WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     || 2 | 3 | 4 |

На правах рукописи

Шульман Анна Яковлевна

Изучение полиморфизма RAGE-гена
как фактора предрасположенности к развитию псориаза

14.00.11 – Кожные и венерические болезни

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

Москва – 2008

Работа выполнена в отделении клинической дерматологии и отделе лабораторной диагностики ИППП и кожных болезней ФГУ «ЦНИКВИ Росмедтехнологий»

Научный руководитель:

доктор медицинских наук,

профессор Всеволод Георгиевич Акимов

Научный консультант:

кандидат медицинских наук Олег Александрович Терман

Официальные оппоненты:

Доктор медицинских наук, Ксения Николаевна Суворова

профессор

Доктор медицинских наук, Андрей Николаевич Львов

доцент

Ведущее научное учреждение: Российский Университет Дружбы Народов, Москва

Защита диссертации состоится «___» ________ 2008 года в 12 часов на заседании диссертационного совета Д208.115.01 при Федеральном Государственном Учреждении «Центральный научно-исследовательский кожно-венерологический институт Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи» по адресу: 107076, г.Москва, ул. Короленко д.3, стр.6.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГУ «ЦНИКВИ Росмедтехнологий»

Автореферат разослан « »__________________2008 г.

Ученый секретарь

Диссертационного совета,

кандидат медицинских наук Наталия Константиновна Иванова

Общая характеристика работы.

Актуальность работы

Проблема псориаза является одной из самых актуальных в современной

дерматологии. Это обусловлено высокой популяционной частотой, которая сегодня в подавляющем большинстве исследований оценивается в среднем в 3-5% со значительными колебаниями в зависимости от региона проживания и расовой принадлежности; хроническим, нередко тяжелым течением, неясностью этиологии и патогенеза, и, как следствие этого, несовершенством современных методов лечения (Суворова К.Н., 1990; Мордовцев В.Н., 1991; Скрипкин Ю.К., 1997; Аsumalahti K., 2003). Также следует отметить, что в последние десятилетия отмечается неуклонный рост заболеваемости псориазом, в том числе среди детей (Кубанова А.А., 2007; Мордовцев В.Н., 2002). К настоящему времени удельный вес больных псориазом среди всех больных дерматозами составляет 12-15% (Соколовский Е.В.,1999).

О медико-социальной актуальности проблемы псориаза свидетельствуют данные, приводимые Национальным фондом псориаза США (NPF – National Psoriasis Foundation): расходы на лечение составляют 1,6-3,2 млрд. долл. в год, ежегодно более 1,5 млн. человек обращаются за медицинской помощью по поводу псориаза, 10-15% случаев заболевания регистрируются у детей до 10 лет. Эти данные аналогичны таковым по Российской Федерации. В настоящее время число больных псориазом в России составляет приблизительно 3 млн. человек; отмечается тенденция к росту заболеваемости среди лиц трудоспособного возраста, увеличению числа тяжелых, непрерывно рецидивирующих форм заболевания (Беляев Г.М., 2005). Сложившаяся ситуация предполагает поиск новых путей профилактики псориаза и создания методов прогнозирования его течения. Научной основой разработки системы медицинской профилактики считаются результаты эпидемиологических исследований. В связи с широким распространением неинфекционной патологии (сердечно-сосудистые, онкологические, кожные заболевания) с 50-х гг. двадцатого столетия термин «эпидемиология» стал применяться не только по отношению к инфекционным болезням. Для того чтобы программа клинической профилактики была эффективной, она должна быть целенаправленной (Оганов Р.Г., Хальфин Р.А., 2007), то есть профилактические мероприятия необходимо проводить в первую осчередь в отношении лиц, имеющих генетическую предрасположенность к псориазу.

На современном этапе развития медицины разработка новых этиопатогенетических, фармакогенетических методов лечения заболеваний с генетической предрасположенностью, в том числе и псориаза, становится возможной в значительной мере благодаря выявлению изменений в организме больного на молекулярно - генетическом уровне (точечный нуклеотидный полиморфизм) (Новик А.А., 2001). Эти методы требуют внедрения новых высокотехнологичных методов исследования, какими являются методы ДНК-диагностики, в том числе, с использованием полимеразной цепной реакции. Благодаря этим технологиям появилась возможность изучать полиморфизм генов, ассоциированных с предрасположенностью к псориазу. Кроме того, по данным литературы подобные исследования в Российской Федерации крайне малочисленны.

Настоящая работа представляет собой проблемно-ориентированное поисковое исследование, создающее научно-технический задел для реализации масштабных проектов в области молекулярно-генетических исследований мультифакториальных дерматозов и развития персонифицированной медицины.

Риск развития псориаза в зависимости от степени родства с больным пробандом составляет при первой степени родства - 5,6-6,3%, при второй степени - 3,1%, при третьей степени - 1,35% (Мутовин Г.Р., 2001). Эти данные получены с использованием популяционно-статистического, клинического и генеалогического методов исследования.

Методологический и технологический прорыв в развитии молекулярной генетики и постгеномных технологий последнего десятилетия позволил проводить исследования на новом - молекулярно-генетическом уровне.

К настоящему времени выявлен ряд генов и хромосом, ассоциированных с предрасположенностью к псориазу (PSORS1- PSORS9, MICA, HLA-В13, HLA-В17, HLA-21 и другие).

Особый интерес представляет изучение RAGE-гена (Receptor of Advanced Glycation End Рroducts), который локализован в коротком плече 6-ой хромосомы (6р21.3) и участвует в регуляции воспалительного процесса, в том числе, при псориатическом артрите, экспрессии рецепторов апоптоза кератиноцитов, антиоксидантной активности клеток (Kankova K., 2001; Hofmann M.A., 1999).

Цель исследования.

Изучение нуклеотидного полиморфизма RAGE-гена в российской популяции как фактора предрасположенности к псориазу с целью прогнозирования течения заболевания.

Задачи исследования:

1. Выявление клинически значимых генетических маркеров псориаза в RAGE-гене человека.

2. Анализ полиморфизма RAGE-гена и его роли в развитии псориаза.

3. Разработка молекулярного метода диагностики предрасположенности к псориазу на основе анализа полиморфизма RAGE-гена.

4. Разработка комплекса профилактических мер, направленных на снижение риска манифестации псориаза.
Научная новизна.

Впервые в Российской популяции изучался полиморфизм RAGE-гена. Предложен и апробирован метод определения генетических маркеров псориаза в соматических клетках (лейкоцитах крови) человека.

На основании анализа результатов клинического обследования, генеалогического анализа и молекулярно-генетических методов исследования выявлены закономерности в клинических проявлениях псориаза в зависимости от типа нуклеотидного полиморфизма RAGE-гена.

На основе полученных данных установлена диагностическая ценность определения полиморфизма RAGE-гена как фактора риска развития заболевания.

Предложен метод молекулярной диагностики предрасположенности к псориазу.

Практическая значимость.

Проведенные исследования обосновывают необходимость внедрения в клиническую практику молекулярных методов диагностики предрасположенности к псориазу. Была сконструирована тест-система для ДНК-диагностики мутаций в RAGE-гене и разработан метод генодиагностики мутаций RAGE-гена как фактора риска развития псориаза.

Внедрен в практику комплекс мер первичной профилактики псориаза, что позволяет снизить риск манифестации заболевания у лиц с генетической предрасположенностью к этому дерматозу.

Основные положения, выносимые на защиту:

  • Достоверно значимым маркером псориаза в RAGE-гене является сайт 2184A/G.
  • Ассоциированным с псориазом в сайте 2184A/G является аллель G.
  • Тяжелая форма вульгарного псориаза, более раннее его начало и анамнестически отягощенная наследственность ассоциированы с аллелем G в сайте 2184A/G RAGE-гена.

Внедрение результатов исследования.

Результаты исследования используются в учебном процессе на кафедре дерматовенерологии Самарского государственного медицинского университета, в научно-исследовательской работе и учебном процессе Центрального научно-исследовательского кожно-венерологического института.

Апробация работы.

Основные положения и выводы диссертации доложены и обсуждены:

  • на научно-практической конференции ГУ «ЦНИКВИ Росздрава» г.Москва 20 мая 2005 года;
  • на IX Всероссийском съезде дерматовенерологов; Москва. 7-10 июня 2005;
  • на научно-практической конференции, посвященной 50-летию кафедры кожных и венерических болезней ГОУ ВПО Тверской ГМА 19 мая 2006 года;
  • на II Всероссийском конгрессе дерматовенерологов; Санкт-Петербург 25-28 сентября 2007 года.

По материалам исследования опубликовано 7 печатных работ:

Диссертация состоит из введения, обзора литературы и глав, содержащих материалы и методы исследования, результатов собственных исследований, заключения, выводов, указателя литературы, содержащего 129 источников, из них 35 отечественных и 94 иностранных. Работа изложена на 102 страницах компьютерного текста, иллюстрирована 12 таблицами и 21 рисунком.

Этапы исследования.

  • Клиническая характеристика и изучение личного и семейного анамнеза больных псориазом, формирование групп обследуемых;
  • Выделение геномной ДНК из лейкоцитов человека, создание банка образцов ДНК;
  • Синтез праймеров к 3 мишеням в RAGE-гене, конструирование тест-системы для проведения ПЦР;
  • Постановка ПЦР, получение продуктов амплификации;
  • Проведение рестрикционного анализа аллельного полиморфизма сайтов RAGE2184A/G, G82S и 1704 G/T с помощью специфических эндонуклеаз рестрикции;
  • Статистическая обработка и анализ полученных данных

Содержание работы

Объем и методы исследований

Обследовано 115 человек в возрасте от 6 до 72 лет, из них мужчин было – 48 (41,7%), женщин – 67 (58,3%). Все обследуемые были разделены на 4 группы: I группа (основная) состояла из больных псориазом (52 человека); II группа (сравнения) - 17 человек, в том числе 9 больных атопическим дерматитом, 5 - красным плоским лишаем, 3 - ихтиозом; III группа состояла из здоровых родственников больных псориазом (39 человек); IV группу (контрольную) составили здоровые добровольцы (7 человек).

Родственники пробандов (больных псориазом, через которых осуществлялась регистрация обследуемой семьи), страдающие псориазом, были отнесены в первую группу.

Материалом для проведения молекулярно-генетических исследований была венозная кровь.

Методы исследования:

-клиническое обследование;

-генеалогический анализ;

-молекулярно-генетические методы: полимеразная цепная реакция, рестрикционный анализ, метод электрофореза в агарозном геле;

-статистические методы;

Каждому пациенту был поставлен диагноз с указанием формы псориаза, стадии, сезонности; для артропатического псориаза – с указанием формы и степени активности, рассчитан индекс PASI на момент осмотра. Подробно были изучены и проанализированы данные анамнеза заболевания (первые проявления, развитие заболевания, проведенное лечение).

Сбор генетической информации проводился путем опроса и клинического обследования членов семьи. При составлении родословной велась запись данных о каждом члене рода с указанием его родства по отношению к пробанду. В рамках метода мы устанавливали следующие сведения: фамилия, имя, отчество, дата рождения и смерти, возраст, национальность, место жительства, профессия, наличие перенесенных, хронических и наследственно-обусловленных заболеваний, причина смерти.

Затем, используя систему условных обозначений, составляли графическое изображение родословной (рис.1).

Условные обозначения:

Мужчина больной

Женщина здоровая

Пробанд

Рис. 1

Графическое изображение родословной больного К.

Для проведения анализа взаимосвязи между полиморфизмом RAGE-гена и предрасположенностью к псориазу на каждого пациента был составлен индивидуальный генетический паспорт, который включал клинико-анамнестические сведения об обследуемом лице и результаты изучения полиморфизма трех сайтов RAGE-гена (таблица 1).

Таблица 1.

Генетический паспорт

№ пробы

Пол

Возраст

RAGE2184

RAGE82

RAGE1704

Группа

Род связи

Начало заболевания

Степень тяжести

Наследственность

Форма заболевания

аллель

аллель

аллель

аллель

аллель

аллель

1

М

40

А

Pages:     || 2 | 3 | 4 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»