WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 |   ...   | 3 | 4 ||

Рисунок 10. Рисунок 6. Хроматограммы сиквенса продуктов ПЦР, полученных при амплификации бисульфит-модифицированной ДНК промоторного участка гена IFI30 в клеточной линии РПЖ LNCaP и в нормальной ткани предстательной железы (НП). Стрелками отмечено присутствие цитозина (С) в CpG динуклеотидах в клеточной линии РПЖ и тимина (Т) – в нормальной ткани.

Результаты анализа частоты метилирования показали отсутствие метилирования в клинических образцах ПИН и РПЖ различных стадий. На рис. 11 представлены хроматограммы сиквенсов трех клинических образцов.

Рисунок 11. Хроматограммы сиквенса продуктов ПЦР, полученных при амплификации бисульфит-модифицированной ДНК промоторного участка гена IFI30 в клинических образцах РПЖ (а, б) и ПИН (в) Стрелками отмечены наличие тимина в составе CpG-динуклеотида, что означает отсутствие метилирования в образце.

Ген ANXA2. Ген ANXA2 располагается на пятнадцатой хромосоме, на участке q22.2. Аннексины – семейство Са2+-зависимых белков с фосфолипидо-связывающей активностью. На данный момент открыто более 20 различных анексинов (Morgan et al., 1997). ANXA2, известный также как р36, липокортин II и калпактин I, изначально был идентифицирован как одна из главных мишеней для фосфорилирования белком рр60 (Erikson et al., 1980). ANXA2 существует в формах мономера, гетеродимера и гетеротетрамера (соместно с белком р11). До сих пор функция ANXA2 до конца не выяснена. Предполагается, что он принимает участие в Са2+-зависимом экзо-, эндоцитозах, в клеточной адгезии (Mai J. et al., 2000), пролиферации (Chiang Y. et al., 1999), фибринолизе клеточной поверхности (Hajjar K.A. et al., 2000), а также в формировании остеокластов и костной ресорбции (Takahashi S. et al., 1994). Было показано, что в опухолевых клетках предстательной железы снижена или полностью отсутствует экспрессия ANXA2, и что реэкспрессия данного гена приводит к замедлению метастазирования опухоли, но не влияет на пролиферацию и выживаемость опухолевых клеток (Liu et al., 2003). Обработка клеток клеточных линий РПЖ ингибиторами процесса метилирования вызвала повышение экспрессии гена ANXA2 в 3,1-3,6 раз. Анализ промоторного участка показал наличие CpG-островка длиной 912 п.н. Состав GC = 65,9%, Н/Т = 0,68. Для анализа статуса метилирования гена ANXA2 были сконструированы праймеры для участка длиной 391 п.н., содержащего 41 CpG динуклеотидов. Результаты секвенирования представлены ниже на рис.12.

Рисунок 12. Рисунок 6. Хроматограммы сиквенса продуктов ПЦР, полученных при амплификации бисульфит-модифицированной ДНК промоторного участка гена ANXA2 в клеточной линии РПЖ LNCaP и в нормальной ткани предстательной железы (НП). Стрелками отмечено присутствие цитозина (С) в CpG динуклеотидах в клеточной линии РПЖ и тимина (Т) – в нормальной ткани.

Метилирование CpG-островка гена ANXA2 было показано только для клеточной линии РПЖ LNCaP. Анализ клинических образцов РПЖ и ПИН с использованием методов секвенирования и ПЦР в реальном времени продемонстрировал отсутствие метилирования (рис.13).

Рисунок 13. Хроматограммы сиквенса продуктов ПЦР, полученных при амплификации бисульфит-модифицированной ДНК промоторного участка гена ANXA2 в клинических образцах РПЖ (а, б) и ПИН (в) Стрелками отмечены наличие тимина в составе CpG-динуклеотида, что означает отсутствие метилирования в образце.

Таким образом, отсутствие метилирования в генах AQP3, IFI30, ANXA2 в клинических образцах ПИН и РПЖ различных стадий свидетельствуют о минимальном влиянии эпигенетических механизмов на регуляцию экспрессии вышеперечисленных генов.

ВЫВОДЫ

  1. В двух андроген – зависимых клеточных линиях рака предстательной железы LNCaP и MDA2b и в двух андроген – независимых клеточных линиях рака предстательной железы DU-145 и PC-3 идентифицировано 170 генов, экспрессия которых увеличилась в результате ингибирования процесса метилирования ДНК.
  2. Из 170 генов, экспрессия которых увеличилась в результате ингибирования процесса метилирования ДНК, 25 имеют в составе своих промоторов CpG-островки и транскрипционно активны в клетках морфологически нормальной предстательной железы;
  3. Гены TACSTD2, PDLIM4, ANXA2, IFI30, GADD45b, AQP3, KRT7, SLC15A3 метилированы в клеточных линиях рака предстательной железы, в отличие от морфологически нормальной ткани простаты, где метилирование данных генов обнаружено не было;
  4. CpG-островок промотора гена PDLIM4 гиперметилирован в образцах рака предстательной железы. Частота метилирования гена PDLIM4 составила 65% при раке предстательной железы ранней стадии и 82% при раке предстательной железы поздней стадии. Такие высокие показатели частоты метилирования свидетельствует о потенциальной возможности использования гена PDLIM4 в ранней диагностике рака предстательной железы.
  5. Частота метилирования гена KRT7 в образцах рака предстательной железы ранней стадии составила 70%, в образцах рака предстательной железы поздней стадии – 35%, при простатической интраэпителиальной неоплазии – 53%.
  6. Частота метилирования гена SLC15A3 составила 70% при раке предстательной железы ранней стадии, 65% при раке предстательной железы поздней стадии, 37% при простатической интраэпителиальной неоплазии.
  7. Анализ частоты метилирования генов TACSTD2 и GADD45b в клинических образцах простатической интраэпителиальной неоплазии и рака предстательной железы продемонстрировал невысокий показатель метилирования, что говорит о небольшом вкладе эпигенетических механизмов в регуляцию экспрессии данных генов.
  8. Анализ частоты метилирования в клинических образцах простатической интраэпителиальной неоплазии и рака предстательной железы различных стадий показал отсутствие метилирования генов ANXA2, AQP3, IFI30.

СПИСОК ОСНОВНЫХ ПУБЛИКАЦИЙ

  1. Ibragimova I.I. Methylation of tumor-suppressor genes in prostate cancer / I.I. Ibragimova, P.J. Cairns // abstracts / Postdoctoral and Graduate Student Research Conference. - Philadelphia (USA), 2007.
  2. Ibragimova I.I. Methylation of PDLIM4 gene in prostate cancer / I.I. Ibragimova, P.J. Cairns // abstracts / Postdoctoral and Graduate Student Research Conference. - Philadelphia (USA), 2008.
  3. Ибрагимова И.И. Метилирование промоторного участка гена PDLIM4 при раке предстательной железы / И.И. Ибрагимова, А.Н. Фаттахова // Материалы XLVI международной научной студенческой конференций "Студент и научно-технический прогресс". - Новосибирск, 2008. – С.37-38.
  4. Ибрагимова И.И. Изучения статуса метилирования генов BASP1, PDLIM4, IFI30, ARL6IP при раке предстательной железа / И.И. Ибрагимова, А.Н. Фаттахова // Сборник материалов I Всероссийского конгресса студентов и аспирантов - биологов «Симбиоз-Россия-2008». - Казань, 2008. – С. 14-15.
  5. Ибрагимова И.И. Анализ метилирования генов-супрессоров опухолевого развития при раке предстательной железы / И.И Ибрагимова, А.Н. Фаттахова // Материалы научно-практической конференции «Постгеномная эра в биологии и проблемы биотехнологии». - Казань, 2008. – С.34
  6. Ibanez de Caceres I. Identification of novel tumor suppressor genes by epigenetic reactivation in prostate cancer / I. Ibanez de Caseres, I. Ibragimova, A. Hoffman, P. Cairns, A.N. Fattahova // Материалы научно-практической конференции «Постгеномная эра в биологии и проблемы биотехнологии». - Казань, 2008. – С.159-160.
  7. Ибрагимова И.И. Анализ метилирования промоторного участка гена PDLIM4 при раке предстательной железы / И.И. Ибрагимова, А.Н. Фаттахова // Ученые записки Казанского Государственного Университета. – 2008. – Т.150. - №2. – С.136-143.
  8. Акберова Н.И. Метилирование генов-супрессоров при раке простаты / Н.И. Акберова, И.И. Ибрагимова // Учебное пособие по курсу «Биоинформатика». – Казань, 2008.

Отзывы на автореферат просьба отправлять по:

e-mail: ilsiya20@rambler.ru

факсу: (843) 238-71-21

Pages:     | 1 |   ...   | 3 | 4 ||






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»