WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 |   ...   | 6 | 7 || 9 | 10 |   ...   | 12 |

Для решения указаннойзадачи, прежде всего, необходимо быловыбрать тест-культуру, которая обладала бывысокой чувствительностью кантибактериальным препаратам,используемым при лечении уроинфекций.Исходя из того, что вэтиологии инфекций мочевыводящих путейосновную роль играют E. coli,Klebsiella, Proteus, Staphylococcus, Enterococcus и Pseudomonas (Л.З.Скала,С.В.Сидоренко, А.Г.Нехорошева, 1997; G.G.Zhanel,T.L.Hisanada, 2005) в набор антибактериальныхпрепаратов для определениячувствительности были включеныбеталактамы, аминоглюкозиды, хинолоны. Вкачестве тест-культур использовалиспорообразующие микроорганизмы B.cereus 5832, B. subtilis ATCC 6051.Установлено, что наибольшейчувствительностью к испытанным препаратамобладала, тест-культура B.subtilis ATCC 6051, что явилосьоснованием для использования ее в составеразрабатываемой среды.

Таблица 11

Сравнительные данныероста тест-штаммов из разведений 10-6 на

разработанной среде иМасСоnkеy агаре

Тест-штаммы

Разработанная среда

МасСоnkеy агар

фирмы «Merck»

количество колоний (M±m)

диаметрколоний,

мм (M±m)

цветколоний

формаколоний

количество колоний (M±m)

диаметрколоний,

мм (M±m)

цветколоний

формаколоний

E.coli3912/41

(055:К 59)

35,0±4,0

2,2±0,2

ярко-розовые

S

38,0±4,0

2,1±0,15

ярко-розовые

S

P.mirabilis71/2

30,0±3,0

2,5±0,2

бесцветные

О

25,0±3,0

2,4±0,2

бесцветные

О

P.vulgarisHX19

32,0±4,0

2,2±0,18

бесцветные

О

28,0±4,0

2,0±0,16

бесцветные

О

K.pneumoniae№4140

36,0±4,0

2,4±0,25

розовые

S

40,0±5,0

1,5±0,3

розовые

S

P.aeruginosa27/99

28,0±6,0

1,5±0,15

бесцветные

S

30,0±5,0

1,5±0,12

бесцветные

S

S.enterica Typhimurium79

44,0±5,0

2,5±0,2

бесцветные

S

42,0±3,0

2,3±0,2

бесцветные

S

S.sonnei Sform

32,0±4,0

2,2±0,16

бесцветные

S

34,0±3,0

2,2±0,18

бесцветные

S

S.aureus FDA209Р

нетроста

-

-

-

нетроста

-

-

-

S. aureusWood-46

нетроста

-

-

-

нетроста

-

-

-

S.epidermidis14990

нетроста

-

-

-

нетроста

-

-

-

S.flexneriIа 8516

30,0±3,0

1,1±0,1

бесцветные

S

32,0±4,0

1,3±0,1

бесцветные

S

B.cereus2010

нетроста

-

-

-

нетроста

-

-

-

S entericaTyphi H901

38,0±4,0

2,0±0,15

бесцветные

S

34,0±5,0

2,1±0,15

бесцветные

S

Примечание: посевтест-штаммов S.aureus FDA 209Р, S.aureusWood-46, B.cereus 2010, S.epidermidis 14990осуществляли из разведений 10-1.

Дальнейшей задачейявлялась разработка способа получениясухих спор указанной тест-культуры. Для еерешения использовали способностьпредварительно высушенногогигроскопического материала, напримеркрахмала, поглощать большое количествовлаги. При этом подобраны соотношениякрахмала и споровой суспензии (14-15:1),которые обеспечивали получение споровогоматериала c влажностью не более 5%.

Следующий этаписследований включал подбор питательнойосновы, способствующей прорастанию спор. Вкачестве питательных основ испытаныпитательный бульон, дрожжевой экстракт,панкреатический и кислотный гидролизатыказеина. Установлено, что сухойпитательный бульон и экстракт кормовыхдрожжей обеспечивали прорастание спорB.subtilis 6051 втечение 16-18 ч при 370С. Использование других основлимитировалось удлинением сроковпрорастания спор до 36-48 ч. Однако прииспытании питательного бульона в составесреды, включающей споры B.subtilis на крахмальномносителе, глюкозу и индикатор феноловыйкрасный, не наблюдали четкого переходаокраски индикатора из красной в желтую припрорастании спор. Очевидно, этообъяснялось тем, что основным продуктомрасщепления глюкозы тест-штаммом B. subtilis 6051 вприсутствии пептонов является нейтральноесоединение ацетилметилкарбинол (ацетоин),что было подтверждено при постановкереакции Фогеса-Проскауэра. Прииспользовании дрожжевого экстракта, несодержащего пептонов, наблюдали четкоеизменение цвета индикатора в результатеобразования кислых продуктов, что былоподтверждено при постановке теста сметиловым красным (MR-тест).

Изучение влиянияразличных концентраций глюкозы в среде(от 0,5 до 2,0%) показало, что наиболееоптимальным количеством являетсясодержание в среде 1,0-1,5% углевода,обеспечивающим наиболее интенсивнуюокраску среды при прорастании спор.Учитывая, что рН мочи может варьировать вшироких пределах от кислой до основной, чтоможет привести к искажению цветных реакцийпри посеве мочи, для стабилизации рН всостав среды в качестве буферной системывключили натрий фосфорнокислый и натрийуглекислый.

На основании испытания250 образцов экспериментальной среды,содержащих различные концентрациидрожжевого экстракта, глюкозы, спор накрахмальном носителе, индикатора ибуферной системы определен оптимальныйсостав среды для определения АБС в моче,содержащей в г/л: дрожжевой экстракт - 4,5,глюкоза - 15,0, споры В.subtilis на крахмальномносителе - 1,2, феноловый красный - 0,045, натрийфосфорнокислый - 0,7, натрий углекислый -0,045.

Сравнительныеисследования чувствительностиразработанной среды для определения АБС вмоче и Urotest АВ фирмы «Merck» представлены втабл. 12.

Таблица 12

Сравнительныеисследования чувствительности

созданной среды дляопределения АБС в моче и Urotest АВ «Merck»

Концентрациябензилпенициллина

в моче (ЕД/мл)

Оценка изменения окраскисреды

Созданная среда

UrotestАВ

64,0

-

-

32,0

-

-

16,0

-

+

8,0

-

+

4,0

+

+

2,0

+

+

1,0

+

+

0,5

+

+

Контрольные пробы без

антибиотика

+

+

Обозначения: «+» -изменение окраски среды – отсутствиеантибиотика

«-» - отсутствие изменения окраски среды– наличиеантибиотика.

Из данных табл. 12 видно,что разработанная среда обладала высокойчувствительностью, выявляла низкиеконцентрации антибиотика в моче (8,0 ед/мл), вто время как Urotest АВ позволялрегистрировать только высокиеконцентрации антибиотика (32,0 ед/мл).

Созданная среда удобнапри рутинных исследованиях в клиническойпрактике, поскольку не требует особыхусловий проведения теста. Использованиеданной среды будет способствоватьулучшению бактериологическихисследований при диагностике уроинфекций.На разработанную среду составлена НД.Разработка защищена патентом РФ№2164946.

Разработка питательныхсред для накопления и выделениягемокультур

В настоящее время длявыделения гемокультур сальмонеллиспользуют среды лабораторногоприготовления, которые не могут бытьстандартными. Для устранения этогонедостатка необходимо использоватькоммерческие сухие питательныесреды.

Pages:     | 1 |   ...   | 6 | 7 || 9 | 10 |   ...   | 12 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»