WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 || 3 | 4 |

BioGenex

Нестин

polyclonal

1:6000

Abcam

Характер иммуногистохимических реакций оценивали визуально в баллах с учетом интенсивности окраски и процента окрашенных клеток (таблица 2). Оценку числа Ki-67–позитивных клеток проводили при помощи телевизионного анализатора изображений «МЕКОС-Ц1».

Для проведения электронно-микроскопического исследования из операционного материала вырезали кусочки объемом 1 мм3, которые фиксировали в 2,5% растворе глутарового альдегида и 1% растворе четырех- окиси осмия. Затем материал обезвоживали в спиртах возрастающей кон-

центрации (50%, 70%, 96% и 100%), после чего пропитывали в смеси окись пропилена – эпонаралдитовая смола. После пропитки материал помещали в капсулы и заливали эпонаралдитовой смолой, затем помещали в термостат при температуре 60 С на 2 суток, готовили срезы толщиной 1,5 – 2 мкм и окрашивали толуидиновым синим. После предварительного светомикроскопического изучения полутонких срезов вырезали пирамидки с таким расчетом, чтобы поверхность среза приходилась на интересующий нас участок. Ультратонкие срезы толщиной 100-120 нм получали на ультратоме фирмы LKB (Швеция), ультраструктурное изучение препаратов проводили при помощи электронного микроскопа Philips CM10 (Нидерланды).

Таблица 2. Критерии оценки иммуногистохимических реакций

Тип реакции

Интенсивность

Обозначение

Отрицательная реакция

-

Отсутствие экспрессии

Слабая очаговая реакция

+

Низкая экспрессия

Средней интенсивности или интенсивная реакция с мембранной или апикальной внутриклеточной локализацией

++

Умеренная экспрессия

Интенсивная реакция с внутриклеточной локализацией и распространением по цитоплазме

+++

Высокая экспрессия

Содержание сосудистого эндотелиального фактора роста и его рецептора 2 типа (VEGF и VEGFR2) в гомогенатах ткани ангиодисплазий определяли с помощью стандартных наборов для иммуноферментного анализа – «Quantikine® Human VEGF Immunoassay» и «Quantikine® Human VEGFR2 Immunoassay» (R&D systems, США) в соответствии с инструкциями производителя (исследование проведено совместно с член-корр. РАМН Н.Е.Кушлинским в отделении клинической биохимии НИИ клинической онкологии Российского онкологического научного центра им. Н.Н. Блохина РАМН). Концентрацию этих факторов в тканях выражали в пг/мг белка, определенного по методу Лоури.

Статистическую оценку количественных данных проводили при помощи ЭВМ с использованием программного пакета Statistica.

Результаты собственных исследований и их обсуждение

При макроскопическом исследовании операционного материала венозные и артериовенозные ангиодисплазии выглядели как отграниченные от окружающей ткани образования неправильной формы серо-розового или красноватого цвета, эластической или потно-эластической консистенции. На разрезе образования представляли собой скопления полостей различного диаметра (от 0,01 мм до 13 мм) или хаотично расположенных сосудов малого и среднего диаметра с несколько утолщенной (до 2-3 мм) стенкой. В ряде наблюдений в просвете сосудов отмечалось наличие эмболов гидрогеля в виде «манной крупы» или беловатых цилиндром длиной 10-15 мм.

При гистологическом изучении операционного материала артериовенозных ангиодисплазий нами были выявлены беспорядочные скопления сосудов артериального и венозного типа диаметром 5-15 мкм. Внутренняя эластическая мембрана этих сосудов характеризовалась неравномерным распределением эластических волокон с участками их «разволокнения». Кроме этого, наблюдались субинтимальные очаги гипертрофированных гладкомышечных клеток и очаговый склероз в стенке сосудов венозного типа. Все образования были окружены зоной плотной волокнистой соединительной ткани. Характерной особенностью артериовенозных ангиодисплазий явилось наличие артериовенозных свищей. Стенка афферентного отдела имела строение артерии с наличием наружной и внутренней эластичных мембран и гиперплазией гладкомышечных клеток, а эфферентного – вены с локальными расширениями и участками истончений.

При анализе рецидивов артериовенозных мальформаций по сравнению с первичными поражениями отмечался бльший объем плотной волокнистой соединительной ткани, окружающей образование, с обилием незрелых коллагеновых волокон и фибробластов, а также расположенных преимущественно в периферических участках образования капилляров, венул и артериол.

На препаратах артериовенозных ангиодисплазий, подвергнутых предварительной рентгеноэндоваскулярной окклюзии, нами была выявлена облитерация просвета множества артерий, как за счет разрастания волокнистой соединительной ткани, так и за счет гидрогелевых эмболов. В просвете некоторых сосудов отмечались явления реканализации и васкуляризации. В периферических отделах образования нами были выявлены многочисленные капилляры, артериолы и венулы, выстланные крупными округлыми эндотелиоцитами.

При микроскопическом исследовании венозных ангиодисплазий мягких тканей нами были выделены два основных гистологических типа поражений. Первый тип (28 наблюдений) представлял собой скопления диспластичных вен малого и среднего диаметра, второй (50 наблюдений) - скопления сосудистых полостей (каверн) различного размеров и формы с небольшим числом диспластичных вен преимущественно малого диаметра. При этом отмечалась неравномерность толщины стенок каверн: в участках истончения определялось уменьшение числа миоцитов, в участках утолщения число мышечных клеток было увеличенным. Вокруг образования отмечались участки плотной волокнистой соединительной ткани и очаги кровоизлияний различного размера.

В результате сравнительного изучения рецидивных и первичных венозных ангиодисплазий у одних и тех же пациентов нами было отмечено увеличение объема плотной волокнистой соединительной ткани вокруг образования и ее высокая клеточность (преимущественно за счет фибробластов), снижение числа вен и каверн, а также преобладание среди диспластичных сосудов вен и каверн малого и очень малого диаметра особенно в периферических отделах образования.

Венозные мальформации, подвергнутые рентгеноэндоваскулярной окклюзии, отличались облитерацией просвета части сосудов (артерий, вен, каверн) часто с явлениями реканализации, и бльшим числом капилляров, венул и вен малого диаметра на периферии образования.

При электронно-микроскопическом изучении периферических венозных ангиодисплазий установлено, что вены и каверны среднего и малого диаметра были выстланы округлыми функционально активными эндотелиоцитами. Последние имели ядра неправильной формы и большое количество средней длины и длинных отростков. Крупные каверны были выстланы преимущественно уплощенными эндотелиоцитами с низкой функциональной активностью, имеющими овальные ядра и малое число коротких отростков. Признаки функциональной активности (большое число вакуолей в цитоплазме, множество выростов цитоплазматической мембраны, мелкодисперсный хроматин, множество рибосом) были более выражены в эндотелиоцитах, выстилающих сосуды малого диаметра, стенка которых была представлена одним слоем эндотелиальных клеток и единичными перицитами. Базальная мембрана в крупных кавернах местами имела прерывистый характер и локальные утолщения.

Плотные контакты между эндотелиоцитами были единичными, однако их количество было несколько выше в кавернах крупного диаметра. При этом в одном наблюдении встречались крупные каверны с нарушенной эндотелиальной выстилкой и явлениями экстравазации эритроцитов. Стенка таких каверн была представлена волокнами зрелого коллагена и расположенными между ними фибробластами. На всех препаратах в сосудистой стенке выявлялись единичные перициты. Стенка сосудов была значительно утолщена в больших кавернах преимущественно за счет волокон зрелого коллагена и фибробластов, имевших чаще овальную и веретеновидную форму, реже – неправильную. Часть фибробластов находилась в функционально активном состоянии.

При электронно-микроскопическом исследовании артериовенозных форм ангиодисплазий нами было установлено, что артерии и вены малого диаметра были выстланы функционально активными эндотелиоцитами с множеством средней длины и длинных отростков. Ядра таких клеток имели овальную форму и изрезанную ядерную мембрану. Артерии и вены крупного диаметра были выстланы преимущественно уплощенными эндотелиальными клетками с овальными ядрами, малым числом коротких отростков и признаками низкой функциональной активности.

В мелких сосудах стенка состояла из одного слоя эндотелиоцитов с признаками повышенной функциональной активности и единичных перицитов. Количество плотных контатков между эндотелиоцитами в сосудах различного калибра было минимальным. Сосудистая стенка была значительно утолщена в крупных венах и умеренно утолщена в артериях и венах среднего диаметра. В участках утолщения наблюдались волокна зрелого коллагена и фибробласты овальной и веретеновидной формы. Базальная мембрана стенок крупных артерий местами имела прерывистый или многослойный вид с участками утолщений. Кроме этого, отмечалось уменьшение числа перицитов и наличие участков разволокнения пучков коллагена в стенке крупных артерий. Часть фибробластов находилась в функционально активном состоянии.

По данным литературы [Suri C., 1996] любые нарушения ангиогенеза сопровождаются нарушением межэндотелиальных контактов. Так, уменьшение числа плотных контактов, по мнению A. Peters [1991], может свидетельствовать как о неполноценности гематоэнцефалического барьера при сосудистых мальформациях центральной нервной системы, так и о склонности ангиодисплазий к развитию рецидивов. При этом щелевидные межэндотелиальные контакты в диспластичных сосудах значительно шире по сравнению с нормальными сосудами головного мозга [Tu J., 2006]. В изученных нами наблюдениях артериовенозных и венозных ангиодисплазий выявлено лишь небольшое число плотных контактов между эндотелиоцитами. Следует также отметить, что при артериовенозных формах количество плотных контактов было несколько меньшим, что, возможно, объясняет более активный рост и бльшую склонность данных образований к развитию рецидивов.

Другим проявлением различных по своей природе нарушений процессов васкулогенеза и ангиогенеза является дисбаланс так называемых вспомогательных компонентов сосудистой стенки, выражающийся в уменьшении числа или полном отсутствии в ее структуре перицитов [Folkman J., 1996]. Дефицит этих клеток, выполняющих функции стабилизации структуры сосудистой стенки и, возможно, фагоцитоза, играет важную роль в патогенезе некоторых типов ангиодисплазий [Tille J.C., 2004]. При электронно-микроскопическом изучении операционного материала нами были выявлены единичные перициты в сосудистой стенке как артериовенозных, так и венозных ангиодисплазий, а в некоторых сосудах артериовенозных мальформаций даже полное их отсутствие. Подобные изменения согласуются с данными R.E. Clatterbuck с соавт. [2001], установившими отсутствие перицитов в структуре стенок кавернозных мальформаций центральной нервной системы.

Характерными ультраструктурными признаками сосудистых мальформаций головного мозга считаются нарушения строения базальной мембраны стенки сосудов [Wong J.H., 2000, Clatterbuck R.E., 2001]. Они заключаются в ее многослойности, неравномерности толщины и отложении гранул гемосидерина. Описано также частичное или полное отсутствие базальной мембраны в структуре сосудистой стенки артериовенозных и кавернозных ангиодисплазий головного мозга [Tu J., 2005, 2006].

Нами при ультраструктурном изучении периферических ангиодисплазий также был выявлен прерывистый характер и локальные утолщения базальной мембраны в крупных кавернах и артериях, в некоторых кавернах венозных мальформаций она практически полностью отсутствовала. Базальная мембрана сосудов малого и среднего диаметра имела обычный вид.

Нами также установлено, что вены и каверны малого и среднего диаметра венозных ангиодисплазий, вены и артерии малого и среднего диаметра артериовенозных форм были выстланы эндотелиоцитами округлой и неправильной формы с множеством цитоплазматических отростков средней и большой длины. Большинство эндотелиоцитов, выстилающих сосуды малого диаметра и часть клеток, выстилающих сосуды среднего диаметра, находились в функционально активном состоянии. Ядра таких эндотелиоцитов имели овальную форму и изрезанную ядерную мембрану. Эндотелиальные клетки, выстилающие каверны, крупные вены и артерии, имели обычную уплощенную форму, небольшое число коротких выростов цитоплазмы и преимущественно находились в функционально неактивном состоянии.

В целом стенка сосудов среднего и крупного диаметра при артериовенозных и венозных ангиодисплазиях была представлена волокнами зрелого коллагена с расположенными между ними фибробластами и была значительно утолщена в кавернах крупного диаметра, преимущественно за счет волокон зрелого коллагена и фибробластов, имевших чаще овальную и веретеновидную, реже – неправильную форму.

Таким образом, выявленные нами ультраструктурные особенности строения периферических ангиодисплазий отражают различия в их морфогенезе и могут быть использованы для дифференциальной диагностики различных их форм.

Важную роль в процессах эмбрионального развития и постнатального роста тканей, в том числе кровеносных сосудов, играют многочисленные факторы роста. Установлено, что рост эндотелиоцитов артериовенозных мальформаций не изменяется при введении в их культуру трансформирующего фактора роста (TGF-), тогда как темпы роста эндотелиоцитов нормальных тканей замедляются и клетки подвергаются апоптозу [Дан В.Н. и соавт., 2008].

Pages:     | 1 || 3 | 4 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»