WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 || 3 | 4 |   ...   | 12 |

1. Выявленыальтернативные источники белкового сырьядля производства питательных сред,позволяющие осуществить замену однихвидов сырья другими без изменений конечныххарактеристик препаратов и условийпроведения стадий технологическогопроцесса.

2. Экспериментальнообоснована и разработана технологияполучения сухого ферментативного пептонаиз рыбного сырья.

3. Разработана сухаяэлектролит-дефицитная питательная основаи научно обоснована целесообразность ееиспользования в составе сред длявыделения, дифференциации иколичественного определения бактерий вмоче, для выделения и дифференциацииразличных видов энтеробактерий, включаяэнтерогеморрагические E.coliO157:H7.

4. Сконструированы сухиепитательные среды для бактериологическогоанализа мочи –селективная среда для выделения идифференциации энтеробактерий и среда дляопределения антибактериальных субстанцийв моче.

5. Экспериментальнообоснованы и разработаны питательныесреды для накопления и выделениягемокультур.

6. Создана селективнаясреда для выделения B.cereus.

Апробация материаловдиссертации. Основныерезультаты проведенных исследованийдоложены на:

VII съезде – Всесоюзномсовещании «Биологически активные веществагидробионтов – новые лекарственные,лечебно-профилактические и техническиепрепараты». Владивосток. – 1992 г; Всероссийскомобществе эпидемиологов, микробиологов ипаразитологов. М., – 1997 г; Международной научнойконференции «Разработка и производстводиагностических питательных сред имикротест-систем», Махачкала, – 1998г; VI-Российскомнациональном конгрессе «Человек илекарство». М., – 1999 г; 3-й Международнойнаучно-практической конференции«Актуальные вопросы разработки ипроизводства диагностических питательныхсред и тест-систем; Махачкала, – 2001 г; VIII СъездеВсероссийского общества эпидемиологов,микробиологов и паразитологов. М., – 2002 г; 4-йМеждународной научно-практическойконференции «Разработка и стандартизациямикробиологических питательных сред итест-систем, Махачкала, – 2003 г;Научно-практической конференции «Новыетехнологии в медицине», Махачкала, – 2003 г;Всероссийской научной конференциипосвященной 105-летию Пермского НПО«Биомед», Пермь, – 2003 г; Международном конгрессе«Ликвидация и элиминация инфекционныхболезней –прогресс и проблемы», институтим. Л.Пастера Санкт-Петербург, – 2003 г; Всероссийскойнаучной конференции «Актуальные вопросыразработки, производства и применениеиммунобиологических и фармацевтическихпрепаратов», Томск, – 2004 г; III Съезде Обществабиотехнологов России им. Ю.А.Овчинникова.М., – 2005г; Всероссийской научно-практическойконференции «Вакцинология». М., – 2006г; I Всероссийскойконференции: «Питательные среды и методыкультивирования клеток для биологиимедицины и биоиндустрии: фундаментальные иприкладные аспекты», Пущино, - 2007 г.Диссертация апробирована 05.10.07 г. наконференции в НПО «Питательныесреды».

Публикации. По материалам диссертацииопубликовано 47 работ.

Структура и объемдиссертации. Диссертацияизложена на 271 странице и состоит извведения, обзора литературы, 7 главсобственных исследований, заключения,выводов, списка литературы, включающего 205источников, и приложения. Материалыисследований иллюстрированы 52 таблицами и8 рисунками.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методыисследования.

В работе использовалиследующие материалы: каспийскую кильку,минтай, хек, путассу, ставриду, панцирькриля мороженый, (ТУ 15-04-545-87), а такжеподжелудочную железу крупного рогатогоскота ГОСТ 11285-93, пепсин ТУ 9219-560-00419779-2000,сухую желчь КРС ТУ-4970-85, панкреатин ОСТ49-167-81, соевую муку СОПРО-УТБ фирмыВОБЕКС-интерсоя, панкреатическийгидролизат казеина РП №816-98, гидролизатказеина средней степени расщепления ФС42-3528-98, питательный агар ФСП 42-0504-5807-04,питательный бульон ФС 42-0504564, пептоны ипитательные среды фирм Difco, Oxoid, Merck, HiMedia, Serva,bioMerieux, экстракт кормовых дрожжей ФС42-3441-97.

При проведении контроляразрабатываемых питательных средиспользовали музейные тест-штаммы,полученные из ГИСК им. Л.А.Тарасевича:S.aureus FDA 209P, S.aureus Wood-46, S.aureus ATCC 25923, S.saprophiticusCCM 883, S.epidermidis ATCC 14990, S.pyogenes Dick 1, S.pyogenes 1521,S.pneumoniae LD, S.viridans 22, С.xerosis 1911, E.faecalis 775, S.entericaTyphi H901, S.enterica Typhimurium 79, S.enterica Paratyphi A525, S.entericaParatyphi B506, S.flexneri 1a 8516, S.sonnei S-form, P.mirabilis 71/2,P.mirabilis 3177, P.mirabilis 46, P.vulgaris HX19, P.vulgaris 4636, K.pneumoniae 51, K.pneumoniae 4140, E.aerogenes 418, P. aeruginosa 27/99,S.marcescens 1, E.coli 3912/41 (O55:K59), E.coli ATCC 25922, E.coli Ewing(O124K72), E.coli 675, E.coli 168/59 (0111:K58), E.coli O157:H7-№4; 9; 12;20; 25; 10; 63; 120; 122; 904; 23; 1282; 1330; 214, C.freundii 101/57,E.cloacae A-186, B.abortus 19BA, C.albicans ATCC 885/653, B.cereus 8035,B.cereus 2010, B.cereus 2527, B.subtilis ATCC 6051, B.megaterium 89, B.polymyxa26, B.mycoides 587, H.influenzae 55, C.perfringens TAB6K28.

Биологический контролькачества экстракта кормовых дрожжейпроводили с помощью микроорганизмовауксотрофных по витаминам группы В: Pichiafermentans Lodder BKM 1375-ауксотроф по витаминуВ1, Debaryomyces disporusBKM 1575-ауксотроф по витамину В6, Saccharomyces cerevisiae BKM1168-ауксотроф по витамину В3, Kluyveromyces marxianus BKM1148-ауксотроф по витамину В5. Тест-штаммыполучены из коллекции непатогенныхмикроорганизмов Института биохимии ифизиологии микроорганизмов РАН.

Физико-химическиесвойства питательных основ и средоценивали в соответствии с ФС 42-3874-99 и МУК4.1/4.2.588-96. Содержание пептонов определяли вбиуретовой реакции (Л.Я.Телишевская, 2000),углеводов фенольным методом (О.А.Максименко, Л.А. Зюкова, Ф.М.Федорович, 1975),триптофана по Уденфриду (А.Н.Савицкий,В.М.Беликов, М.О. Рожанский, 1967).Аминокислотный состав препаратов изучалина автоматическом анализаторе фирмы«Биотроник» (ФРГ) по стандартнойметодике.

Биологические свойстваразработанных питательных сред и основпроводили согласно «Методическимрекомендациям к контролю питательных средпо биологическим показателям» (М., 1980).Чувствительность среды оценивали помаксимальному разведению культуры, прикотором на засеянных чашках, пробиркахобнаруживали рост микроорганизмов.

Для стандартизациипосева определенного количества микробныхклеток в жидкую или плотную питательнуюсреду использовали бактериальный стандартмутности (ОСО 42-28-85-07) ГИСК им. Л.А.Тарасевичана 10 ед.

При этом определялихарактер роста культур в жидких средах,рост бактерий с равномерным помутнениемсреды, придонный рост, поверхностный ростбактерий, а также размер, форму, цвет,рельеф и структуру колоний на плотныхсредах. Дифференцирующие свойства средыопределяли по выраженности измененияцвета колоний или цвета среды подколониями, ореол вокруг них, диаметрпоследнего. Показатель эффективности(кратность увеличения числа микробныхклеток после инкубации посевов) определяликак отношение среднего количества колоний,выросших при высеве из среды обогащения, ксреднему количеству колоний, выросших изпосевной дозы:

Рэ=(nt-nо)·К

где Рэ – показательэффективности;

nt – количество колоний,выросших на плотных средах после высевасуспензии из среды обогащения;

no –количество жизнеспособных клеток впосевной дозе;

К – степень разведениясуспензии.

Споровую культурутест-штамма B. subtilis 6051 получали согласноГФ XI СССР М., (1990).

Определениечувствительности микроорганизмов кантибактериальным препаратам определялисогласно МУК 4.2.1890-04.

Для определенияростстимулирующей активности экстрактакормовых дрожжей к синтетической средеРидер с сахарозой добавляли 0,3% препарата.Посев ауксотрофных микроорганизмовосуществляли из разведения 10-5. Учет результатовпроизводили через 48 ч инкубации посевовпри 280С путемизмерения оптической плотности при длиневолны 540 нм. Контролем являласьсахарозо-минеральная среда Ридер бездобавления витаминного препарата.

Разработку основныхрежимов получения питательных основ и средосуществляли вэкспериментально-производственныхусловиях. Гидролиз сырья проводили вреакторах емкостью 1000 л, высушиваниегидролизатов осуществляли нараспылительной сушке ОС-20В НСШ-16. Дляполучения агаровых сред концентрированныйгидролизат смешивали с агаром,гранулировали и высушивали впсевдокипящем слое в сушилке СП-100 при700С в течение 1ч (А.М. Алиев и др., авт. свид.№638614). Для получениямногокомпонентных сред сухие компоненты вопределенной последовательностизагружали в мельницу-смеситель согласноразработанной рецептуре и перемешивали втечение 1,5-2 ч.

Результаты полученныхисследований обрабатывали статистически сиспользованием параметрических методовстатистики, применяя компьютернуюпрограмму Stat. Достоверность различий (р)между средними арифметическими (м) определяли спомощью критерия Стьюдента. Достовернымсчитали результаты при р0,05.

Результаты исследованийи их обсуждение.

Разработка технологийполучения питательных основ

из различных видовбелкового сырья

Анализ литературныхданных по химическому составу различныхвидов рыб (И.М.Скурихин, М.Н.Волгарев, 1987)позволил выявить источники рыбного сырья,которые могут служить альтернативойкаспийской кильке.

Для подтверждениявозможности использования выявленныхисточников рыбного сырья в производствепитательных основ проведен комплексисследований по изучению химическогосостава и биологических свойствпанкреатических гидролизатов минтая, хека,путассу и ставриды. При этом в основуполучения панкреатических гидролизатов изданных видов рыб положены те жетехнологические приемы и режимы, что и приполучении панкреатического гидролизатакильки.

Химический составполученных гидролизатов из различныхвидов рыб представлен в табл. 1.

Из данных таб. 1 видно,что полученные препараты по содержаниюобщего, аминного азота, пептонов и поаминокислотному составу отвечаюттребованиям, предъявляемым к питательнымосновам и по этим показателям неотличаются от панкреатическогогидролизата кильки.

Биологическийконтроль качества питательных агаров,сред Эндо, Левина на основепанкреатических гидролизатов из различныхвидов рыб показал, что по чувствительности,форме и размеру колоний, а также подифференцирующим и селективным свойствам,они не отличались от контрольных сред иполностью соответствовали требованиям ФСП42-0504-5807-04, ФСП 42-3504-98 и ФСП 42-3576-98.

Таким образом,полученные результаты исследованийпоказали, что испытанные виды рыбногосырья могут служить полноценной заменойкаспийской кильки в производствепитательных основ. Данная разработказащищена патентом РФ №2232187.

Таблица 1

Физико-химическиесвойства сухих панкреатическихгидролизатов

из различных видоврыб

Показатели,%

Панкреати-ческий гидролизат минтая(М±m)

Панкреати-ческий гидролизатхека

(М±m)

Панкреати-ческий гидролизатпутассу

(М±m)

Панкреати-ческий гидролизатставриды (М±m)

Панкреати-ческий гидролизаткильки

(М±m)

Влажность

5,9±0,4

6,2±0,3

6,2±0,2

5,8±0,2

5,8±0,3

Зола

15,5±1,0

14,4±0,85

13,2±1,2

14,5±1,0

13,5±1,2

Хлориды

9,7±1,2

7,0±1,5

8,0±1,0

9,1±1,3

8,5±1,3

Аминныйазот

4,9±0,3

5,0±0,3

4,9±0,4

5,1±0,3

4,9±0,25

Общийазот

12,2±0,7

12,1±0,6

10,2±0,5

11,5±0,6

10,5±0,5

Углеводы

1,2±0,15

1,2±0,18

0,9±0,1

1,1±0,1

1,2±0,12

Пептоны

48±1,5

49,0±1,2

51,0±2,0

50±2,0

48,0±1,8

рН 2-%раствора

7,1±0,2

7,0±0,2

7,0±0,1

7,1±0,2

7,0±0,2

Аминокислоты:Аспарагиновая кислота

1,2±0,25

1,06±0,2

1,3±0,2

1,25±0,3

0,96±0,2

Треонин

1,2±0,1

0,85±0,09

0,6±0,15

0,78±0,08

0,8±0,15

Серин

0,45±0,1

0,35±0,08

0,44±0,1

0,36±0,06

0,5±0,08

Глутаминовая кислота

1,3±0,15

1,3±0,1

1,5±0,15

1,46±0,18

1,3±0,2

Pages:     | 1 || 3 | 4 |   ...   | 12 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»