WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 | 2 || 4 |

ИФА тест-ситемы

3-го поколения

Иммуноблотинг

РНК HCV

ПЦР-анализ

7 дней

Как видно из таблицы 2, в 2000 и 2001г. для диагностики ВГС лаборатория СПК ДЗ г. Москвы использовала ИФА тест-системы 2-го поколения. С 2002г. для диагностики ВГС стали использоваться ИФА тест-системы 3 поколения, которые отличаются от тест-систем 2-го поколения более высокой чувствительностью и набором выявляемых антигенов.

С целью улучшения скрининга на основании анализа работы лаборатории предыдущих лет серая зона при постановке ИФА была увеличена с указанной в методике до 20%. Увеличение размера «серой зоны» привело к незначительному увеличению ложноположительных результатов, которые трактовались как «положительная реакция» для выбраковки гемопродукции, но не использовались для постановки лабораторного диагноза и отвода донора от донорства. Внедрение более современных тест-систем и увеличение размера «серой зоны» снизили вероятность заражения доноров, но не повлияли на период серологического окна.

В 2007 г. нами было внедрено повторное серологическое обследование через 1-3 месяца доноров с сомнительными результатами на наличие anti-HCV, которое позволило снизить абсолютный отвод от донорства и сохранить гемопродукцию здоровых доноров. Введение в 2008 г. дополнительного РНК–тестирования всех серонегативных на anti-HCV образцов крови доноров позволило сократить период серологического окна до 7 дней.

Проведя мониторинг выявляемости вирусного гепатита С у доноров станции переливания крови ДЗ г. Москвы, изучив применяемые для диагностики ВГС методы и приемы лабораторного анализа, действующую нормативно-правовую базу в сфере обеспечения инфекционной безопасности гемотрансфузий, а также инструкции по лабораторной апробации крови в централизованной клинико-диагностической лаборатории, действовавшие в период с 2000 по 2005 год, нами был предложен новый алгоритм лабораторной диагностики вирусного гепатита С у доноров крови (рисунок 4).

Как видно на представленной схеме, на первом этапе исследования каждый образец сыворотки крови доноров исследуется в дублях на наличие anti-HCV методом твердофазного иммуноферментного анализа (первая постановка ИФА). По результатам полученным на 1 этапе выбирается дальнейший ход анализа. Все серонегативные на anti-HCV образцы на втором этапе анализа направляются на РНК-тестирование, а все образцы положительные на наличие anti-HCV и со значениями оптической плотности в границах 20% «серой зоны» повторно исследуются на anti-HCV методом ИФА.

Рисунок 4. Алгоритм лабораторной диагностики вирусного гепатита С у доноров крови.

По результатам РНК-тестирования серонегативных на anti-HCV образцов решается вопрос о необходимости дальнейшего клинического обследования донора и возможности использования полученной от данного донора гемопродукции. При получении отрицательных результатов на РНК HCV донор признается здоровым, плазма крови подлежит карантинизации, клеточные компоненты крови реализуются. При получении положительного результата на РНК HCV донор с лабораторным диагнозом «РНК-позитивный» направляется на клиническое обследование.

При получении сомнительных результатов на наличие РНК HCV в исследуемом образце, донор с лабораторным диагнозом «Сомнительная реакция на РНК HCV» направляется на повторное серологическое обследование через 1-3 месяца, заготовленная плазма карантинизируется до получения результатов сероконтроля, а клеточные компоненты крови утилизируются.

В зависимости от результатов, полученных в ходе анализа, выполненном на втором этапе исследования методом ИФА, образцы могут быть направлены на 3 этап. В том случае, если при второй постановке ИФА получен отрицательный результат на anti-HCV, донор временно отстраняется от донорства с лабораторным диагнозом «Неспецифическая реакция на ВГС» и направляется на повторное серологическое обследование через 1-3 месяца, заготовленная плазма карантинизируется до получения результатов сероконтроля, а компоненты крови утилизируются. Все образцы положительные на anti-HCV при второй постановке ИФА и со значениями оптической плотности образца в границах 20% «серой зоны» направляются на 3 этап исследования для проведения подтверждающего теста на anti-HCV методом иммунологического блотинга. Все подлежащие и не подлежащие карантинизации компоненты крови доноров с сомнительными значениями тестов подлежат утилизации. Постановка лабораторного диагноза таким донорам происходит после получения результатов подтверждающего теста.

В случае получения положительного результата иммунологического блотинга донор с лабораторным диагнозом «Вирусный гепатит С» направляется на клиническое обследование. Доноры с отрицательным и неопределенным результатом подтверждающего теста с лабораторным диагнозом «Неспецифическая реакция на ВГС» направляются на повторное серологическое обследование через 1-3 месяца.

Новый алгоритм позволяет не только поставить лабораторный диагноз, но и определить возможность использования заготовленной гемопродукции.

Нами произведена оценка эффективности разработанного алгоритма лабораторной диагностики вирусного гепатита С у доноров крови.

Ориентировочно оценить эффективность внедрения каждого диагностического этапа лабораторного исследования можно с использованием относительного показателя брака, то есть отношения количества выявленных диагностическим методом положительных образцов к общему числу обследованных лиц. Рассчитанные относительные показатели брака, отражающие этапы данного исследования, представлены в таблице 3.

Таблица 3. Относительные показатели брака на этапах внедрения разработанного алгоритма.

Принятые меры по увеличению инфекционной безопасности

Количество обследованных доноров

Выявлено ВГС до внедрения этапа

Дополнительно выявлено ВГС после внедрения этапа

Увеличение эффективности

Увеличение серонегативной зоны до 20% (2003 г.)

35704

-

-

-

Серологический контроль через 1-3 месяца (2007 г.)

37250

396

7

0,019%*

Определение РНК HCV (2008 г.)

47146

479

10

0,0212%*

Примечание: *p < 0,05

Для оценки эффективности внедрения в скрининг донорской крови РНК-тестирования произведен расчет остаточного риска трансфузионно-трансмиссивной передачи ВГС с использованием математической модели «инцидентность/период окна»[Cardoso M.S., Koerner K., 1998;] (таблица 4).

Таблица 4. Остаточный риск трансфузионно-трансмиссивной передачи вирусного гепатита С в г. Москве.

Годы

Количество доноров всего

Количество повторных доноров с ВГС

Итого человеко-лет

«Период окна»

Выявляемость (нцидентность) на 100 000 человеко-лет

Резидуальный (остаточный) риск

на 1 млн донаций

2000

38320

43

37259,06

66

115,5155

5,7±1,6*

2001

38512

47

37359,37

66

125,1627

5,3±1,6*

2002

33510

46

32383,99

66

141,0574

4,6±1,5*

2003

35704

31

34947,74

48

87,78823

5,5±1,6*

2004

38860

25

38251,64

48

64,52011

7,4±1,5*

2005

35580

23

35014,04

48

65,5737

7,3±1,6*

2006

37070

19

36592,78

48

52,90662

9,0±1,5*

2007

37250

20

36863,69

48

54,25393

8,8±1,5*

2008

47146

28

46666,8

7

59,99983

1,1±1,7*

Примечание: *p<0,05

В 2000 году остаточный риск составил 5,7±1,6 на 1 млн донаций, а к 2002 году снизился до 4,6±1,5 на 1 млн донаций (p<0,05) (таблица 4).

Достоверное снижение остаточного риска в 2002 году по сравнению с 2000 годом можно объяснить следующими факторами. Методика проведения исследования на anti-HCV в 2000 и 2002 году не изменялась, использовались одинаковые тест-системы с периодом серологического окна равным 66 дням, однако в 2002 году при постановке лабораторного диагноза «Вирусный гепатит С» «серая зона» была увеличена до 20%. В 2003 году в алгоритм введен подтверждающий тест, что сократило получение ложноположительных результатов при постановке ИФА. Это повысило остаточный риск до 5,5±1,6 на 1 млн донаций (p<0,05).

В период с 2003 по 2007 для определения anti-HCV применялись тест-системы 3-го поколения с периодом «серологического окна» 48 дней. Остаточный риск вплоть до 2007 года продолжал достоверно снижаться, что объясняется увеличением числа повторных доноров с подтвержденным лабораторным диагнозом «Вирусный гепатит С». Показатель инцидентности ВГС среди повторных доноров не коррелирует с показателем инцидентности среди всех доноров СПК и остается на достаточно высоком уровне несмотря на общие тенденции к снижению выявляемости ВГС у доноров СПК ДЗ г. Москвы. Данный факт отражает ограничения в использовании математической модели «инцидентность/период окна» для оценки эффективности разработанного алгоритма в целом. В частности, данная модель не учитывает положительного влияния на увеличение инфекционной безопасности гемотрансфузии принятых мер по расширению «серой зоны» до 20%, внедрения подтверждающего теста и процедуры повторного серологического контроля через 1-3 месяца.

Несмотря на перечисленные выше ограничения математической модели, она подходит для анализа эффективности новых методов лабораторной диагностики, в частности, ПЦР-анализа и широко используется зарубежными исследователями при вычислении остаточного риска трансфузионно-трансмиссивной передачи вирусных инфекций.

Определение РНК HCV в крови серонегативных на anti-HCV доноров позволило снизить резидуальный риск развития посттрансфузионного ВГС с 8,8±1,5 на 1 млн. донаций в период до внедрения РНК-тестирования до 1,1±1,7 на 1 млн. донаций после внедрения (таблица 4). Полученные нами данные по остаточному риску в период до и после использования метода РНК-тестирования соответствуют мировым показателям.

Pages:     | 1 | 2 || 4 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»