WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 |   ...   | 4 | 5 || 7 | 8 |   ...   | 12 |

S. epidermidis 14 990(отрицательный контроль)

-

B. subtilis 6051(отрицательный контроль)

-

Из данных табл. 8 видно,что желточная эмульсия, полученная поразработанной технологии, способствуетпроявлению лецитиназной активноститест-штаммами, которые продуцируют этотфермент. Вокруг колоний микроорганизмов,не обладающих лецитиназой, зоны ееактивности отсутствовали.

Таким образом,разработанная технология обеспечиваетполучение желточной эмульсии с длительнымсроком хранения. Использование ее вготовом к употреблению виде позволитсократить сроки предварительнойподготовки к анализу. Разработка защищенапатентом №2203958.

Разработка сухихпитательных сред на электролит-дефицитнойпитательной основе

Зарубежные фирмы Oxoid,Merck, bioMerieux для бактериологического анализамочи выпускают цистин-лактозаэлектролит-дефицитный агар (CLED-агар),который выявляет рост основныхвозбудителей уроинфекций и подавляетроение протеев, что позволяет определитьстепень бактериурии.

До настоящейразработки в РФ среду аналогичногоназначения не выпускали. Это послужилооснованием к проведению исследований посозданию электролит-дефицитной среды длябактериологического анализа мочи.

В качестве питательнойосновы разрабатываемой среды использовалиэлектролит-дефицитную основу, полученнуюпо оригинальной технологии. В качестведифференцирующего маркера в состав средывключена лактоза, обеспечивающая всочетании с индикатором бромтимоловымсиним дифференцирующие свойства среде. Длястабилизации рН в состав среды включентрис-буфер, а качестве стимулятора ростамикроорганизмов использовали L-цистеин(Manual of BBL Products and Laboratory Procedures. Sixth Edition).

На основании изучениябиологических свойств более чем 100образцов среды был определен оптимальныйсостав электролит-дефицитногопитательного агара (ЭДПА) для выделения,дифференциации и количественногоопределения микроорганизмов в моче,содержащего в г\л: электролит-дефицитнаяпитательная основа – 8,3; L-цистин – 0,128; лактоза – 10,0; трис-буфер – 0,2; агар – 12,0; бромтимоловыйсиний –0,03.

Сравнительнаяхарактеристика роста тест-штаммовосновных возбудителей уроинфекций на ЭДПА,CLED-агаре и питательном агаре показала, чторазработанная среда полностьюобеспечивала ростовые потребностиосновных возбудителей уроинфекций иингибировала роение протеев, что позволялопровести количественный учетмикроорганизмов и определить степеньбактериурии, являющейся показателемналичия патологического процесса. Средаобеспечивала четкую дифференциациюмикроорганизмов по признаку ферментациилактозы: микроорганизмы, ферментирующиелактозу, образовывали колонии желтогоцвета, не ферментирующие – колонии голубогоцвета (табл.9).

Испытанияразработанной среды в практическихусловиях в лаборатории микробиологии НИИурологии МЗ РФ г.Москвы, вбактериологическом отделе Центрасанэпиднадзора №736 МО РФ и Дагестанскомурологическом центре также подтвердили еепреимущества перед контрольной средой– питательнымагаром (И.В.Гавристова, Г.А.Беляева,Ю.И.Обухова и др.,2001).

Разработанная среда посравнению с CLED-агаром более проста посоставу, не содержит дополнительныхфакторов роста в виде дрожжевого и мясногоэкстрактов. Данная разработка внедрена впрактику здравоохранения и защищенапатентом РФ№2145352.

Для выделениявысокопатогенного штамма E.coli O157:H7 в нашей странерекомендована модифицированная средаЭндо–СорбитолE. coli O157:H7 агар(Т.С.Шобухова, И.А.Гавристова, Н.М.Ландсман,М.В.Храмов, 1997). Ее недостатком являетсянизкая селективность, и в случае наличия вклиническом материале роящихся формпротеев, выделение возбудителя инфекции вчистой культуре весьма затруднительно. Зарубежом для выделения штамма E. coli O157:H7 используютселективные среды, содержащиедорогостоящие компоненты (Средыбактериоселективные, сухие «Гем», М., - 1997).Аналогичные среды в РФ не выпускают, чтообусловило целесообразность разработкисухой селективной среды для выделения иидентификации штамма E. coliO157:H7, которая являясь болеепростой по составу, не уступала бы покачеству зарубежным аналогам.

При разработке средыисходили из способностиэлектролит-дефицитной питательной основыподавлять роение протеев. Для решениявопроса о возможности использования этойосновы в качестве питательного субстрата,в составе разрабатываемой среды, изученовлияние ее на рост 14 штаммов E. coli O157:H7.

Установлено, чтоэлектролит-дефицитная основа обеспечиваларост всех штаммов E. coliO157:H7 и по чувствительности,размеру и форме колоний не уступаласухому питательному агару, являющемусяпитательной основой большинствапитательных сред для энтеробактерий.Это послужило основанием дляиспользования ее в составеразрабатываемой среды.

Одним из основныхдифференцирующих признаков тест-штаммовсеротипа E. coli O157:H7 от других серотипов E.coli является отношение ксорбиту: первые – сорбит отрицательны, вторые – сорбитположительны (Ю.А.Ратинер, В.М.Бондаренко,A.Siitonen, 1998). Поэтому данный углевод введен всостав разрабатываемой среды в качестведифференциального маркера.Экспериментально оттитрована оптимальнаяконцентрация сорбита (1,2%), обеспечивающая всочетании с рН-индикатором бромтимоловымсиним четкую дифференциацию тест-штаммовE. coli O157:H7 отдругих серотипов E. coli. Тест-штаммы E. coliO157:H7 образовывали голубыеколонии, колонии других серотипов – желтые.

Таблица 9

Сравнительнаяхарактеристика роста тест-штаммовосновных возбудителей уроинфекций изразведений 10-6 на ЭДПА, CLED агаре и питательномагаре (СПА)

Тест-штаммы

Рост тест-штаммов на ЭДПА

Рост тест-штаммов на CLED-агаре фирмы«Serva»

Рост тест-штаммов на СПА

КОЕ

М±m

формаколоний

цветколоний

КОЕ

М±m

форма

колоний

цветколоний

КОЕ

М±m

форма

колоний

цветколоний

E. coli3912/41 (O55:K59)

40,0±4,0

S

желтый

42,0±4,0

S

желтый

43,0±5,0

S

бесцветные

K. pneumoniae4140

45,0±4,0

S

желтый

49,0±5,0

S

желтый

46,0±5,0

S

бесцветные

S. aureus FDA209 Р

32,0±3,0

S

желтый

29,0±3,0

S

желтый

32,0±3,0

S

бесцветные

E. faecalis775

22,0±2,0

S

желтый

24,0±2,0

S

желтый

28,0±3,0

S

бесцветные

E. aerogenes418

28,0±3,0

S

желтый

30,0±3,0

S

желтый

32,0±3,0

S

бесцветные

P. vulgarisHX19

45,0±5,0

O

голубой

46,0±5,0

O

голубой

48,0±5,0

Н-(роение)

бесцветные

P. vulgaris4636

42,0±3,0

O

голубой

44,0±3,0

O

голубой

43,0±2,0

Н-(роение)

бесцветные

P. vulgaris3307

44,0±5,0

O

голубой

42,0±4,0

O

голубой

46,0±5,0

Н-(роение)

бесцветные

P. mirabilis3177

39,0±5,0

O

голубой

44,0±5,0

O

голубой

46,0±5,0

Н-(роение)

бесцветные

P. mirabilis71/2

42,0±5,0

O

голубой

38,0±4,0

O

голубой

35,0±4,0

Н-(роение)

бесцветные

S. marcescens1

25,0±2,0

S

голубой

26,0±3,0

S

голубой

28,0±3,0

S

бесцветные

P. aeruginosa27/99

28,0±3,0

S

светло-голубой

25,0±3,0

S

светло-голубой

22,0±3,0

S

бесцветные

При созданииселективных сред основной задачейявляется подавление ассоциативноймикрофлоры. Данная задача была решенапутем включения в состав разрабатываемойсреды кристаллического фиолетового,обладающего избирательнымбактериостатическим действием награмположительные микроорганизмы (MicrobiologyManual «Merck», 1990). Внесение в среду 0,0001%кристаллического фиолетовогоингибировало рост тест-штаммов S.aureus Wood-46, S.aureus АТСС 25923, S.aureus FDA 209Р, S.epidermidis14990 из разведения 10-1.

На основанииполученных результатов определеноптимальный состав среды для выделения ипредварительной идентификации E.coli 0157:Н7 -электролит-дефицитный кристаллвиолетсорбитол агар (ЭДКС-агар), содержащийследующие компоненты в г/л:электролит-дефицитная питательная основа– 7,8, Д-(+)-сорбит – 12,0,бромтимоловый синий – 0,04, кристаллический фиолетовый– 0,001,трис-буфер –0,36, агар –11,5.

В табл. 10представлены сравнительные данные ростатест-штаммов на ЭДКС-агаре и известныхсредах. По числу выросших колоний,селективным и дифференцирующим свойствамЭДКС-агар не уступал МасСоnkеy-сорбитолагару, а по селективным свойствам, вчастности, по способности подавлять роениепротеев превосходил сорбитол E.coli 0157:Н7 агаротечественного производства.

Pages:     | 1 |   ...   | 4 | 5 || 7 | 8 |   ...   | 12 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»