WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 |   ...   | 5 | 6 || 8 | 9 |   ...   | 12 |

Среда проста по составуи не содержит дорогостоящихкомпонентов. Она внедрена в производство изащищена патентом РФ №2157837.

Существующая схемавыделения энтеробактерий предусматриваетпосев клинического материала надифференциально-диагностическую среду сэозин-метиленовым синим – среду Левина.Однако среда не подавляет роение протея ине позволяет дифференцировать патогенныемикроорганизмы от некоторых условнопатогенных, не разлагающих лактозу.

С целью повышенияселективных свойств в качестве основыразрабатываемой среды использовалиэлектролит-дефицитную основу, а дляулучшения дифференцирующих свойств всостав внесена дополнительно сахароза, чтопозволило дифференцироватьлактозонегативные, но сахарозопозитивныеусловно патогенные энтеробактерии отпатогенных, не ферментирующих этиуглеводы. Однако при посеве смешанныхкультур микроорганизмов (E.coli3912/41 и S.enterica TyphiH901; E.coli3912/41 и S.flexneri 1a 8516;E.coli3912/41 и S.sonnei S form),образующиеся в процессе ферментациилактозы и сахарозы органические кислотыдиффундировали в соседние участки средыпоэтому не ферментирующие эти углеводыпатогенные энтеробактерии изменяли своюокраску, что не позволяло отличить их отусловно патогенных микроорганизмов. Сцелью устранения указанного недостатка всостав разрабатываемой среды был включентрис-буфер в 0,04% концентрации. Этоспособствовало нейтрализации частикислот, образующихся в результатесбраживания углеводов, и они недиффундировали в соседние участки среды, врезультате чего патогенные микроорганизмыне изменяли

Таблица 10

Сравнительнаяхарактеристика роста тест-штаммов изразведений 10-6

на ЭДКС-агаре иизвестных средах

Наименование тест-штаммов

Разработанная среда-ЭДКС-агар(М±m)

МасСоnkеy-сорбитол агар фирмы «Oxoid»(М±m)

Сорбитол E.coli0157:Н7 агар ГНЦ ПМ (М±m)

КОЕ

размер(d) и форма колоний

цвет

колоний

КОЕ

размер(d) и форма колоний

цвет

колоний

КОЕ

размер(d) и форма колоний

цвет

колоний

E.coli0157:Н7 № 4

38,0±3,0

2,2±0,2S

голубые

35,0±3,0

2,1±0,18 S

бесцветные

35,0±3,0

2,2±0,2S

бесцветные

E.coli 0157:Н7 №12

39,0±4,0

2,4±0,2S

голубые

40,0±4,0

2,5±0,2S

бесцветные

37,0±4,0

2,3±0,18 S

бесцветные

E.coli 0157:Н7 № 9

45,0±4,0

2,3±0,18 S

голубые

42,0±4,0

2,2±0,18 S

бесцветные

46,0±4,0

2,2±0,2S

бесцветные

E.coli 0157:Н7 № 63

36,0±3,0

2,0±0,15 S

голубые

36,0±3,0

1,9±0,15 S

бесцветные

38,0±3,0

2,0±0,15 S

бесцветные

E.coli 168\59(0111:К58)

40,0±4,0

2,4±0,19 S

желтые

42,0±4,0

2,5±0,2 S

розовые

39,0±4,0

2,4±0,2 S

красные

E.coli №3912/41(055:К59)

32,0±3,0

2,3±0,15 S

желтые

28,0±3,0

2,2±0,16 S

розовые

34,0±3,0

2,2±0,16 S

красные

S. entericaTyphimurium №79

52,0±6,0

2,2±0,2S

желтые

50,0±5,0

2,3±0,18 S

розовые

50,0±5,0

2,2±0,18 S

красные

P.mirabilis 71(2)

48,0±5,0

2,5±0,25О

голубые

49,0±5,0

2,4±0,2 О

бесцветные

роение

Н

бесцветные

P.vulgarisHX19

54,0±5,0

1,3±0,1 О

голубые

55,0±5,0

1,5±0,12 О

бесцветные

роение

Н

бесцветные

S.aureus Wood46

нетроста

-

-

нетроста

-

-

нетроста

-

-

S.epidermidisАТСС 14990

нетроста

-

-

нетроста

-

-

нетроста

-

-

Примечание: посев тест-штаммовS.aureus Wood-46,

S.epidermidis АТСС 14990 осуществляли из разведений 10-1.

свою окраску. Они былибесцветны, прозрачны и легко отличались отокрашенных в темно-фиолетовый цвет колонийусловно патогенных энтеробактерий.

В результатеполученных данных и на основании изученияболее чем 150 образцов среды отработанаоптимальная рецептураэлектролит-дефицитного агара сэозинметиленовым синим (ЭДЭМС-агара) длявыделения и дифференциацииэнтеробактерий, включающая следующиекомпоненты, в г/л: электролит-дефицитнаяпитательная основа – 11,0, лактоза – 7,5, сахароза – 7,5, эозин – 0,6, метиленовый синий – 0,065, трис-буфер– 0,4, агар– 11,0.

Сравнительные данныероста тест-штаммов на разработаннойсреде и на среде Левина, показали, чтосозданная среда имела существенноепреимущество перед своим аналогом,поскольку обеспечивала рост бактерийпротея в виде изолированных О-форм колоний,что в значительной мере облегчаловыделение из микробной ассоциацииэнтеробактерий в чистой культуре. Крометого, среда обеспечивала четкуюдифференциацию патогенных энтеробактерийот условно патогенных, не ферментирующихлактозу, но ферментирующих сахарозу. Так,тест-штаммы P.vulgaris НХ19 и S.marcescens 1 на ЭДЭМС-агаре образовываликолонии темно-фиолетового цвета, тогда какна контрольной среде, они были бесцветны,как и патогенные энтеробактерии.

Таким образом,разработанный ЭДЭМС-агар по селективным идифференцирующим свойствам превосходитизвестную среду Левина. Указанныепреимущества позволяют рекомендоватьразработанную среду длябактериологического анализа клиническогоматериала на энтеробактерии. Наразработанную среду составлена НД.Разработка защищена патентом РФ №2179582.

Разработка питательныхсред для диагностики уроинфекций

В мировой практике дляускорения и предварительной идентификацииуроинфекций рекомендуется производитьпосев мочи одновременно на две среды:электролит-дефицитную, поддерживающуюрост всех основных возбудителейуроинфекций, и селективный MacConkey агар,используемый для роста толькограмотрицательных микроорганизмов (CultureMedia Manual bio Merieux, 1994).

В РФ отсутствуетпромышленный выпуск селективной среды длябактериологического анализа мочи, поэтомунами предприняты исследования поразработке отечественной сухой среды типаМасСоnkеy.

В качестве питательныхоснов разрабатываемой среды использовалисухой питательный агар, панкреатический икислотный гидролизаты казеинапроизводства НПО «Питательные среды». Изиспытанных основ только питательный агарполностью обеспечивал питательныепотребности всех тест-штаммов,рекомендованных European Pharmacopoeia II, Chapter VIII.10.(1980), USP, National Formulary 16th.ed., Washington, D.C., (1985) дляконтроля Maс Conkey агара. На среде с кислотнымгидролизатом казеина отсутствовал росттест-штаммов,, S.enterica Typhi Н901, S.entericaТyphimurium 79, S.sonnei S form, S.flexneri 1a 8516, а на среде с панкреатическимгидролизатом казеина указанные штаммыобразовывали мелкие колонии d-0,4-0,6мм.

Испытания желчныхсолей производства НПО «Питательныесреды» в качестве селективного компонентаразрабатываемой среды показали, что они вконцентрации 0,4-0,5% полностью подавлялироение протеев и не оказывалиингибирующего действия на рост другихэнтеробактерий.

Для подавления ростаграмположительных микробов-ассоциантов всостав среды был включен кристаллическийфиолетовый, а в качестве дифференцирующегомаркера –лактоза и индикатор нейтральныйкрасный.

На основании изучениябиологических свойств 85 образцовопределена рецептура сухой среды аналогаМасСоnkеy агара, включающая следующиекомпоненты в г/л: питательныйагар – 38,5,лактоза – 10,0,желчные соли –4,5, нейтральный красный – 0,04, кристаллическийфиолетовый –0,001.

В табл. 11 представленысравнительные данные роста тест-штаммов наполученной среде и МасСоnkеy агаре фирмы «Merck»,свидетельствующие, чторазработанная среда по селективными дифференцирующимсвойствам не уступала МасСоnkеy агару фирмы«Merck». Она ингибировала ростграмположительной микрофлоры и подавлялароение протеев, поддерживая при этом ростусловно патогенных и патогенныхэнтеробактерий. Среда обладаладифференцирующими свойствами, основаннымина способности микроорганизмов разлагатьлактозу: лактозоположительныемикроорганизмы образовывали на средеярко-розовые колонии,лактозоотрицательные - бесцветныеколонии.

Полученная средапроста по составу и содержит компонентытолько отечественногопроизводства. Среда внедрена в практикуздравоохранения – «Питательная среда для выделения идифференциации энтеробактерийселективная сухая» (типа Макконки агара).ФСП 42-0504-3427-04, ПР №58944705-01-06.

Бактериологическаядиагностика уроинфекций включаетпостановку теста на наличие в мочеантибактериальных субстанций (АБС).

В РФ препаратыуказанного назначения не выпускают. Всвязи с этим, былипредприняты исследования по разработкесухой среды для определения АБС в моче.

Pages:     | 1 |   ...   | 5 | 6 || 8 | 9 |   ...   | 12 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»