WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     || 2 | 3 | 4 |

На правах рукописи

Соснина Анна Евгеньевна

РОЛЬ КЛЕТОК ФАГОЦИТАРНОГО РЯДА В ПАТОГЕНЕЗЕ

МИОМЫ МАТКИ

14.00.36. – аллергология и иммунология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

Москва – 2008

Работа выполнена в Федеральном государственном учреждении «Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства имени В.Н.Городкова Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи»

Научный руководитель:

Заслуженный врач РФ,

доктор медицинских наук, профессор Наталья Юрьевна Сотникова

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Марина Александровна Стенина

Российский государственный медицинский университет

доктор медицинских наук, профессор Людмила Ивановна Краснопрошина

ГУ НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова РАМН

Ведущая организация:

ФГУ «Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени В.И.Кулакова Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи»

Защита диссертации состоится «15» декабря 2008 г. в 14.00 часов на заседании диссертационного совета Д 208.072.05 при ГОУ ВПО «Российский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» по адресу: 117997, Москва, ул. Островитянова, д.1.

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ГОУ ВПО РГМУ Росздрава по адресу: 117997, Москва, ул. Островитянова, д.1.

Автореферат разослан «14» ноября 2008 г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

кандидат медицинских наук, доцент Т.Е. Кузнецова

Актуальность темы исследования

Миома матки – доброкачественная гормонально-зависимая опухоль, развивающаяся в миометрии в результате гипертрофии и пролиферации элементов мышечной и соединительной ткани [Вихляева Е.М., 1997; Савицкий Г. А., Савицкий А. Г., 2000; Сидорова И.С., 2002]. Миома матки традиционно считается наиболее распространенным гинекологическим заболеванием, частота встречаемости которого среди женщин старше 35 лет колеблется по данным разных авторов от 25% до 50% [Савицкий Г. А., Савицкий А. Г., 2000; Тихомиров А.Л., 2006; Sozen I., е.а., 2002; Flake G.P., е.а., 2003; Miura S., е.а., 2006]. Миома матки оказывает отрицательное влияние на менструальную и репродуктивную функции, общее состояние здоровья женщины [Flake G.P., е.а., 2003; Miura S., е.а., 2006].

Патогенез миомы матки до конца не установлен. Исследованиями последних лет показано, что развитие миомы матки ассоциировано со значительными иммунными нарушениями [Колганова И.А., 2006; Малышкина А.И., 2006; Корниенко Е.Б., с соавт., 2007; Сотникова Н.Ю., 2008; Hrycek A., е.а., 2000]. Установлено, что развитие миомы матки и ее рост сопровождаются выраженным повышением уровня ряда провоспалительных цитокинов и факторов роста в ткани самой миомы [Sozen I., е.а., 2002; Dixon D., е.а., 2002; Wolanska M., е.а., 2004]. Фагоциты являются основными продуцентами провоспалительных цитокинов [Ковальчук Л.В. с соавт, 2001]. Однако нет данных о том, в какой мере меняется продукция цитокинов фагоцитами при миоме матки в зависимости от темпа и типа роста опухоли.

Известно, что фагоцитарные клетки играют важную роль в поддержании клеточного гомеостаза и противоопухолевой защите, участвуя в регуляции процессов ангиогенеза, регенерации, дифференцировки и клеточной пролиферации [Wu R., е.а., 2004; Gordon I.O., 2006; Van Ginderachter J.A., 2008]. Имеющиеся работы свидетельствуют о значительных нарушениях экспрессии различного рода рецепторов и цитокинового профиля фагоцитов при опухолевом росте [Sica A., e.a., 2007; Van Ginderachter J.A., 2008; Allavena P., e.a., 2008; Ono M., 2008; Marconi C., e.a., 2008]. Получены данные, свидетельствующие о вовлечении toll-like рецепторов (TLR) в регуляцию фагоцитарными клетками опухолевого роста [West J., e.a., 2007; Allhorn S., e.a., 2008]. Так, по литературным данным экспрессия TLR3 и TLR4 связана с ростом аденокарциномы [Allhorn S., e.a., 2008]. Известно, что этот класс рецепторов является мощным индуктором адаптивного иммунитета, проводит сигнал в клетку, запуская цитокиновый каскад при взаимодействии со своими специфическими лигандами [Симбирцев А.С., 2004; Ковальчук Л.В., с соавт., 2005; Akira S., 2003]. Однако отсутствуют данные о взаимосвязи между характером экспрессии TLRs, продукции цитокинов фагоцитарными клетками и ростом миомы матки.

Таким образом, определение роли фагоцитов в механизмах развития доброкачественного опухолевого роста у женщин с миомой матки является актуальной задачей современной клинической иммунологии, так как позволит уточнить иммунные механизмы, участвующие в развитии противоопухолевого ответа.

Цель исследования

На основании определения особенностей фенотипа и цитокинового профиля фагоцитов на системном и локальном уровне у женщин с миомой матки стабильно малых размеров и с быстрорастущей миомой матки, уточнить роль клеток фагоцитарного ряда в иммунных механизмах, определяющих темп и тип роста опухоли.

Задачи исследования

  1. Установить закономерности изменения фенотипа клеток фагоцитарного ряда на системном и локальном уровне при миоме матки в зависимости от темпа и морфологического типа роста опухоли.
  2. Определить особенности экспрессии сигнальных молекул TLR-2 и TLR-4 на поверхности клеток фагоцитарного ряда у женщин с миомой матки с различным темпом и типом роста опухоли.
  3. Выявить особенности синтеза и продукции синтеза цитокинов (IL-1, IL-12, INF, IL-8, IL-10) фагоцитами периферической крови и эндометрия у женщин с миомой матки, в зависимости от темпа и типа роста опухоли.
  4. Определить особенности содержания ряда цитокинов и уровень экспрессии генов цитокинов в миоматозных узлах у женщин с быстрорастущей миомой матки, в зависимости от типа роста опухоли.
  5. На основании выявленных особенностей клеток фагоцитарного ряда женщин с миомой матки разработать иммунологические критерии темпа роста опухоли.

Научная новизна

Установлено, что миома матки вне зависимости от темпа роста опухоли характеризуются повышенным содержанием IL-10+ моноцитов/макрофагов и TLR4+ фагоцитов, как в периферической крови, так и в эндометрии и сниженным уровнем моноцитов, экспрессирующих HLA-DR, CD11b и CD16 молекулы.

Показано, что быстрый рост миомы матки происходит на фоне снижения уровня CD11b+ макрофагов в эндометрии, увеличении количества фагоцитов крови и эндометрия, продуцирующих внутриклеточно провоспалительные цитокины, и повышенной экспрессии мРНК IL-8 в ткани эндометрия.

Установлено, что нерастущая миома матки характеризуется высоким уровнем CD16+ и низким - HLA-DR+ макрофагов в эндометрии, а также снижением уровня IL-1+ и IL-8+ фагоцитов как на системном, так и на локальном уровне.

Показано, что отличительной чертой «истинного» типа роста миомы матки за счет усиления пролиферации является высокое содержание CD105+ нейтрофилов в периферической крови, а «ложного» типа роста за счет отека – низкое содержание CD105+ моноцитов, а также высокий уровень эндометриальных INF+ и IL-12+ макрофагов, повышенное содержание IL-8 и МСР-1 в экстрактах эндометрия при усиленной экспрессии мРНК IL-8 в эндометрии.

Установлено, что в миоматозных узлах больших размеров отмечается высокое содержание IL-1 и IL-8 и усиленная экспрессия мРНК IL-8 по сравнению с неизмененным миометрием; при «истинном» типе роста миомы матки характерно высокое содержание IL-1, IL-8, MCP-1 в миоматозном узле и высокий уровень экспрессии мРНК IL-8 в ткани опухоли, а при «ложном» – низкое содержание IL-8 и м-РНК IL-8 в ткани миоматозного узла.

Выявлены закономерности изменения содержания моноцитов, продуцирующих IL-8, в зависимости от темпа роста миомы матки, на основании чего предложен новый прогностический критерий быстрого роста миомы матки.

Практическая значимость

Установлены новые патогенетические механизмы развития миомы матки, определяющие темп и тип ее роста.

Установлены новые иммунологические критерии, позволяющие оценить темп и тип роста миомы матки.

Разработан новый способ прогнозирования быстрого темпа роста опухоли, основанный на определении в периферической венозной крови содержания IL8+ моноцитов (положительное решение о выдаче патента РФ от 15.05.2008 г.).

Реализация результатов работы

Результаты диссертационной работы внедрены в практику гинекологической клиники и консультативно-диагностической поликлиники ФГУ «Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства им. В.Н.Городкова Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи».

Апробация работы

Диссертация прошла апробацию на совместной конференции сотрудников ФГУ «Ивановский НИИ материнства и детства им. В.Н. Городкова Росмедтехнологий» 23 июня 2008 года. Материалы диссертации доложены и обсуждены на научно-практической конференции молодых ученых «Неделя науки – 2006» (Иваново, 2006), на Х Всероссийской научной конференции с международным участием «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (Санкт-Петербург, 2006), на научно-практической конференции молодых ученых «Неделя науки – 2007» в рамках областного фестиваля «Молодая наука – развитию Ивановской области (Иваново, 2007), на 2-й Российской конференции «Иммунология репродукции: теоретические и клинические аспекты» (Сочи, 2007), в областном конкурсе научных работ среди молодых ученых в номинации «Естественные науки» (Иваново, 2007); на ХI Всероссийской научной конференции с международным участием «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (Санкт-Петербург, 2007); в научных чтениях, посвященных памяти академика В.И. Кулакова (Москва, 2008), на конференции ФГУ «Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства имени В.Н. Городкова Росмедтехнологий» (Иваново, 2008), на Объединенном иммунологическом форуме (Санкт-Петербург, 2008).

Основные положения, выносимые на защиту

Развитие доброкачественной опухоли в миометрии ассоциировано с увеличением периферического и эндометриального пула М2 моноцитов/макрофагов при нарушении экспрессии на поверхности фагоцитов функциональных и сигнальных молекул. Быстрый рост миомы матки связан с усилением продукции цитокинов фагоцитами крови и эндометрия, определяющим повышение содержания провоспалительных цитокинов в ткани опухоли. Пролиферативный тип роста миомы матки определяется высоким уровнем периферических нейтрофилов, экспрессирующих эндоглин, и высокой локальной продукцией провоспалительных цитокинов в миоматозных узлах.

Повышение количества IL8+ моноцитов в периферической крови ассоциируется с быстрым ростом миомы матки.

Публикации: по теме диссертации опубликовано 13 печатных работ

Структура и объем диссертации

Материалы диссертации изложены на 105 страницах, состоит из введения, обзора литературы, методов исследования, 3 глав результатов исследования, обсуждения результатов, выводов и практических рекомендаций. Работа иллюстрирована 18 рисунками и 22 таблицами. Список литературы включает 43 работы отечественных и 87 публикаций иностранных авторов.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

Работа выполнена на базе ФГУ «Ивановский НИИ материнства и детства им. В.Н.Городкова Росмедтехнологий» (директор – Заслуженный деятель науки РФ, д.м.н., проф. Л.В. Посисеева). Обследование больных осуществлялось в 1 гинекологическом отделении (зав. отделением – к.м.н. И.А.Колганова), исследования проводились в лаборатории клинической иммунологии (зав. лабораторией – Заслуженный врач РФ, д.м.н., проф. Н.Ю. Сотникова).

Всего было обследовано 110 женщин:

  1. 25 женщин имели миому матки стабильно малых размеров (общие размеры матки не превышали 9-недельного срока беременности и в течение предшествующего года наблюдения не было отмечено роста опухоли) – первая клиническая группа;
  2. 50 женщин имели быстрорастущую миому (общие размеры матки 12 недель и более и темпом роста 4-5 недель беременности и более за год наблюдения) – вторая клиническая группа;

3. 35 женщин, не имеющих гинекологической патологии на момент обследования, обратившихся в клинику для введения внутриматочных спиралей – контрольная группа.

В зависимости от типа опухолевого роста были сформированы 2 подгруппы:

1) 25 женщин с «истинным» типом роста опухоли (увеличение размеров миомы матки происходило преимущественно за счет усиления процессов клеточной пролиферации);

2) 21 женщина с «ложным» типом роста опухоли (увеличение размеров миомы матки происходило преимущественно за счет отека миоматозных узлов).

Материалом для исследования служили: периферическая венозная кровь, биоптаты эндометрия, миометрия и миоматозных узлов.

Выделение обогащенный популяций мононуклеарных и гранулоцитарных клеток из периферической крови осуществляли стандартным методом скоростного центрифугирования в двойном градиенте плотности фиколл-урографина (d=1,078, d=1,114) (Upsala, Sweden). Мононуклеарные клетки из эндометрия выделяли безферментативным механическим методом [Сhemyshov V.P., 1993].

Поверхностный фенотип и цитокиновый профиль моноцитов, нейтрофилов периферической крови и макрофагов эндометрия определяли с помощью моноклональных антител методом двухцветной проточной цитофлюориметрии на приборе FACScan (Becton Dickincon, USA) с использованием программы «LYSYS II». При определении внутриклеточной продукции цитокинов фагоцитами предварительно проводили пермеабилизацию их клеточной мембраны с помощью набора FIX & PERM (CALTAG Laboratories, USA).

Таблица 1.

Панель мАТ, использованных в исследовании

п/п

мАТ

Фирма-производитель

Флюорохромная метка

1.

анти-CD16

ООО «Сорбент», Москва

FITC

2.

анти-CD11b

ООО «Сорбент», Москва

FITC

3.

Pages:     || 2 | 3 | 4 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»