WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 |   ...   | 8 | 9 || 11 | 12 |   ...   | 13 |

НизинА

Мол. масса,(M+H)+, m/z,(MALDI-MS)

506,9

3161,6

3353

3353**

UV-VIS спектр,max, нм, (растворитель)

260 (С2Н5ОН)

215 (Н2О)

215 (Н2О)

215 (Н2О)

ТСХ(SiO2), Rf в системе:

МеОН–Н2О (96:4)

0,75

0

0

0

Электрофорез на бумаге** в электролите:

1) Е1, рН=2,4, 550 В, 2 ч,см


0


11


9,5


9,5

2) Е2, рН=1,1, 250 В, 3 ч, см

0

4,3

3,3

3,3

Спектрантимиробного

действия

гр+ и

гр-бактерии,грибы

гр+бактерии, включая термостойкую B.coagulans.

Примечания:.*/ Получены из фракцииЛГС-Н методом препаративногоэлектрофореза на бумаге в электролитеЕ1, 550 В, 2,5 ч.Проявление реактивом Паули ибиоавтографией с использованиемтест-организмов B.subtilis и B.coagulans.**/Представлено расстояние, пройденноевеществом от стартовой линии к катоду, в см:«0 см» (на линии старта) -электронейтральное вещество; «3,3-11 см» (миграция к катоду) - вещество оснвногохарактера.

Анализ свойств этогокомплекса с помощью физико-химическиханализов и компьютерной базы данных BNPDпозволяют сделать следующие выводы:

1. Фракции относятся кразличным классам органическихсоединений.

2. Основным компонентомбактериоцина ЛГС являетсяэлектрофоретически неподвижная фракцияЛГС-Н, распадающаяся в кислой среде на двесубъединицы с молекулярными массами 3353 и3161,6 Да. По химической структуре иантибиотическому действию фракция ЛГС-Нидентичена полипептидному антибиотикунизину А, основному компонентукоммерческого препарата “Nisaplin”, не содержитароматических группировок (ИК-,УФЛ-спектры, отсутствие реакцииПаули).

3. Компоненты ЛГС-В иЛГС-С в литературе не описаны и, по нашимданным, являются новыми природнымибиологически активными веществами. Наосновании проведенных физико-химическихисследований компонент ЛГС-В (Rf = 0,83) отнесен к группеалкилароматических кетонов, содержащихтакже гидроксильные группы, являетсянизкомолекулярным гидрофобнымсоединением (М 506 Да) и обладает широкимспектром антимикробного и фунгицидногодействия.

Из природного штаммаL. lactis subsp. lactis 194 был выделенантибиотический комплекс, представляющийсобой смесь трех биологически активныхкомпонентов.

Табл. 15.Физико-химические и биологическиесвойства компонентов антибиотическогокомплекса, образуемого штаммом Lactococcus lactis subsp. lactis 194 в сравнениинизином.

Свойства

Компоненты

194-А

194-Б

194-В

НизинА

Мол.масса, (M+H)+, m/z,(MALDI-MS)

607,5

619,6

1995

3353

UV-VISспектр, max, нм,(растворитель)

206,8

(С2Н5ОН)

224,8

(С2Н5ОН)

257,0

(С2Н5ОН)

215,0

(Н2О)

ТСХ(SiO2), Rf в системе:

МеОН–Н2О (96:4)

0,6

0,42

0

0

Электрофорез на бумаге* в электролите:

рН=2,4, 550 В, 2ч, см


0


0


7,6


9,5

Спектрантимиробного

действия

грам+ играм-

бактерии, грибы

грам+бактерии

грам+бактерии

грам+бактерии

Основной фракциейэтого комплекса является гидрофобнаяфракция 194-В с молекулярной массой 1995 Да.Она содержит нуклеотидно-пептидные связи,близкая по Rf ибиологическому действию к низину (табл.15).Фракция Б - электронейтральное в кислойсреде алифатическое соединение с двойнымисвязями, обладало незначительнойантибиотической активностью в отношенииграмположительных бактерий.

Фракция А – этонизкомолекулярное алифатическоесоединение, содержащее кетонную группу,двойные связи, обладающее широким спектромантимикробного действия, является новым неописанным в литературе природнымсоединением с молекулярной массой 607,5 Да(табл.15).

Низкомолекулярныегидрофобные компоненты новыхбактериоцинов отнесенные к группеалкилароматических кетонов, содержатреакционноспособные ненасыщенные двойныесвязи и кетонные группы, что и определяетширокий спектр антимикробного, в том числеи фунгицидного, действия. Переченьантибиотиков фунгицидного действияневелик, по структуре - это не полипетиды, асложные гетероциклическиесоединения.

Согласно мнению рядаученых (Abee, 1994; Gonzalez, 1996; Vadyvaloo, 2004), быстроепроявление антимикробного эффектабактериоцинов может свидетельствовать омембранной направленности действияингибирующих веществ лактококков,характерной для большинства известныхбактериоцинов.

Для выяснения природысинтезируемых бактериоцинов былипроведены исследования по влиянию специфического ингибиторасинтеза белка левомицетина(хлоромфеникола), который препятствуетпереносу на рибосомы комплексааминоацил-тРНК (Егоров, 2004), на синтезбактериоцинов перспективными штаммамилактококков. При замедлении ростаизучаемых штаммов на 50-60 % к концулогарифмической фазы в среде слевомицетином, синтез белка снизился на 70 %,а антибиотическая активностькультуральной жидкости уменьшилась на 80% -90% (рис. 17). Эти данные дают основаниесчитать, что биосинтез изучаемыхбактериоциноподобных комплексовпроисходит с участием рибосом, и этикомплексы являются низкомолекулярнымибелками. Новые бактериоцинытермостабильны: сохраняют стабильностьуровня антибиотической активности прикипячении в течение 30 мин при рН 4,2.

А.

Б.

В

Рис. 13.Влияние левомицетина на рост Lactococcus lactis subsp. lactis штаммов 194 и F-116(А), синтез белка (Б), синтез бактериоцинов(В).

Полученные результатыисследований позволяют предположить, чтосинтезируемые новыми штаммами L. lactis subsp. lactis вещества,обладающие бактерицидным и фунгициднымдействием, являются новыми уникальнымибактериоциноподобными комплексами, ранеене описанными в литературе и незарегистрированными в банке данныхбиологически активных веществ BNPD.

Экстракция и очисткабактериоцинов до индивидуальных веществявляется дорогостоящей и прииспользовании препаратов в пищевойпромышленности не используется. Например,при промышленном получении препарата«Nisaplin» (фирма Aplin & Barrett, LTD.) и «Кризин»(фирма Chr. Hansen A/S, Hoersholm, DK), используют этапраспылительной сушки культуральнойжидкости L. lactissubsp. lactis споследующей стандартизациейвысушенного материалаNaCl до концентрации 1106 МЕ/г.

Для получения препарата ЛГС мы использовали лиофильную сушку.Антимикробная активность препарата ЛГСсоставила 1,2х106МЕ/г в пересчете на активность по препарату«Nisaplin», содержащему 2,5 % чистого низина А.Бактериоцин ЛГС по активности и спектруантимикробного действия превосходиткоммерческий препарат низаплин (табл. 16).

Установленаэффективность нового бактериоцина ЛГС какбиологического консерванта на микробиоту,способную развиваться в продуктах при ихдлительном хранении при температуре,близкой к 5°C, т.е. в условиях повышеннойвлажности, и приводящей к микробиальнойпорче. Результаты наших исследованийпоказали, что бактериоцин, продуцируемыйгибридным штаммом L.lactis subsp.lactis F-116, эффективен противбактерий группы кишечной палочки(БГКП) E. coli, S. gallinarum, P. vulgaris, S.marsescen, и другихграмотрицательных микроорганизмов,включая P. fluorescens, а также грамположительных– S. aureus, M. flavus,B. subtilis, B. mycoides, B. coagulans, L. monocytogenes, ингибирует рост мицелиальныхгрибов A. niger, F. oxysporum, в том числе и дрожжейС. gualirmondii, R. aurantica.

Продуцент препаратаЛГС штамм F-116 является непатогенным, необладает токсическими свойствами вотношении лабораторных животных, чтоотражено в заключении о непатогенности.

Табл. 16. Ингибиторноедействие препарата ЛГС на разныемикроорганизмы в сравнении с низаплином.


Микроорганизмы

Концентрация, мг/мл

препарат ЛГС

низаплин

5

10

20

40

5

10

20

40

Диаметр зон ингибирования, мм

Bacilluscoagulans

10,0

14,0

16,4

19,0

0

10,0

13,0

16,0

Micrococcusflavus

11,0

14,3

20,0

20,0

0

9,0

12,0

14,0

Staphylococcus aureus

10,0

14,0

15,0

20,5

0

10,5

12,0

15,0

Listeriamonocytogenes

12,0

16,0

20,0

19,5

0

10,0

12,0

14,0

Salmonellagallinarum

10,5

12,0

14,0

16,5

0

0

0

0

Alcaligenesfaciens

9,0

10,0

12,0

14,0

0

0

0

0

Comamonasacidovorans

10,0

12,0

Pages:     | 1 |   ...   | 8 | 9 || 11 | 12 |   ...   | 13 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»