WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 | 2 || 4 |

7,6

Атипичные микобактерии

2.

M. Scrofulaceum

2

7,6

3.

M. Gordonae

2

7,6

4.

М. avium-intracellulare

6

23,16

5.

M. Phlei

8

30,88

6.

M. fortuitum

6

23,16

Всего:

24

92,4

ИТОГО:

26

100%

3.3. Разработка технологии получения опытной серии туберкулина из местных штаммов

Для изготовления опытной серии туберкулина использовали два штамма микобактерий туберкулеза бычьего вида (№1/625) Республиканской вет. лаборатории и №3 Таджикского НИВИ, выделенных от положительно реагировавших на туберкулин животных колхоза «Навруз» Шахринавского района.

Производственные штаммы микобактерий туберкулеза поддерживали путем регулярных пересевов на плотных яичных средах Левенштейна-Йенсена.

Опытная серия туберкулина была проверена на растворимость и однородность в растворе и безвредность на лабораторных животных, специфичность на морских свинках, активность на сенсибилизированных морских свинках и туберкулезном скоте, на содержание туберкулиновых единиц (ТЕ).

Опытная серия туберкулина в количестве 3000 доз была изготовлена по методике разработанной УНИИЭВ (А.М.Говоров, Ф.М.Осташко 1956).

Производственные штаммы микобактерий туберкулеза поддерживали путем регулярных пересевов на плотных яичных средах Левенштейна-Йенсена. При просмотре первичный рост обнаруживали на 42-45 дни, микобактерии росли в виде мелких, гладких, шаровидных, цвета слоновой кости колоний, пигмент не образовывали.

В окрашенных мазках микобактерии представляли собой тонкие, прямые или изогнутые различной длины, часто зернистые красные палочки, располагающиеся небольшими скоплениями.

На основании изучения основных свойств микобактерий туберкулеза (морфологических, культуральных, тинкториальных и ферментативных) пришли к заключению, что данные штаммы имеют свойства типичные для микобактерий туберкулеза бычьего вида и их можно использовать для изготовления опытной серии туберкулина.

Опытная серия туберкулина была проверена на растворимость и однородность в растворе и безвредность - на лабораторных животных, специфичность - на морских свинках, активность - на сенсибилизированных морских свинках и туберкулезном скоте - на содержание туберкулиновых единиц. Для определения внешнего вида все флаконы с туберкулином просмотрели визуально, а затем на плотность укупорки. Опытная серия туберкулина оказалась аморфной массой светло-коричневого цвета с сероватым оттенком без каких-либо примесей.

Для проверки растворимости во флаконы добавляли растворитель из расчета 1 мл на 1 мг препарата, содержимое взбалтывали, при этом сухое вещество полностью растворялась при комнатной температуре за 1-2 минуты.

Однородность туберкулина устанавливали путем просмотра в проходящем свете флаконов с растворенным препаратом. Во флаконах имелась прозрачная, слегка опалесцирующая жидкость без примесей.

Проверку безвредности проводили на 3-х здоровых морских свинках, для этого во флакон с туберкулином наливали растворитель из расчета 1 мл на 1 мг препарата, тщательно перемешивали и вводили подкожно морским свинкам в дозе 1 мл. При этом все морские свинки остались живыми в течение 10 дней, и на месте введения не обнаружено воспаления.

Определение отсутствия сенсибилизирующих свойств проводили на шести морских свинках. При этом трем свинкам вводили внутрикожно, трехкратно с интервалом в 5 дней по 500ТЕ препарата в объеме 0,1 мл растворителя.

Через 15 дней после последней инъекции этим и трем контрольным свинкам вводили внутрикожно по 500 ТЕ препарата в объеме 0,1 мл растворителя. Учет проведенный через 24 часа показал, что реакция на введение препарата у 3-х испытуемых свинок не отличалась от реакции у трех контрольных свинок.

Определение специфичности проводили на двух морских свинках - им вводили внутрикожно испытуемый препарат в дозе 0,01 мг в объеме 0,1 мл растворителя. Одновременно в другом боксе морским свинкам, внутрикожно вводили контрольную серию туберкулина в той же дозе. Через 24 часа на месте введения реакция отсутствовала, воспалительных процессов на месте инъекции не обнаружили.

Активность опытной серии туберкулина в туберкулиновых единицах (ТЕ) устанавливали сравнением её с контрольной серией туберкулина УНИИЭВ на сенсибилизированных морских свинках и на крупном рогатом скоте, положительно реагирующих на туберкулин в к-зе им. П. Бобокалонова Б. Гафуровского района.

Определение активности проводили на 6 здоровых морских свинках, сенсибилизированных вакциной БЦЖ (0,5 мг вакцины БЦЖ в 0,1 мл растворителя).

После приготовления разведений опытной серии туберкулина и контрольной серии туберкулина УНИИЭВ (по 2 разведения - 1:50 и 1:500), морским свинкам вводили внутрикожно в дозе 0,1 мл с каждой стороны тела (бедра). Через 24 часа после введения препаратов у всех свинок в местах инъекций обнаружили с каждой стороны тела (бедра) папулы диаметром от 1,5 мм до 7 мм.

Определение активности опытной серии туберкулина и контрольной серии туберкулина проводили на 6 головах животных, положительно реагировавших на туберкулин производственного кооператива им. А. Саматова Дж. Расуловского и колхоза им. П. Бобокалонова Б. Гафуровского районов.

Через 72 часа после введения туберкулинов в колхозе им. П. Бобокалонова Б. Гафуровского района из 6 голов на опытную серию реагировало 4 головы, с интенсивностью реакции от 3 до 10 мм, а на контрольную серию – 6 голов, с интенсивностью реакций от 3 до 14 мл. Из 6 голов животных производственного кооператива им. А. Саматова Дж. Расуловского района все животные реагировали на опытную серию с интенсивностью от 3 до 19 мм, а на контрольную серию - от 3 до 9 мм.

Таким образом, результаты проведенных исследований показывают, что разработанный туберкулин является безвредным, активным и специфическим препаратом для аллергической диагностики туберкулеза животных.

3.4. Изучение бактериостатической активности Вaс. Subtilis

в отношении штаммов микобактерий туберкулеза и атипичных микобактерий

Для борьбы с туберкулезом в некоторых странах наряду с общепринятыми мерами успешно используется комплекс химиопрофилактических и химиотерапевтических средств. Однако не все эти средства эффективны и малотоксичны. В связи с чем продолжает оставаться актуальным изыскание новых препаратов для борьбы с туберкулезом в животноводстве.

Опыты по изучению бактериостатической и бактерицидной активности Вaс. Subtilis проводили в лаборатории по изучению туберкулеза Таджикского НИВИ.

Штаммы микобактерий туберкулеза (№1/625 РВЛ и №3 Тадж НИВИ) и 4 штаммов атипичных микобактерии поддерживали путем регулярных пересевов на плотных яичных средах Левенштейна-Йенсена. Перед свертыванием среды Левенштейна-Йенсена в нее вводили взвесь Вaс. Subtilis, штаммы микобактерий и атипичных микобактерий по 500 млн.м.к. в 0,5 мл стерильном физиологическом растворе. Среду разливали в пробирки по 4 мл и свертывали в обычном режиме. В качестве контроля использовали чистую среду без добавления микроорганизмов и среду со штаммами микобактерий и атипичных микобактерий.

Для контроля стерильности опытные и контрольные культуры помещали в термостат при 37оС на 3 суток. Затем их парафинировали и держали в вертикальном положении в термостате до появления хорошо выраженного роста в контрольных пробирках (3-4 недели).

В результате исследования посевов опытных культур через 24-48-72-96-120 часов обнаружили рост микробов характерных для Вaс. Subtilis. Рост одного штамма микобактерий туберкулеза обнаружили только на 22-й день. Рост атипичных микобактерий не наблюдался. При изучении тинкториальных, морфологических, культурально-биохимических свойств культур опытных посевов только в одном случае идентифицировали микобактерии туберкулеза.

В контрольных пробирках 2-х штаммов рост микобактерий туберкулеза отмечен на 22-25-е дни после посева, а 4-х штаммов атипичных микобактерий на 6-21 день. Питательные среды без добавления микроорганизмов оставались стерильными в период наблюдения.

Результаты исследований показывают, что Вaс. Subtilis обладает бактериостатическим действием на штаммы атипичных микобактерий.

3.5. Определение влияния препарата Субтилбен на проявление неспецифических аллергических реакций на туберкулин

В настоящее время установлено, что большую роль в возникновении респираторных болезней животных играет микробиоценоз легких. Наряду с химиотерапевтическими средствами в последние годы для терапии и профилактики инфекционной патологии респираторного тракта большое внимание отводится пробиотикам на основе симбиотических микроорганизмов, среди которых наиболее перспективными являются Bifidobacter, Bacillus Subtilis и др.

Исходя из этого нами для восстановления микробиоценоза легких и подавления жизнедеятельности условно-патогенных микроорганизмов респираторного тракта использовали пробиотик Субтилбен на основе Bacillus Subtilis.

В экспериментальных условиях с целью определения влияния препарата Субтилбен на проявление неспецифических аллергических реакций на туберкулин в колхозе им. П. Бобокалонова Б. Гафуровского отобрали 12 голов и в колхозе «Дусти» Исфаринского района 4 головы положительно реагирующих на туберкулин животных.

Животным опытной группы (12 голов) препарат Субтилбен применяли по разработанной нами схеме 5 кратно до и после аллергических исследований.

Животным контрольной группы (4 голов) препарат тубазид применяли согласно наставления по применению.

Результаты опытов показали, что препарат Субтилбен не оказывает побочного действия на организм положительно реагирующих на туберкулин животных и позволяет угасанию неспецифических аллергических реакций после третьей дачи препарата. Спустя 180 дней выпадение реакций отмечались у 50% и полное выпадение происходило спустя 240-270 дней (табл.2). Тогда как у контрольных животных второй группы случаев выпадения реакций не отмечались.

Таблица 2

Влияние Субтилбена на проявление неспецифических аллергических реакций на туберкулин

Группа

Инв. № животного

Живой вес

Суточная доза

Результаты исследований на туберкулез через (дни) и кожной складки в мм

Пер-орально (г)

Интра-трахеально (мл)

60

(мм)

120

(мм)

180

(мм)

240

(мм)

270

(мм)

к/з им. П. Бобокалонова Гафуровского р-на

Опытная

326

480

96,0

10,0

28-7=21

14-7=7

10-7=3

7-7=0

7-7=0

487

350

70,0

10,0

19-8=11

9-8=1

10-6=4

8-6=2

8-8=0

805

418

83,0

10,0

23-8=15

15-8=7

8-6=2

6-6=0

6-6=0

1047

410

82,0

10,0

19-8=11

15-8=7

10-8=2

8-8=0

8-8=0

1084

485

97,0

10,0

17-7=10

14-7=7

15-9=6

11-9=2

11-10=1

706

Pages:     | 1 | 2 || 4 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»