WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 |   ...   | 7 | 8 || 10 | 11 |   ...   | 12 |

При разработке сухойсреды для накопления и выделениягемокультур сальмонелл в качествеисходной использована рецептура средыРапопорта, содержащая в качествепитательной основы мясопептонный бульонили бульон Хоттингера. Однако в виду того,что они не выпускаются в виде сухихпрепаратов, были испытаны коммерческиепрепараты –сухой питательный бульон ипанкреатический гидролизат казеина.Исследования показали, что сухойпитательный бульон по накопительномуэффекту превосходил бульон Хоттингера имясопептонный бульон в 2,0-2,5 раза, апанкреатический гидролизат казеина - болеечем в 10 раз (р<0,05). Исходя из полученныхданных, при разработке сухой среды вкачестве основы использовали сухойпитательный бульон.

Одним из важныхкомпонентов питательной среды длявыделения гемокультур сальмонелл являетсяжелчь, которая подавляет бактерицидныесвойства крови и препятствует еесвертыванию, тем самым, создаваяблагоприятные условия для размножениябрюшнотифозных и паратифозных бактерий(С.А.Блинкин,1963). В разрабатываемой среде мызаменили нативную желчь эквивалентнымколичеством сухой желчи (1,0-1,2%).Установлено, что образцы сред с сухойжелчью по накопительному эффекту вотношении сальмонелл не отличались отсред, приготовленных с использованиемнативной желчи. Так, показательэффективности на среде, содержащейпитательный бульон и сухую желчь,составлял при посеве тест-штаммов S. enterica Typhi H901 – 10,2±1,2·105, S. entericaParatyphi A 525 –11,5±1,3·105,S. enterica Paratyphi B 506– 12,0·105, на среде с нативнойжелчью, соответственно – 9,9±1,4·105, 11,2±1,4·105, 12,2±1,5·105.

Для обеспечения в средечетких дифференцирующих свойств,определяемых по изменению ее окраски игазообразованию в процессе ростатест-штаммов, проведены исследования поизучению влияния различных индикаторов иуглеводов на дифференциацию сальмонелл.

Установлено, чтообразцы сред с маннитом (2%) и феноловымкрасным (0,004%) по сравнению с образцами,содержащими глюкозу (2%) и тот же индикатор,обладали более четкими дифференцирующимисвойствами по признаку кислотообразованияи по интенсивности газообразования, чтообъяснялось большим количеством кислыхпродуктов, образующихся при ферментацииманнита. Так, при наличии глюкозы рНсреды после инкубации посевов в течение 18-20ч составлял 6,3-6,5, а при внесении маннита- 5,5-5,8, что и обеспечивало более четкийпереход окраски из красной в желтую.

На основаниипроведенных исследований определеноптимальный состав сухой среды длянакопления, выделения и дифференциациигемокультур сальмонелл, содержащей в г/л:сухой питательный бульон-15,0, агар-1,5, желчьсухая-12,0, маннит-20,0, феноловый красный-0,04,натрий углекислый-0,3.

Характеристикабиологических свойств разработаннойсреды, свидетельствовала (табл. 13), что онаобладала значительным накопительнымэффектом и по данному показателюпревосходила жидкую среду Рапопорта в 2,5-3,0раза (р<0,05).

Полученные результатыподтверждены в модельных опытах при посевекрови, предварительно зараженнойтест-штаммами сальмонелл.

Таким образом,разработанная среда благодаря высокомунакопительному эффекту делает возможнымвыявление сальмонелл при минимальномсодержании их в крови, а также позволяетодновременно с обнаружением культурпровести их дифференциацию по тестугазообразования.

Таблица 13

Сравнительнаяхарактеристика биологических свойствразработанной среды для накопления ивыделения гемокультур сальмонелл припосеве тест-штаммов из разведений 10-7

Тест-штаммы

Разработанная среда

Среда Рапопорта

показатель эффектив-ности(M±m)

газообразо-вание

кислото-образование

(изменение цветасреды)

эффектив-ность (M±m)

газообразо-вание

кислото-образование

(изменение цветасреды)

S. entericaTyphi

Н901

14,4±1,4·105

-

+

5,2±1,2·105

-

+

S. entericaParatyphi

А525

17,0±1,5·105

+

+

5,6±1,5·105

+

+

S. entericaParatyphi

В506

18,0±1,5·105

+

+

7,0±1,2·105

+

+

Обозначения: (-) -отсутствие газа

(+) - наличие газа или изменение цветасреды

Использованиесконструированной сухой среды вклинической практике будет способствоватьповышению эффективности диагностикитифо-паратифозной инфекции, позволитстандартизировать метод выделениягемокультур сальмонелл и получатьсравнимые результаты в различныхлабораториях страны. Разработка защищенапатентом РФ №2175671.

Микробиологическиеисследования крови являются обязательнымипри подозрении на возможность развитиябактериемии и сепсиса. Эффективность этихисследований во многом зависит от качествапитательных сред.

Ранее нами совместно сВ.Г.Гореловой (2005; патент №2265654; патент№2267537) разработаны готовые к употреблениюпитательные среды для накопления ивыделения гемокультуры, содержащие вкачестве инактиватора сульфаниламидныхпрепаратов пара-аминобензойную кислоту.

В настоящее время,одним из препаратов выбора при этиотропнойтерапии бактериемии и сепсиса являютсябета-лактамные антибиотики (В.С.Савельев,Б.Р.Гельфанд, 2006; В.А.Руднов, С.Н.Ложкин,Ф.С.Галеев и др., 2003). Поэтому для устраненияантимикробного действия бета-лактамныхантибиотиков, которые могутприсутствовать в крови при проведенииантибактериальной терапии, среды длягемокультур должны содержатьспецифические инактиваторы,нейтрализующие антибактериальноедействие указанных препаратов.

В качествеинактиватора бета-лактамных антибиотиковиспользовали бета-лактамазу (Penicillinase,Cephalosporinase) производства фирмы «Sigma»(Реактивы для биохимии и исследований вобласти естественных наук, 2002-2003).

Для установления ееоптимальной инактивирующейконцентрации исходили из данныхлитературы о содержании бета-лактамныхантибиотиков в крови после введенияпрепаратов (П.Р.Марри, И.Р.Шей, 2006).

В разработанную средудля накопления и выделения гемокультур(патент №2265654) вводили бета-лактамныеантибиотики в максимальных концентрациях,согласно данным вышеуказанных авторов, ибета-лактамазу в диапазоне от 0,003 до 0,015 г/лсреды.

Установлено, чтофермент в концентрации 0,015 г/л полностьюинактивировал в среде 160 ед/млцефоперазона, 185 ед/мл цефазолина, 70 ед/млцефтазидима, 45 ед/мл цефотаксима, чтовыражалось в наличии визуально видимогороста тест-штаммов E.coli3912/41,K.pneumoniae 51, P.mirabilis 71/2, S.aureus FDA 209 P, S.epidermidis 14990,S.pyogenes Dick 1. На контрольнойсреде, содержащей только антибиотики, ростуказанных тест-штаммов не наблюдался.

На основанииполученных данных в состав известной средыдля накопления и выделения гемокультурдополнительно была введена бета-лактамазав концентрации 0,015 г/л.

В табл. 14 представленысравнительные данные по чувствительностии эффективности среды с бета-лактамазой иконтрольных сред в отношении основныхвозбудителей бактериемии и сепсиса.

По чувствительности иэффективности новая среда не уступалаконтрольной и превосходилатриптиказо-соевый бульон, рекомендованныйВОЗ для выделения гемокультуры (J.Vanderpitte,K.Engback, P.Piot, 1994).

Особенно высокийпоказатель эффективности среды отмечен вотношении условно патогенныхмикроорганизмов (E. coli 3912/41, S.aureus FDA 209P, K.pneumoniae 51, S.epidermidis ATCC 14990, E.faecalis 775,P.aeruginosa 27/99), являющихсяосновными возбудителями бактериемии исепсиса.

Полученные показателипо эффективности среды подтверждены вмодельных опытах при посеве крови,предварительно зараженной тест-штаммамиE.coli 3912/41, K.pneumoniae 51, S.aureus FDA 209 P,S.pyogenes Dick 1, S.epidermidis 14990, E.faecalis 775.

Таблица 14

Сравнительные данные почувствительности и эффективностиразработанной среды, содержащийбета-лактамазу и контрольных сред через 18-20ч культивирования при 370С

Наименование тест-штаммов

Показатель чувствительности

Показатель эффективности

разработанная среда, содержащаябета-лактамазу

контрольная среда по патенту№2265654

контрольнаясреда-триптиказо-соевый бульон фирмы«Merck»

разработанная среда, содержащаябета-лактамазу

контрольная среда по патенту№2265654

контрольнаясреда-триптиказо-соевый бульон фирмы«Merck»

(M±m)

S.pyogenesDick1

10-6

10-6

10-5

8,9±1,5·105

7,6±1,4·105

4,5±0,8·105

S.aureus FDA209 P

10-7

10-7

10-6

16,2±2,0·105

15,8±2,0·105

8,2±1,2·105

S.epidermidisАТСС 14990

10-7

10-7

10-6

18,5±2,5·105

18,7±2,9·105

9,5±1,5·105

S. enterica Typhi H901

10-7

10-7

10-6

28,6±2,5·105

27,5±3,0·105

15,0±1,8·105

S.pneumoniaeLD

10-5

10-5

10-4

7,8±1,5·105

8,2±1,6·105

4,0±1,2·105

S.pyogenes1512

10-5

10-5

10-4

7,94±1,5·105

7,5±1,6·105

4,0±1,0·105

E.faecalis775

10-6

10-6

10-6

14,8±1,5·105

15,7±1,2·105

7,0±1,2·105

P.vulgarisHx19222

10-7

10-7

10-6

29,5±2,5·105

27,0±2,0·105

14,0±2,5·105

P.mirabilis71\2

10-7

10-7

10-6

28,1±2,8·105

27,2±3,0·105

14,5±2,0·105

K.pneumoniae51

10-7

10-7

10-6

11,8±1,4·105

12,8±1,5·105

6,2±1,2·105

P.aeruginosa27\99

10-7

10-7

10-6

13,8±1,4·105

14,1±1,2·105

7,2±1,2·105

Pages:     | 1 |   ...   | 7 | 8 || 10 | 11 |   ...   | 12 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»