WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 || 3 | 4 |

К началу данного исследования алгоритм лабораторной диагностики ВГС у доноров крови включал две постановки ИФА на наличие anti-HCV. Первая постановка проводилась для всех без исключения исследуемых образцов, вторая постановка проводилась в тот же день при получении положительных или сомнительных результатов для исключения технических ошибок анализа и увеличения надежности полученных данных. Для подтверждения наличия инфекции, все положительные в двух постановках ИФА образцы дополнительно тестировались более чувствительным методом линейного иммунохимического блотинга для определения антител к специфическим белкам HCV.

Основная задача при обследовании доноров на вирусные инфекции – снижение вероятности инфицирования потенциальных реципиентов. Современное законодательство регламентирует определение в крови доноров уровня АЛТ и антител к вирусу гепатита С, однако они не являются универсальными маркерами заболевания.

На каждом этапе развития инфекционного процесса присутствуют различные маркеры вирусного гепатита С, как неспецифические АЛТ, так и специфические - антитела к HCV, вирусная РНК (рисунок 1).

Рисунок 1. Маркеры вирусного гепатита С в различные периоды инфекционного процесса.

Ни один из маркеров ВГС не бывает повышен в крови в течение всего периода заболевания. Для вируса гепатита С характерно наличие «серологического окна», то есть промежутка времени, в течение которого антитела к вирусу гепатита С не определяются. С целью обеспечения инфекционной безопасности гемотрансфузионной терапии необходимо проводить комплексное исследование маркеров ВГС крови доноров с использованием различных методов, искать новые подходы и алгоритмы лабораторной диагностики.

Процедура повторного серологического контроля

Длительность периода (в среднем 66 дней) сероконверсии, то есть периода от момента заражения до выявления anti-HCV при вирусном гепатите С и аналитическая ограниченность современных методов лабораторной диагностики привели к необходимости поиска и внедрения новых подходов при скрининге донорской крови на ВГС. В частности, была предложена процедура повторного серологического контроля доноров.

На повторное обследование направлялись доноры, у которых в исследуемом образце при первичном скрининговом исследовании на anti-HCV методом ИФА значения оптической плотности образца находились в пределах «серой зоны», то есть рассматривались как сомнительные результаты, а подтверждающий тест с использованием иммунологического блотинга отрицательный или неопределенный.

Появление сомнительных результатов может быть связано с недостаточным уровнем антител у инфицированных пациентов на данном этапе заболевания, или наличием перекрестных реакций с другими антигенами при отсутствии выявляемой патологии. Повторное обследование доноров через промежуток времени от 1 до 3 месяцев значительно повышает вероятность появления определяемого уровня anti-HCV у лиц с наличием инфекции.

В исследуемую группу было включено 99 доноров. Проведенное повторное лабораторное обследование не выявило у 70 (70,7%) доноров антител к вирусу гепатита С, и лабораторный диагноз «Вирусный гепатит С» был снят. Вместе с тем, в сыворотке крови 5-ти (5,0%) доноров из исследуемой группы были обнаружены anti-HCV и поставлен лабораторный диагноз «Вирусный гепатит С». От донорства данные лица были отстранены и направлены на клиническое обследование в гепатологический центр инфекционной клинической больницы № 1 ДЗ г. Москвы. У 24 (24,2%) доноров при серологическом исследовании были получены сомнительные результаты, которые расценивались как неспецифическая реакция на anti-HCV. Эти лица также были отстранены от донорства и направлены на клиническое обследование.

Эффективность внедрения повторного лабораторного обследования доноров на наличие маркеров вирусного гепатита С представлена на рисунке 2.

Рисунок 2. Результаты повторного серологического контроля на маркеры ВГС.

После клинического обследования 24 доноров с неспецифической реакцией, двум из них был поставлен диагноз ВГС, у остальных диагноз остался неопределенным.

Таким образом, семи донорам (7,1%) из 99 при динамическом наблюдении и дополнительном клиническом обследовании был поставлен диагноз «Вирусный гепатит С» и заготовленная от них продукция была забракована, чем предупреждено инфицирование возможных реципиентов. Здоровые доноры в количестве 70 человек (70,7%) были восстановлены в донорстве

Результаты лабораторного исследования определяют алгоритм дальнейшего использования заготовленной гемопродукции. Из всех компонентов крови наибольший срок годности имеет свежезамороженная плазма. Она подвергается глубокой заморозке и обязательному хранению (карантинизации) до 3-х месяцев. По результатам проведенного повторного серологического контроля плазма 70 доноров с отрицательной серологической реакцией на ВГС была карантинизирована и впоследствии реализована, плазма остальных 29 доноров забракована и утилизирована.

Внедрение процедуры повторного серологического контроля позволило в 2007 году возвратить в донорский контингент 70 человек, у которых был получен отрицательный результат в ходе обследования на anti-HCV, что составило 0,19 % от общего числа (37250) доноров плазмы и крови. Плазма крови этих доноров была использована для гемотрансфузии.

В то же время, доноры с положительной реакцией на anti-HCV (5 человек, 0,013%) получили абсолютный отвод от донорства, а все компоненты крови были утилизированы.

Согласно алгоритму, который использовался ранее, и был регламентирован приказами Минздрава РФ, карантинизированные и не подлежащие карантинизации компоненты крови доноров с сомнительными результатами исследований на ВГС могли быть использованы для реципиентов.

Таким образом, введение повторного серологического контроля через 1-3 месяца крови доноров, у которых при первом проведении ИФА образец расценивался как сомнительный, при втором проведении ИФА получен отрицательный результат на anti-HCV, а подтверждающий тест отрицательный или неопределенный, позволило на 0,013% (p<0,05, n=37250) снизить риск инфицирования реципиентов при применении компонентов крови, и на 0,19% (p<0,05, n=37250) уменьшить абсолютный отвод от донорства.

Тестирование нуклеиновых кислот

С января 2008г. в скрининг крови доноров на наличие маркеров ВГС была внедрена процедура тестирования всех серонегативных на anti-HCV образцов на наличие РНК вируса гепатита С. РНК-тестирование осуществлялось методом ПЦР-анализа в режиме реального времени.

РНК HCV появляется в крови определяемых количествах на 6-10 день от момента инфицирования (рисунок 1). При переходе вируса в клетки-мишени его РНК может не определяться в кровеносном русле вплоть до момента появления виремии. Поэтому РНК HCV является наиболее ранним маркером заболевания и широко исследуется за рубежом при скрининге донорской крови [Chiavetta J.A., 2003; Dodd R.Y., Stramer S.L., 2002].

На РНК HCV было исследовано 58655 серонегативных на anti-HCV образцов плазмы крови. Полученные результаты представлены в таблице 1.

При первой постановке ПЦР 14 (0,024%) образцов оказались положительными на наличие РНК вируса гепатита С. Все РНК-положительные образцы повторно исследовались тем же методом для исключения технических ошибок анализа в рамках действующей в лаборатории системы контроля качества. При повторном ПЦР-анализе образцов 10 из 14 были подтверждены как положительные и 4 как отрицательные.

Таблица 1. Выявляемость РНК HCV у доноров крови серонегативных на anti-HCV.

Результаты

Всего исследовано на РНК HCV

РНК-позитвные (первая постановка)

РНК-позитвные (повторное исследование)

Сомнительная реакция на РНК

Абсолютное число

58655

14*

10*

4*

%

100%

0,024%

0,017%

0,007%

Примечание: *p<0,05

Таким образом, по итогам тестирования образцов на наличие РНК вируса гепатита С, 10 (0,017%) донорам был поставлен лабораторный диагноз «РНК-позитивный ВГС», от донорства данные лица были отстранены и направлены на клиническое обследование. Все заготовленные от данных доноров компоненты крови были утилизированы. В 4-х случаях (0,007%) получена «сомнительная реакция на РНК HCV». Данные лица были временно отстранены от донорства, плазма передана на карантинизацию до получения результатов повторного серологического контроля через 1 месяц, а не подлежащие карантинизации компоненты утилизированы.

До внедрения в алгоритм лабораторной диагностики вирусного гепатита С у доноров тестирования нуклеиновых кислот, 10 выявленных нами «РНК-позитивных ВГС» доноров, могли быть признаны здоровыми.

Из одной дозы цельной крови полученной от такого донора может быть заготовлено, в среднем, 4 гемокомпонента, которые могут быть перелиты 4-м потенциальным реципиентам. Выявление 10 доноров с положительной реакцией на РНК HCV из числа серонегативных на anti-HCV позволило предотвратить инфицирование ВГС 38 потенциальных реципиентов.

Таким образом, внедрение тестирования серонегативных на anti-HCV образцов сыворотки крови доноров на наличие РНК HCV позволило снизить риск инфицирования реципиентов вирусным гепатитом С при применении компонентов крови.

Выявляемость маркеров вирусного гепатита С

Проанализированы 341952 карты доноров за период с 01.01.2000г. по 31.12.2008 г. Изучено распределение годовых показателей выявляемости (инцидентности) вирусного гепатита С у доноров СПК ДЗ г. Москвы. Выявляемость ВГС у доноров крови в период с 2000 по 2008 гг. графически отражена на рисунке 3.

Изменение тенденции выявляемости ВГС у доноров крови, в основном, соответствует тенденциям заболеваемости ВГС населения Российской Федерации в целом за период наблюдения [ Новоселов А.В., Нижечик Ю.С., и др.,1997; Онищенко Г.И., 2008].

Как видно из рисунка 3, в период с 2000 по 2002 год отмечался рост выявляемости ВГС у доноров крови, который достиг уровня 34,08±0,02 на 1000 доноров.

Рисунок 3. Выявляемость ВГС у доноров СПК ДЗ г. Москвы с 2000 по 2008 г.

Увеличение выявляемости ВГС среди доноров в 2002, которое отличается от показателя инцидентности среди населения РФ, связано с искусственным увеличением «серой зоны» при определении anti-HCV для обеспечения инфекционной безопасности гемокомпонентов подлежащих карантинизации.

Начиная с 2003 года показатель инцидентности начал снижаться и в 2008 году составил 10,37±0,01на 1000 доноров. Таким образом, показатель инцидентности ВГС к 2008 году снизился в 3,2 раза по сравнению с 2002 годом.

Снижение показателя инцидентности связано как с общим уменьшением заболеваемости ВГС населения РФ, так и совершенствованием методов лабораторной диагностики ВГС.

За период времени с 2000 по 2008 гг. для выявления у доноров ВГС изменялись тест-системы для ИФА, а также добавлялись новые методы исследования (таблица 2).

Таблица 2. Тест-системы для выявления маркеров ВГС у доноров крови ЦКДЛ СПК ДЗ г. Москвы в период с 2000 по 2008 год.

Год

Тип тест-системы

Период серологического окна

2000

ИФА тест-ситемы 2-го поколения

66 дней

2001

ИФА тест-ситемы 2-го поколения

66 дней

2002

ИФА тест-ситемы 3-го поколения

66 дней

2003

ИФА тест-ситемы

3-го поколения

Иммуноблотинг

48 дней

2004

ИФА тест-ситемы

3-го поколения

Иммуноблотинг

48 дней

2005

ИФА тест-ситемы

3-го поколения

Иммуноблотинг

48 дней

2006

ИФА тест-ситемы

3-го поколения

Иммуноблотинг

48 дней

2007

ИФА тест-ситемы

3-го поколения

Иммуноблотинг

48 дней

2008

Pages:     | 1 || 3 | 4 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»