WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 |   ...   | 8 | 9 || 11 | 12 |

S.aureusАТСС 25923

10-7

10-7

10-6

25,0±2,4·105

24,1±1,5·105

12,5±2,0·105

S.aureus Wood46

10-7

10-7

10-6

24,5±2,2·105

25,4±2,0·105

13,0±2,2·105

S. enterica Typhimurium 79

10-7

10-7

10-6

29,8±2,2·105

28,7±2,0·105

15,0±2,5·105

S.marcescens1

10-6

10-6

10-6

14,0±1,5·105

14,5±1,8·105

7,5±1,8·105

E.coli3912\41(O55:К59)

10-7

10-7

10-7

29,5±2,2·105

27,8±2,5·105

15,0±2,5·105

C.albicans885\653

10-6

10-6

10-5

17,8±2,0·105

18,0±2,0·105

9,0±1,5·105

Схема выделениягемокультур предусматривает высев изсреды обогащения на соответствующиеплотные питательные среды.

Для этогочаще всего используют питательный агар. Зарубежом субкультивированияе гемокультурпроводят на кровяном агаре на основе Columbia agar.

В РФ не выпускают среду,аналогичную Columbia agar. Поэтому намипроведены исследования по получению среды– аналога Columbiaagar.

Одним из компонентовColumbia agar является гидролизат сердечноймышцы крупного рогатого скота. Дляполучения панкреатического гидролизатасердечной мышцы использовали рекомендацииряда авторов по получению ферментативных гидролизатов изживотного сырья (Б.И. Антонов, 1986;А.Д. Неклюдов,А.В. Бердутина, А.Н.Иванкин, 2002; Л.Я. Телишевская,2000). При этом подобраныоптимальные соотношения компонентовгидролизуемой смеси,обеспечивающие в течение4,0-5,0 ч гидролиза содержание аминного азота– 0,53±0,05%,общего азота – 0,95±0,08%, пептонов – 1,8±0,2%, степень расщепления белка–55,7±0,3%.

Учитывая наличие вColumbia agar специальной смеси пептонов (Polypepton,Biosat), взамен указанных компонентов, всостав разрабатываемой среды включилипанкреатический гидролизат казеина,питательный бульон и экстракт кормовыхдрожжей, которые выпускаютсяотечественной промышленностью каккоммерческие.

Комплекс биологическихиспытаний различных образцов среды,включающий посев тест-штаммов S.pyogenes 1512, S.pyogenes Dick 1, S.pneumoniae LD, рекомендованных для контроля Columbiaagar, позволил определить ее оптимальныйсостав, включающий в г/л: панкреатическийгидролизат казеина – 12,0, сухой питательный бульон – 5,0, панкреатическийгидролизат сердечной мышцы – 3,0, экстракткормовых дрожжей – 3,0, крахмал – 1,0, хлористый натрий– 3,0, агар– 10,0-11,0.

В табл. 15 представленасравнительная характеристика ростатест-штаммов на разработанной среде, на Columbia agar и питательномагаре. Предлагаемая средапо чувствительности, количеству и размеруколоний высокотребовательных тест-штаммовS.pyogenes Dick 1, S.pyogenes 1512, S.pneumoniae LD не уступалаColumbia agar фирмы «Merck» и превосходилапитательный агар (р<0,05).

Учитывая, что Columbia agarрекомендуется в качестве основы кровяногоагара, проведены биологическиеисследования разработанной основы намодели указанной среды. Установлено, чтокровяной агар на основе разработаннойсреды по количеству и размеру колонийконтрольных тест-штаммов не уступалкровяному агару на основе Columbia agar иобеспечивал проявление -гемолизатест-штаммами S. pyogenes Dick 1, S.pyogenes 1512 и-гемолизау S.pneumoniae LD и S. viridans 22.

Таким образом,разработанная среда обеспечивала роствысокотребовательных микроорганизмов, чтопозволяет рекомендовать ее длясубкультивирования гемокультур.

Таблица 15

Сравнительнаяхарактеристика роста тест-штаммов изразведений 10-6

на разработанной среде,Columbia agar и питательном агаре

Тест-штаммы

Росттест-штаммов на предлагаемой среде(M±m)

Росттест-штаммов на Columbia agar фирмы «Merck»(M±m)

Росттест-штаммов на питательном агаре(M±m)

КОЕ иразмер (d) колоний

КОЕ иразмер (d) колоний

КОЕ иразмер (d) колоний

S. pyogenesDick 1

14,0±2,0

d-1,0±0,1

16,0±2,0

d-1,0±0,1

5,0±1,0

точечные

S. pyogenes1512

22,0±3,0

d-1,0±0,1

24,0±4,0

d-1,0±0,1

6,0±1,0

точечные

S. pneumoniaeLD

22,0±2,0

d-0,8±0,1

26,0±3,0

d-0,8±0,1

нетроста

S. viridans22

24,0±2,0

d-1,2±0,1

22,0±2,0

d-1,2±0,1

20,0±2,0

d-1,2±0,1

S. aureusWood-46

36,0±3,0

d-2,0±0,15

32,0±3,0

d-2,0±0,2

29,0±2,0

d-1,6±0,2

Разработка сухойселективной среды для выделения B. cereus

Практическиелаборатории РФ для диагностики инфекций,вызываемых B.cereus используют среды лабораторногоприготовления, которые обладают слабымиселективными свойствами в отношениимикробов-ассоциантов.

Исходя извышеизложенного, была поставлена задача -разработать селективную среду длявыделения B.cereus, способную ингибировать ростсопутствующих грамотрицательных играмположительных микробов и подавлятьроение протеев.

В качестве питательнойосновы использовали сухой питательныйагар.

Для выделения B.cereus из клиническогоматериала и продуктов питания, которыемогут содержать большое количествомикробов-ассоциантов (S.aureus,E.coli, Klebsiella spp., Proteus spp., Bacillus spp.), необходимоналичие в среде селективных компонентов.

Исходя из литературныхданных об ингибирующем действии солейлития на рост грамотрицательных бактерий илимоннокислого натрия на ростграмположительных бактерий (Р.С.Джалилова,1987; Van Netten, 1989), эти соли были введены всостав разрабатываемой среды. Установлено,что сернокислый литий в концентрации 0,5%полностью подавлял рост E.coli3912/41 и K.pneumoniae4140 из разведения 10-3, а лимоннокислыйнатрий в такой же концентрации ингибировалрост S.aureus FDA 209 Р, В.subtilis 6051,B.megaterium 89, B. mycoides 587 изразведений 10-3,не влияя на рост B.cereus. Меньшие концентрации солей неоказывали необходимого ингибирующегоэффекта на их рост, а более высокие -подавляли рост B.cereus. Однако данные соли не подавлялироение протеев, и в случае их наличия вклиническом материале выделение B.cereus в чистойкультуре не представлялось возможным.Основываясь на литературных данных оподавлении роения протеев с помощьюнекоторых сульфаниламидных препаратов (SmithB.A., Baird-Parker A.C., 1964), были проведеныисследования по изучению влияниясульфадимизина и сульфадиметоксина нарост B.cereus и наих способность подавлять роение протеев.Установлено, что указанные препараты вконцентрациях 0,004-0,005% полностью подавлялироение протеев и не оказывалисущественного влияния на рост тест-штаммовB.cereus. Отмеченолишь незначительное снижение диаметраколоний. Более низкие концентрациипрепаратов роение протеев не подавляли, аболее высокие ингибировали рост B.cereus.

Одним из основныхдифференцирующих признаков приидентификации B.cereus является проявление еелецитиназной активности (З.М.Андреева,М.Н.Лебедева, 1986; Ю.В.Езепчук, Ф.С.Флуер, 1971).Продукция фермента, имеющеготаксономическое значение, изучается насредах с добавлением желточной эмульсии.Под действием фосфолипазы-С B.cereus происходитрасщепление лецитина яичного желтка собразованием жирных кислот и щелочногопродукта фосфохолина (Г.Б.Герасимене,А.А.Глемжа, 1980). Для определения изменениярН среды, происшедшего в результатеферментативного расщепления лецитина, всостав среды введен индикаторбромкрезоловый пурпуровый в общепринятойконцентрации (0,004%).

Результатыисследований показали, что все испытанныетест-штаммы B.cereusобразовывали круглые матовые колонииd-2,0-2,4 мм,окруженные зоной коагулята (d-3,0-4,0мм) светло-фиолетового цвета, что свидетельствовалоо проявлении лецитиназнойактивности.

На основаниипроведенных исследований составленарецептура среды длявыделения B.cereus,включающая следующие компоненты в (г/л):питательный агар – 35,0, натрий лимоннокислый – 5,0, литийсернокислый – 5,0, сульфадимезин илисульфадиметоксин – 0,05, бромкрезоловый пурпуровый – 0,04.

В табл. 16 представленасравнительная характеристика ростатест-штаммов B.cereus и микробов-ассоциантов наразработанной среде и среде Пивоварова(контроль).

Из табл. 16 видно, чтополученная среда имеет существенноепреимущество по сравнению с контрольнойсредой, она подавляет рост не толькограмотрицательных микробов-ассоциантов,но и грамположительных: B.polymyxa 26, S.aureus FDA 209P, В.subtilis 6051, B.megaterium89, B.mycoides 587. На контрольнойсреде рост данных микробов-ассоциантов неподавлялся. Кроме того, учет результатовпосевов на предлагаемой среде можнопроводить уже через 18-20 ч, а на контрольнойне менее чем через 48 ч.

Таким образом,разработанная среда, благодаря своимвысоким селективным свойствамобеспечивает выделение B.cereus в чистойкультуре в сравнительно короткиесроки.

Внедрение данной среды впрактику позволит улучшитьбактериологическую диагностику пищевыхотравлений, вызываемых B.cereus. На средусоставлена НД. Разработка защищенапатентом РФ №2201965.

Таблица 16

Сравнительнаяхарактеристика роста тест-штаммов B.cereus имикробов-ассоциантов

на разработанной средеи среде Пивоварова (контроль)

Тест-штаммы

Посевная доза

КОЕ на разработанной среде(М±m)

КОЕ на контрольной среде Пивоварова(М±m)

Наличие зон лецитиназнойактивности

Наразработанной среде

Наконтрольной среде

B.cereus2010

10-6

32,0±4,0

28,0±3,0

+

+

B.cereus8035

10-6

30,0±3,4

35,0±3,0

+

+

B.cereus2527

10-6

35,0±4,5

36,0±5,0

+

+

В.subtilisАТСС 6051

10-3

нетроста

сплошной рост

-

-

B.megaterium89

10-3

нетроста

сплошной рост

-

-

B.mycoides587

Pages:     | 1 |   ...   | 8 | 9 || 11 | 12 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»