличение печени, у большинства пациентов выявлялись признаки гипомоторной или гипермоторной дискинезии желчного пузыря.

У всех наблюдаемых больных ЯБДК отмечались положительные или резко положительные результаты УДТ, выявлялось присутствие в сыворотке крови специфических IgG-антител к H.pylori. При фракционном исследовании у пациентов обнаруживались признаки повышения кислотообразующей функции желудка, повышение содержания пепсиногена в сыворотке крови, слюне, поте, и кале при снижении содержания пепсиногена в моче, повышение проницаемости мембран гемо-саливарного барьера и понижение проницаемости мембран гемо-ренального барьера для пепсиногена. Со стороны показателей периферической крови у больных выявлялось увеличение количества лейкоцитов, абсолютного количества палочкоядерных и сегментоядерных нейтрофилов, лимфоцитов, моноцитов и эозинофилов, повышение СОЭ.

При эндоскопическом исследовании у наблюдаемых пациентов в большинстве случаев (85%) обнаруживались единичные язвенные дефекты среднего диаметра (6-8 мм) с локализацией на передней или задней стенке луковицы двенадцатиперстной кишки, гораздо реже (15%) выявлялись множественные язвенные дефекты (в количестве от 2 до 5) среднего диаметра на слизистой оболочке луковицы двенадцатиперстной кишки. Вместе с тем у всех пациентов обнаруживались признаки дуоденита, а у 17% больных – плоские эрозии слизистой оболочки луковицы двенадцатиперстной кишки.

Таким образом, у наблюдаемых нами детей с язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки при поступлении в стационар отмечались клинические проявления, сдвиги клинико-лабораторных показателей и эндоскопическая картина, свойственные фазе обострения заболевания (I клинико-эндоскопическая стадия болезни).

Результаты, полученные в ходе иммуногенетических исследований, позволили выявить антигены главного комплекса гистосовместимости и их комбинации, с которыми ассоциировался высокий относительный риск развития язвенной болезни двенадцатиперстной кишки у детей (таблица).

Данные, приведенные в таблице, свидетельствуют о том, что представительство HLA-антигена II класса DRB1*01, внутрилокусных комбинаций HLA-антигенов I класса В5-В7, межлокусных комбинаций HLA-антигенов I класса А1-В13, А1-В27, А2-В18, А9-В18 и А19-В15 ассоциировалось с повышением относительного риска (в 2,22-7,79 раза) развития у детей язвенной болезни двенадцатиперстной кишки (RR = 2,22-7,79).

Таблица 1

HLA-ассоциации у детей с ЯБДК

HLA-антигены, внутрилокусные и межлокусные комбинации антигенов

RR

DRB1*01

B5-B7

A1-B13

A1-B27

A2-B18

A9-B18

A19-B15

2,22

4,63

5,71

2,35

4,57

4,70

7,79

Вместе с тем, проведенные исследования позволили выявить HLA-антигены II класса (DRB1*02 и DQB1*602-8), внутрилокусную комбинацию антигенов (А2-А9) и межлокусную комбинацию антигенов (А2-В16), с которыми ассоциировалась определённая резистентность к возникновению этого заболевания у детей (RR = 0,60-0,01).

У наблюдаемых больных язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки отмечались сдвиги иммунологической реактивности.

Pages:     | 1 || 3 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»