WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     || 2 | 3 |

На правах рукописи

ПЕРОВА

Татьяна Сергеевна

ПРИМЕНЕНИЕ СОЕДИНЕНИЙ, ВЛИЯЮЩИХ НА УРОВЕНЬ ОКСИДА АЗОТА В ТКАНЯХ ГЛАЗА, В КОМПЛЕКСНОЙ ТЕРАПИИ УВЕИТА В ЭКСПЕРИМЕНТЕ.

14.00.08 - глазные болезни

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

Москва - 2007

Диссертационная работа выполнена в Федеральном Государственном Учреждении «Московский научно-исследовательский институт глазных болезней им. Гельмгольца Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи». (директор - доктор медицинских наук, профессор, заслуженный деятель науки РФ В.В. Нероев)

Научный руководитель:

Доктор медицинских наук, профессор

В.В. Нероев

Официальные оппоненты:

Доктор медицинских наук, профессор

Е.С. Либман

Доктор медицинских наук, профессор

Е.П. Тарутта

Ведущая организация: ГУ НИИ глазных болезней РАМН

Защита диссертации состоится « 18 » сентября 2007 года в 14 часов

на заседании диссертационного совета Д.208.042.01.

Адрес института: 105062 г. Москва, ул. Садовая-Черногрязская, 14/19.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Московского НИИ глазных болезней им. Гельмгольца.

Автореферат разослан « 22» июля 2007 года

Ученый секретарь диссертационного Совета

Доктор медицинских наук, профессор М.Б. Кодзов

Общая характеристика работы.

Актуальность проблемы. В настоящее время проблема лечения увеитов является одной из важнейших в офтальмологии во всем мире. Пациенты с увеитами и их осложнениями составляют от 5 до 18 % больных глазных стационаров. При тяжелых формах заболевания слепота на оба глаза развивается в 10-15 %, а инвалидность по зрению составляет около 30 %. (Кацнельсон Л.А., Танковский В.Э.,1998; Денисова Е.В.,1999; Катаргина Л.А., Архипова А.В.,2004; Либман Е.С., 2004). Полиэтиологичность увеитов и сложность их патогенеза существенно затрудняют выбор препаратов для лечения.

В настоящее время сформировалось несколько подходов к лечению увеитов: консервативная терапия c использованием этиотропных препаратов, кортикостероидов, нестероидных противовоспалительных препаратов, иммунодепрессантов и иммуномодуляторов, хирургическое лечение, которое наиболее целесообразно проводить в комплексе с консервативной терапией, и экстракорпоральная терапия (гемосорбция, плазмаферез, квантовая аутогемотерапия), относящаяся к дополнительным методам лечения. (Dick A.D., 1995; Катаргина Л.А., Хватова А.В.,2000; Becker M.D., Adamus G.,2000; Слепова О.С.,2001).

К сожалению, ряд препаратов, активно используемых в практике, имеет много противопоказаний и может привести к тяжёлым осложнениям. Поэтому поиск новых неспецифических противовоспалительных средств для лечения увеитов относится к числу актуальных проблем офтальмологии во всем мире.

В этом плане большой интерес представляет изучение веществ, влияющих на метаболизм оксида азота. Известно, что при увеитах эндо-и экзоантигены (липополисахариды, S-антиген сетчатки и др.), а также цитокины (IL 10, IL 6 и др.) вызывают активацию макрофагов и нейтрофилов, что приводит к активации индуцибельной NO-синтазы и синтезу оксида азота, являющегося одним из основных эффекторов системы клеточного иммунитета. Вырабатываясь в больших количествах при воспалении, NO может оказывать цитостатическое – цитотоксическое действие, как на чужеродные клетки, так и на собственные клетки организма (Cunha F.Q., Assreuy J.,1993; Chan C.C., Li Q.,1998; Engelbert M., Mylonakis E.,2004).

В то же время, недостаточный синтез оксида азота также оказывает неблагоприятное влияние на течение воспаления (Crow J. P., Spruell C.,1994; Cross A.H., Misco T.P.,1995; Grus F.H., Augustin A.J.,2001).

В связи с этим, есть основания полагать, что направленная регуляция метаболизма оксида азота с помощью доноров NO и ингибиторов NO- синтаз может явиться новым способом в лечении воспалительных заболеваний глаз. Несмотря на большое количество экспериментальных работ по изучению влияния оксида азота на течение воспалительного процесса, в настоящее время не существует единого мнения о патогенетической роли оксида азота в развитии увеита.

Цель работы - изучить влияние экзогенных доноров оксида азота и ингибиторов NO- синтаз на течение экспериментального иммуногенного увеита для выбора нового неспецифического противовоспалительного средства, эффективного при увеитах.

Задачи исследования:

  1. Выбрать рабочую модель иммуногенного увеита, отличающуюся простотой моделирования, выраженной и длительной воспалительной реакцией и высокой воспроизводимостью.
  2. Изучить изменения биохимических показателей слезной жидкости и сыворотки крови у иммунизированных кроликов и у кроликов с иммуногенным увеитом.
  3. Изучить влияние различных групп доноров оксида азота на течение воспаления при использовании различных доз и сроков применения, оценить их влияние на показатели тонографии.
  4. Оценить влияние донора оксида азота на протеиназно-ингибиторный баланс, общую антиокислительную активность и активность ферментов антиоксидантной системы (супероксиддисмутазы и каталазы) в слезной жидкости и сыворотке крови при иммуногенном увеите.
  5. Изучить влияние донора оксида азота на морфологические изменения тканей глаза при иммуногенном увеите.
  6. Изучить влияние различных групп ингибиторов NO-синтазы на течение воспаления при использовании различных доз и сроков применения, оценить их влияние на показатели тонографии.
  7. Оценить влияние ингибитора NO-синтазы на протеиназно-ингибиторный баланс, общую антиокислительную активность и активность ферментов антиоксидантной системы в слезной жидкости и сыворотке крови при иммуногенном увеите.
  8. Изучить влияние ингибитора NO-синтазы на морфологические изменения тканей глаза при иммуногенном увеите.
  9. Выбрать эффективное противовоспалительное вещество и подобрать его оптимальную концентрацию.
  10. Сравнить влияние выбранного эффективного противовоспалительного вещества на течение иммуногенного увеита при изолированном применении и при совместном введении с дексаметазоном.

Научная новизна работы.

- Впервые показано, что при субконъюнктивальных инъекциях доноров оксида азота и ингибиторов NO-синтазы при иммуногеном увеите у кроликов происходят как локальные (в слезе), так и общие (в крови) изменения в протеиназно-ингибиторном балансе и антиоксидантной системе.

- На основании клинических, биохимических и морфологических данных доказано, что применение соединений, увеличивающих уровень оксида азота в тканях глаза, а именно, доноров оксида азота и NO-содержащего газового потока, при иммуногенном увеите приводит к активации воспалительного процесса и увеличивает длительность его течения.

- Впервые изучено действие ингибиторов NO-синтазы (аминогуанидина, S-метилтиомочевина и L-NNA) на коэффициент легкости оттока и офтальмотонус и показано, что они не оказывают влияния на эти показатели.

- На основании клинических, биохимических и морфологических исследований впервые установлено, что применение ингибитора NO-синтазы S-метилтиомочевины при иммуногенном увеите оказывает выраженное противовоспалительное действие; подобран оптимальный режим его введения (дозы и сроки).

- Впервые показана высокая эффективность сочетанного применения S-метилтиомочевины и дексаметазона при иммуногенном увеите.

Практическая значимость работы.

Результаты проведенных исследований свидетельствуют о перспективности применения селективного ингибитора индуцибельной NO-синтазы S-метилтиомочевины в комплексной терапии увеита.

Основные положения, выносимые на защиту:

  1. При иммуногенном увеите происходят локальные и системные изменения протеиназно-ингибиторного баланса и эндогенного антиоксидантного потенциала.
  2. Субконъюнктивальное введение как доноров оксида азота, так и ингибиторов NO-синтазы приводит к изменениям протеиназно-ингибиторного баланса и активности компонентов антиоксидантной системы в слезе и сыворотки крови.
  3. Морфологические исследования, характер локальных и системных изменений протеиназно-ингибиторного баланса, общей антиокислительной активности, компонентов антиоксидантной системы кроликов свидетельствуют о более тяжелом течении увеита при применении доноров NO.
  4. Введение ингибиторов NO-синтазы в виде субконъюнктивальных инъекций не влияет на коэффициент легкости оттока водянистой влаги и офтальмотонус.
  5. При субконъюнктивальном введении ингибиторов NO-синтазы - аминогуанидина и L- нитроаргинина не выявлено противовоспалительного эффекта вводимых веществ.
  6. Субконъюнктивальное введение ингибитора индуцибельной NO-синтазы 0,15 % раствора S-метилтиомочевины в начале воспаления и в момент максимальной выраженности воспалительной реакции существенно уменьшает интенсивность и длительность течения воспалительного процесса.
  7. Морфологические исследования, характер локальных и системных изменений протеиназно-ингибиторного баланса, общей антиокислительной активности, компонентов антиоксидантной системы свидетельствуют о более легком течении увеита у кроликов при применении 0,15 % раствора S метилтиомочевины.
  8. Сравнительное исследование влияния 0,15 % раствора S-метилтиомочевины, дексаметазона и их совместного применения показало, что при сочетанном их применении наблюдается наиболее выраженный противовоспалительный эффект.
  9. S-метилтиомочевину можно рассматривать как возможное перспективное потенциальное лекарственное средство в комплексном лечении увеитов.

Апробация работы.

Основные положения работы доложены и обсуждены: на научно-практической конференции молодых ученых «Актуальные проблемы офтальмологии» (Москва, 2006), на межотделенческой конференции Московского НИИ глазных болезней им. Гельмгольца 08.06.2007.

Публикации.

По теме диссертации опубликованы 9 работ (3 статьи в центральной печати).

Структура и объем диссертации.

Диссертация изложена на 201 странице машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания материала и методов исследования, 4 глав собственных исследований, заключения, выводов, списка использованной литературы и списка работ, опубликованных по теме диссертации.

Работа содержит 11 таблиц, 25 рисунков. Список литературы включает 328 источников, из них 118 отечественных и 210 иностранных авторов. Работа выполнена в Московском научно-исследовательском институте глазных болезней им. Гельмгольца в отделе патологии сетчатки и зрительного нерва (руководитель д.м.н., проф. В.В. Нероев). Проводились исследования на базе отделения патофизиологии и биохимии (руководитель д.б.н.,проф. Н.Б. Чеснокова), патогистологии (руководитель д.м.н.,проф. И.П. Хорошилова-Маслова) и лаборатории патоморфологии Московской медицинской академии им. И.М. Сеченова (руководитель д.м.н., проф. А.Б. Шехтер).

Содержание работы.

Материалы и методы исследования.

Работа представляет собой экспериментальное исследование, в котором наряду с офтальмологическими методами были использованы биохимические и морфологические методы исследования.

Для моделирования иммуногенного увеита использовали нормальную жидкую лошадиную сыворотку крови (НЛС), производитель «Биомед» (Россия).

Работа выполнена на 235 кроликах (470 глаз) породы «шиншилла». Проведено биохимическое исследование 165 образцов слезной жидкости, 85 образцов крови, взятой до иммунизации животных, после иммунизации, на 1, 3, 7, 14 и 21 сутки после введения разрешающей дозы НЛС интравитреально или подкожно.

Морфологические исследования проведены на 36 энуклеированных глазах кроликов на 2, 5, 14 сутки увеита.

Клиническую оценку течения воспалительного процесса глаз кроликов проводили с помощью биомикроскопии и офтальмоскопии. Оценку клинических проявлений воспаления проводили на 1, 2, 3, 5, 7, 10 сутки (после введения разрешающей дозы) в условных баллах по следующим признакам: отек век, инъекция конъюнктивы, отек роговицы, преципитаты на эндотелии, экссудат в передней камере (фибрин и гипопион), гиперемия и отек радужки, образование задних синехий, опалесценция хрусталика и преципитаты на передней капсуле хрусталика, экссудация в стекловидном теле. В те же дни проводили фоторегистрацию глаз кроликов.

Работа состоит из 4-х частей. В первой части работы проведен выбор оптимальной модели иммуногенного увеита у кроликов. Требования к модели: 1) технически удобна для выполнения, т.е. наличие оптимального времени для предварительной сенсибилизации, 2) длительное течение и выраженная активность воспалительной реакции, 3) высокая воспроизводимость однотипной клинической картины.

Основываясь на литературных данных, нами были выбраны 6 способов моделирования иммуногенного увеита. Животных разделили на 6 групп по 4 кролика в каждой группе. Группы составлялись в зависимости от дозы и способа введения нормальной лошадиной сыворотки, а также сроков введения разрешающей дозы сыворотки в стекловидное тело (табл.1).

Таблица № 1. Моделирование экспериментального иммуногенного увеита.

№ группы

Число глаз

Антиген

Доза введения

НЛС (мл)

Путь введения

Введение разрешающей дозы (сутки)

1

8

НЛС

5

в/в

14

Pages:     || 2 | 3 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»