WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 || 3 |

Анализ гистологических препаратов фолликулов в яичниках у 5-месячных неполовозрелых и половозрелых свинок показал, что клетки гранулезы, подверженные апоптозу, отличаются от жизнеспособных клеток. Это связано с тем, что у апоптотических клеток уплотняется цитоплазма, вследствие чего она окрашивается более интенсивно по сравнению с окружающими клетками, а также происходит фрагментация и конденсация хроматина в ядре. При этом существенных различий в течении апоптоза в клетках гранулезы у половозрелых и неполовозрелых свиней выявлено не было. Как у первых, так и у вторых процесс апоптоза осуществлялся по одному «сценарию» и сопровождался характерными признаками: уменьшение клетки, подверженной апоптозу, в размере, отграничение ее от окружающей ткани светлым ободком и образование апоптозных телец. Апоптозные тельца в гистологических препаратах выглядели преимущественно в виде округлых образований, четко отграниченных от окружающих тканей участками просветления.

Применение большого увеличения позволило выявить в апоптозных клетках изменения в ядре и цитоплазме. Было установлено, что ядерный хроматин в этих клетках конденсируется в виде отдельных крупных глыбок, которые локализуются преимущественно около ядерной мембраны. Конденсированный хроматин в одних случаях занимал всю поверхность среза такого фрагмента, в других располагался в виде «полулуния».

Несмотря на однотипность изменений в гранулезе и в общем «механизме» апоптоза у неполовозрелых и половозрелых свиней, нам удалось выявить, что интенсивность процесса апоптоза у первых была более высокой, чем у вторых. О чем свидетельствуют результаты определения индекса апоптоза: у неполовозрелых свинок (1,88±0,3 – 2,10±0,44) он был выше по сравнению с половозрелыми (1,65±0,5 - 1,78±0,88).

Рис.1 - Индекс апоптоза клеток гранулезы и содержание ФСГ

и ЛГ в крови свинок 5-месячного возраста

Рис.2 - Индекс апоптоза клеток гранулезы и содержание эстрадиола-17

и прогестерона в крови свинок 5-месячного возраста

В свою очередь было установлено, что интенсивность апоптоза в клетках гранулезы фолликулов свиней тесным образом связана с функциональной активностью аденогипофиза и яичников. Как следует из рисунков 1, 2 у свинок с относительно низким содержанием в крови гонадотропных гормонов и эстрадиола-17 индекс апоптоза был выше, чем у животных с более высоким содержанием этих гормонов.

3.2. Апоптоз клеток гранулезы и функциональная активность

гипофизарно-овариальной системы у свиней в возрастном аспекте

Исследование процесса апоптоза клеток гранулезы фолликулов в яичниках свиней в 5, 7, 9, 12 и 24 месяцев показало, что он был практически однотипным и не имел существенных различий в возрастном аспекте. В большинстве случаев в гистопрепаратах встречались одиночные клетки с признаками апоптоза и редко обнаруживались группы апоптозных клеток. При этом в погибающих клетках гранулезы наблюдалась конденсация хроматина в виде крупных глыбок.

На ранних стадиях апоптотической смерти клеток гранулезы наблюдались округления контуров и уменьшение размеров клеток, потеря ими межклеточных контактов. Гибнущие клетки обнаруживались во всех фолликулах независимо от того, подвержены они атрезии или нет.

Расчет индекса апоптоза показал, что с увеличением возраста животных интенсивность апоптоза в клетках гранулезы снижается. Однако и в этом случае наблюдалась зависимость течения апоптотического процесса от функционального состояния аденогипофиза и яичников. У свинок с более высоким содержанием в крови гонадотропных гормонов и эстрадиола-17 индекс апоптоза был меньше, чем у животных с более низким содержанием этих гормонов (табл.1).

Таблица 1 - Индекс апоптоза и содержание гонадотропных и половых

гормонов в крови свиней в возрастном аспекте

Показатели

Возраст, мес.

5

7

8

9

12

24

Апоптозный индекс

1,85±0,3

1,75±0,8*

1,65±0,4*

1,65±0,5*

1,60±0,7*

1,66±0,6*

ФСГ

мкг/100мл

114,5±8,5

124,0±9,9

131,5±10,2

130,8±9,0

141,0±10,7

150,5±11,*5

ЛГ

мкг/100мл

2,5±0,2

3,3±0,4

3,5±0,3

3,6±0,2*

3,8±0,1*

3,7±0,3*

Эстрадиол-17, пмоль/л

66,8±5,7

70,5±6,6

71,2±8,3

75,4±6,0

81,3±7,7*

78,8±7,0*

Прогестерон, нмоль/л

20,5±3,5

23,7±2,8

34,0±3,7*

27,2±4,2

33,5±3,6*

39,6±4,5*

Примечание: * - при р<0,05, по сравнению с соответствующими показателями, полученными у животных 5-месячного возраста

3.3. Особенности атрезии фолликулов в яичниках свиней

в возрастном аспекте

Экспериментальная часть работы по изучению процесса атрезии фолликулов у свиней состояла из двух серий опытов. В первой серии изучали процесс атрезии фолликулов в яичниках свинок с 3- до 10- месячного возраста. Вторая серия опытов была посвящена исследованию атрезии фолликулов в яичниках свинок после введения гонадотропного препарата ПГ-600 (Голландия).

Учитывая то, что процесс атрезии фолликулов в яичниках свиней, независимо от возраста животных, имеет однотипный характер, мы обобщили результаты гистологических исследований и провели анализ. Это позволило получить, прежде всего, общее представление о «механизме» атрезии фолликулов в яичниках у свиней крупной белой породы.

Результаты исследований показали, что процесс атрезии фолликулов регистрировался как у неполовозрелых свинок, так и у половозрелых животных. Было установлено, что атрезии подвергались фолликулы на всех стадиях развития. Процесс атрезии примордиальных фолликулов протекал с плохо выраженными изменениями, поэтому о завершении атрезии этих фолликулов можно судить только по разрушению структур овоцита.

Атрезия вторичных фолликулов протекала с более характерными признаками. Прежде всего, здесь можно было заметить изменения со стороны фолликулярного эпителия, подвергавшегося дегенерации. Его клетки становились более округлыми, ядра принимали неправильную форму, овоцит находился в свободном состоянии внутри фолликула.

Атрезия третичных фолликулов, в отличие от вторичных, протекала с более выраженными признаками и сопровождалась дегенерацией не только фолликулярного эпителия, но и клеток внутренней теки. Отмечено, что и в этом случае в овоците заметных изменений не обнаруживалось.

Наши наблюдения показали, что при световой микроскопии первые признаки атрезии в фолликулах свиней регистрируются в фолликулярном эпителии и текальных клетках, а затем проявляются в овоците. Однако не исключено, что «запуск» атретического процесса в фолликуле начинается именно с овоцита, а затем он передаётся на окружающие структуры - фолликулярный эпителий и теку. В данном случае световая микроскопия не позволяет выявить трудноуловимые изменения в структуре овоцита.

Динамика количества антральных фолликулов в яичниках свиней представлена на рисунке 3, из которого видно, что наиболее интенсивно атрезия фолликулов происходит в период полового созревания и становления половой функции.

Учитывая роль аденогипофиза в регуляции фолликулогенеза, нами был проведён эксперимент по изучению влияния гонадотропинов на ход атретического процесса в яичниках свиней. С этой целью ремонтным свинкам 8-месячного возраста вводили гонадотропный препарат ПГ-600 в дозе 600 ИЕ/гол (1 опытная группа) и 1000 ИЕ/гол (2 опытная группа), контролем являлись животные, которым вводили физиологический раствор. Через 72 часа у опытных и контрольных свинок проводили лапаротомию и извлекали яичники.

Рис.3 - Динамика образования атретических фолликулов в

яичниках ремонтных свинок в возрастном аспекте

Результаты гистологических исследований показали, что введение гонадотропного препарата ПГ-600 оказывает определённое влияние на процесс атрезии в яичниках свинок. При этом было установлено, что введение более высокой дозы (1000 ИЕ/гол) препарата сопровождается активизацией атретического процесса и кистозным перерождением фолликулов. После введения препарата в рекомендуемых дозах (600 ИЕ/гол) в яичниках свинок находилось много примордиальных, а также полноценных вторичных и третичных фолликулов и значительно меньше фолликулов, подвергавшихся атрезии.

3.4. Роль апоптоза в процессе атрезии фолликулов в яичниках свиней

При изучении взаимосвязи апоптотических и атретических процессов, нами было установлено, что в фолликулах, не имеющих признаков атрезии, единичные клетки обнаруживались в основном в тех частях зернистого слоя, которые удалены от яйценосного бугорка. В фолликулах, подвергшихся атрезии (первая стадия), апоптотические клетки обнаруживались в основной своей массе по периферии. Наоборот, в фолликулах во время второй стадии атрезии более интенсивно процесс апоптоза протекал в яйценосном бугорке, постепенно затрагивая другие клетки зернистого слоя. При этом поздние стадии апоптотического процесса преобладали по периферии, а ранние - в яйценосном бугорке.

Третья стадия атретического процесса характеризовалась тем, что в яйценосном бугорке большинство клеток гранулезы вступали в позднюю стадию апоптоза и выявлялись лишь единичные клетки, не имеющие признаков гибели. Тогда как по периферии апоптотические процессы «затухали» и количество клеток без признаков апоптоза было больше, чем в яйценосном бугорке.

Четвертая стадия атретического процесса характеризовалась резким включением в процесс гибели всех частей зернистого слоя. При микроскопии основную массу составляли апоптотические тельца.

Рис.4 - Динамика индекса апоптоза клеток гранулезы фолликулов

в яичниках свиней 5-месячного возраста

Для получения более полной картины, происходящей в гранулезе, был произведен подсчет индекса апоптоза в зрелых фолликулах, не имеющих видимых признаков атрезии, а также в фолликулах, находящихся на первой, второй и третьей стадии атретического процесса. В этом опыте был использован иммуногистохимический метод исследования с использованием антител к гену р53. Результаты исследований представлены на рисунке 4, из которого следует, что в зрелых фолликулах, не имеющих видимых признаков атрезии, индекс апоптоза был минимальным, а в фолликулах подвергшихся атрезии он возрастал в зависимости от стадии атретического процесса.

Таким образом, увеличение индекса апоптоза указывает на наличие атретического процесса и данный показатель можно использовать в качестве «маркера» начала атретического процесса в фолликулах.

3.5. Влияние экзогенных гонадотропинов на течение апоптоза в

клетках гранулезы яичников свиней

Результаты иммуногистохимического анализа апоптотической активности в клетках гранулезы зрелых фолликулов в яичниках свиней после введения препарата «Фоллимаг» показали, что у животных контрольной группы морфологическая картина исследования характеризовалась слабо выраженным bcl-2 - окрашиванием гранулезы и лишь небольшие группы клеток имели яркую коричневую окраску. Иммуногистохимическое окрашивание на ген р53 выявило наличие позитивно реагирующих клеток зернистого слоя со степенью градации два балла (11-13%). В основном такие клетки обнаруживались по периферии. Активность коричневой окраски для ядерного антигена пролиферирующих клеток Ki-67 характеризовалась равномерностью со слабой степенью выраженности, клетки имели не однородную окраску и в основной массе окрашивались в светло-коричневый цвет.

На первые сутки после введения препарата было отмечено усиление сродства клеток гранулезы к красителю. В этот период наблюдений возрастало число клеток гранулезы, имевших bcl-2-позитивное окрашивание. При этом количество клеток, имеющих положительную окраску к гену р53, снижалось, составляя 9-10%. Реакция с антителами к Ki-67 не имела существенных отличий от контрольной группы.

Через трое суток с момента введения препарата было выявлено усиление иммуногистохимического окрашивания на антиапоптотический белок bcl-2, которое наиболее выражено проявлялось в области яйценосного бугорка. Реакция на ген р53 имела слабую выраженность признака. При морфологическом исследовании препаратов на Ki-67-позитивных клеток отмечалось увеличение сродства к красителю, наблюдалась более интенсивная коричневая окраска и увеличение числа окрашенных клеток.

Pages:     | 1 || 3 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»