WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     || 2 | 3 |

На правах рукописи

Зайковская Анна Владимировна

РЕЗЕРВУАРЫ ЛИССАВИРУСОВ

НА ТЕРРИТОРИЯХ, СТАЦИОНАРНО НЕБЛАГОПОЛУЧНЫХ

ПО БЕШЕНСТВУ

16.00.03

– ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология.

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание учёной степени

кандидата биологических наук

Новосибирск – 2009

Работа выполнена в Федеральном государственном учреждении науки Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Минздравсоцразвития России.

Научный руководитель кандидат биологических наук

Шестопалов Александр Михайлович

Официальные оппоненты: доктор биологических наук,

старший научный сотрудник

Глотова Татьяна Ивановна,

доктор медицинских наук,

профессор

Грибенча Сергей Васильевич

Ведущая организация: ФГУ Всероссийский научно-исследовательский институт защиты животных (ФГУ ВНИИЗЖ)

Защита состоится « 26 » мая 2009 г. в « 13-00 » часов на заседании диссертационного совета Д.006.045.01 при ГНУ Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока СО Россельхозакадемии по адресу: 630501, Новосибирская область, Новосибирский р-н, п. Краснообск, СО Россельхозакадемии, ИЭВСиДВ, а/я 8, тел./факс (8-383) 348-44-62.

С диссертацией можно ознакомиться в ЦНСХБ Россельхозакадемии.

Автореферат разослан « 21 » апреля 2009 г.

Учёный секретарь

диссертационного совета Стеблева Г.М.

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Лиссавирусные инфекции распространены практически повсеместно и поражают широкий круг хозяев, включая человека. Род Lyssavirus объединяет семь генотипов. Наиболее известным представителем лиссавирусов является вирус бешенства (Rabies virus).

Бешенство (Rabies) – инфекционная болезнь природно-очагового типа, опасная для человека и многих видов диких и домашних животных. Для него характерно циклическое течение и наличие резервуаров в дикой природе (М.А. Величко, 1994; К.Н. Груздев и др., 2001). По оценке Всемирной Организации Здравоохранения, бешенство входит в пятерку инфекционных болезней, общих для человека и животных, наносящих наибольший социальный и экономический ущербы. Ежегодно в мире после укусов животными, больными бешенством, погибает от 55000 до 70000 человек, половина из которых приходится на детей (A. Smith et al., 2005; Y.T. Arai et al., 2005).

Несмотря на достижения современной науки в вопросах контроля бешенства, эту проблему нельзя считать решенной. Активизируются природные очаги, увеличивается заболеваемость диких плотоядных, в эпизоотический процесс интенсивно вовлекаются домашние животные, создавая угрозу людям (В.А. Ведерников и др., 2005; Б.Л. Черкасский и др., 2005). Необходимо более полное понимание механизма поддержания и передачи различных вариантов вируса бешенства внутри популяций животных, что будет способствовать выявлению и прогнозированию возникновения новых резервуаров этой инфекции.

В последнее время большое внимание исследователей во всем мире обращено на изучение проблемы лиссавирусных инфекций у летучих мышей. В Западной Сибири обитает около 10 видов летучих мышей. Хотя лиссавирусы у рукокрылых в Западной Сибири обнаруживали (А.Д. Ботвинкин, 1988; И.В. Кузьмин, 2002), их роль в эпизоотологическом процессе при бешенстве до настоящего времени изучена недостаточно.

Территория юга Западной Сибири является стационарно неблагополучной по рабической инфекции, она характеризуются регулярным проявлением эпизоотий бешенства в популяциях диких и домашних животных (Л.Я. Грибанова и др., 1977: А.М. Шестопалов и др., 1998, 1999; В.И. Аксенов и  др. 2000, 2002). Оценивая современное состояние проблемы бешенства, следует комплексно рассмотреть закономерности эпизоотического процесса и его особенностей в конкретных условиях.

Цель исследований изучить эпизоотологическое значение различных резервуаров лиссавирусов на территории, стационарно неблагополучной по бешенству.

Задачи исследований:

  • Изучить особенности проявления эпизоотического процесса бешенства на одной из стационарно неблагополучных территорий с учетом разнообразия возможных резервуаров возбудителя и проводимых антирабических мероприятий.
  • Исследовать популяции летучих мышей, обитающих на стационарно неблагополучных по бешенству территориях, на наличие лиссавирусов.
  • Определить молекулярно-генетические характеристики лиссавирусов, циркулирующих у различных видов животных на стационарно неблагополучных по бешенству территориях, с позиции их эпизоотологической значимости.

Научная новизна. Получены современные данные об эпизоотической ситуации по бешенству на территории юга Западной Сибири. Подтверждена зависимость эпизоотологической роли основных резервуаров вируса бешенства от направленности и интенсивности антирабических мероприятий.

На стационарно неблагополучных по бешенству территориях юга Западной Сибири у насекомоядных летучих мышей с помощью ОТ–ПЦР выявлено наличие фрагмента гена нуклеопротеина лиссавирусов, которые были отнесены к генотипу 1. При помощи молекулярно-генетических методов доказано близкое родство всех лиссавирусов, выявленных у животных различных видов, внутри генотипа 1, на указанной территории. Выявлена зависимость кластеризации лиссавирусов от времени выделения изолята, а также тенденция к родству вирусов в зависимости от вида хозяина изолята.

Теоретическая и практическая значимость. Получены современные данные об эпизоотологическом значении различных резервуаров лиссавирусов на стационарно неблагополучных по бешенству территориях, которые могут быть использованы для дальнейшего совершенствования антирабических мероприятий. Результаты исследований вносят вклад в развитие молекулярной эпизоотологии.

Создана рабочая коллекция изолятов вирусов бешенства, циркулирующих на территории Новосибирской области, подготовлены паспорта для депонирования в коллекции культур микроорганизмов ФГУН ГНЦ ВБ «Вектор». По результатам работы в международной базе данных GenBank зарегистрированы 12 нуклеотидных последовательностей, которые в дальнейшем могут служить базой для конструирования праймеров для диагностики бешенства.

Апробация полученных результатов. Материалы исследований были представлены на международной научной конференции «Современные проблемы эпизоотологии», (Новосибирск, 2004), Сибирской международной научно-практической конференции «Актуальные вопросы ветеринарной медицины» (Новосибирск, 2004), международной научно-практической конференции «Современные проблемы охотничьего собаководства», (Киров, 2004), Всероссийской конференции «Сибирская зоологическая конференция» (Новосибирск, 2004), межрегиональном совещании по вопросам профилактики особо опасных инфекций и дезинфектологии (11-15 октября 2004 года, г. Новосибирск), межрегиональной научно-практической конференции с международным участием «Актуальные проблемы здоровья населения Сибири: гигиенические и эпидемиологические аспекты» (Омск, 2004), Сибирской международной научно-практической конференции «Актуальные вопросы ветеринарной медицины» (Новосибирск, 2005), 3-ей Российской научной конференции с международным участием «Проблемы инфекционной патологии в регионах Сибири, Дальнего Востока и Крайнего Севера» (Новосибирск, 2006).

Публикация результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 17 работ, 4 из них в ведущих научных журналах рекомендованных ВАК Минобразования и науки Российской Федерации.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 137 страницах машинописного текста и состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, материалы и методы, результаты исследований, обсуждение, выводы, практические предложения, литература, приложения. Работа иллюстрирована 15 таблицами и 12 рисунками. Список литературы содержит 209 источников, в том числе 122 работы иностранных авторов.

Внедрение результатов исследований. Результаты исследований использованы в методических рекомендациях «Система противоэпизоотических и профилактических мероприятий при бешенстве в Новосибирской области», утвержденных подсекцией «Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии (протокол № 4 от 14 октября 2008 г.), а также в учебном пособии для ВУЗов «Современные проблемы бешенства животных (М.; КолосС, 2007). Создан набор олигонуклеотидных праймеров для идентификации РНК вируса бешенства в биологических образцах (патент на изобретение № 2340673 от 10 декабря 2008г.).

Основные положения, выносимые на защиту:

  • Проявление эпизоотического процесса бешенства в современных условиях на территории юга Западной Сибири, стационарно неблагополучной по рабической инфекции, с учетом разнообразия возможных резервуаров возбудителя и проводимых антирабических мероприятий.
  • Результаты молекулярно-генетического анализа лиссавирусов, циркулирующих у различных видов животных на территории юга Западной Сибири, с позиции их эпизоотологической значимости.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа была выполнена в 2002-2008 годах в отделе зоонозных инфекций и гриппа Федерального государственного учреждения науки Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Минздравсоцразвития России. Ретроспективный анализ эпизоотической ситуации бешенства на стационарно неблагополучных территориях с учетом разнообразия возможных резервуаров возбудителя и проводимых антирабических мероприятий был проведен на основе статистических данных медицинских и ветеринарных учреждений.

Для лабораторной диагностики бешенства использовали образцы головного мозга диких, домашних и сельскохозяйственных животных из различных регионов Сибири.

Для сбора материала от летучих мышей было проведено 12 экспедиционных выездов на территории юга Западной Сибири. В зимний период летучих мышей, находившихся в состоянии спячки в укрытиях, собирали вручную. Все манипуляции проводили максимально бережно, чтобы не травмировать животных и не навредить популяции.

Для поимки рукокрылых в летний период пользовались стандартными методиками: отловы над руслами речек и на лесных полянах с помощью паутинных сетей (5х12 м), и активный отлов с использованием мобильной ловушки Борисенко (А.В. Борисенко, 1999). Для обнаружения рукокрылых и первичной видовой идентификации использовался ультразвуковой детектор Pettersson Elektronik D-100. Всего было собрано 225 образцов головного мозга от летучих мышей 7 видов: водяная ночница (Myotis daubentonii), прудовая ночница (Myotis dasycneme), ночница Брандта (Myotis brandtii), бурый ушан (Plecotus auritus) сибирский трубконос (Murina leucogaster), двуцветный кожан (Vespertilio murinus), рыжая вечерница (Nyctalus noctula)).

Исследования проводили согласно ГОСТ 26075-84. Выборочные пробы материала тестировали в ОТ-ПЦР с использованием праймеров на районы генов нуклеопротеина и гликопротеина вируса бешенства. Для 31 образца у полученных ПЦР–продуктов были определены нуклеотидные последовательности и выведены аминокислотные последовательности фрагмента гена нуклеопротеина. Определение нуклеотидной последовательности выделенного ПЦР фрагмента проводили на «Beckman CEQ2000XL DNA Analysis System» («Beckman Coulter, Inc.») согласно инструкции к «Beckman sequencing Kit». Нуклеотидные и выведенные аминокислотные последовательности были анализированы с использованием программы MEGA (PSU, США) и DNASTAR (DNAStar Inc., США).

Для статистической обработки данных были использованы общепринятые методы описательной статистики с использованием пакета программ для статобработки Microsoft Excel (Microsoft Office Professional Edition, 2007) и STATISTICA 6,0.

Для создания коллекции изолятов вируса бешенства с территории Новосибирской области вирусы культивировали на беспородных белых мышах массой 6-8 г. Получено 12 штаммов вируса бешенства, которые были лиофильно высушены. Титр вируса определяли на лабораторных животных. Вычисление значений титра вируса (LD50) проводили по методу Рида-Менча. Подготовлены паспорта для депонирования в коллекции культур микроорганизмов ФГУН ГНЦ ВБ «Вектор».

2.2 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Pages:     || 2 | 3 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»