WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 |   ...   | 3 | 4 || 6 | 7 |   ...   | 11 |

С целью определенияоптимальных концентраций антигенов дляконструирования ассоциированных вакцинбыли изготовлены инактивированныеформалином антигены D.nodosus,F.necrophorum, C.perfringens т. A, S.aureus, A.pyogenes в концентрациях 10, 20, 40млрд. микробных клеток в мл, которымииммунизировали 36 овец 1,5 – 2 летнего возраста.По уровню гуморальных антител в РАподбирали оптимальные концентрации длясоставления опытных серий ассоциированныхвакцин. В результате проведенныхисследований были установлены следующиеконцентрации антигенов для составленияопытных серий ассоциированных вакцин:F. necrophorum и D.nodosus 20 млрд. м.т./мл,S.aureus, C.perfringens т. А, A.рyogenes – 30 – 40млрд. м.т./мл.Конкуренцию антигенов изучали также наовцах, которых прививали моновакцинами изуказанных штаммов на ГОА адъюванте иэкспериментальной ассоциированнойвакциной с этим же адъювантом. Количествокаждого антигена в ассоциированнойвакцине и моновакцинах было одинаковым. Оналичии или отсутствии конкуренцииантигенов судили по титру специфическихагглютининов и токсиннейтрализующихантител. Результаты исследованийприведены в табл. 4.

Исследования позволилиустановить факт отсутствия конкуренцииуказанных антигенов в организме привитыховец. Уровни антител, стимулируемых каждойвалентностью (антигеном) ассоциированнойвакцины в сравнении с уровнем антител,стимулируемых моновакцинами, былипримерно одинаковыми и даже несколькобольшими у ассоциированной вакцины понекоторым валентностям.

Проведенныеисследования позволили перейти кизготовлению опытных серийассоциированных вакцин противинфекционных болезней конечностей овец инекробактериоза КРС и их испытаниям внеблагополучных по этим болезнямовцеводческих и животноводческиххозяйствах.

2.5. Испытания опытныхобразцов ассоциированных вакцин противинфекционных болезней конечностей овец инекробактериоза КРС. Разработка схемыприменения ассоциированных вакцин.

Испытание опытной серииинактивированной ассоциированной вакциныпротив инфекционных заболеванийконечностей овец с масляным адъювантом,провели в сравнении с Югославскойассоциированной вакциной «Памавак» иотечественной моновакциной противкопытной гнили овец в совхозе«Кузнецовский» Тверской области. В своюочередь, в совхозе «Мир» Рузаевскогорайона Республики Мордовия испытывалисьнесколько вариантов инактивированнойвакцины против инфекционных заболеванийконечностей овец с различными адъювантамии антигенным составом. Аналогично всовхозе «им. Кирова» Балашихин-

Таблица 4

Результатысравнительного испытания ассоциированнойвакцины и моновакцин

Срокиисследований

Средниетитры в РА и РН

Средниетитры в РА и РН

моновакцины.

ассоциированная вакцина

D.nodosus

F.necrophorum

S. aureus

A.pyogenes

C.perfringens т. А

D.nodosus

F.Necrophorum

S. aureus

A.pyogenes

C.perfringens т. А

Довакцинации, 1-я вакцинация

1:60

±5

1:80

±5

1:70

±5

1:50

±0

-

1:80

±5

1:80

±5

1:70

±5

1:50

±0

-

Через 1 меспосле 1-й вакцинации, 2-я вакцинация

1:200

±0

1:480

±40

1:200

±0

1:60

±5

0,24

1:280

±40

1:1920

±200

1:240

±20

1:60

±5

0,88

Через 2недели после 2-й вакцинации

1:960

±30

1:1660

±0

1:360

±20

1:160

±10

0

1:1600

±0

1:3840

±800

1:480

±40

1:240

±10

1,72

Через 1 меспосле 2-й вакцинации

1:480

±40

1:2240

±300

1:400

±0

1:360

±20

0,5

1:1040

±80

1:2240

±300

1:480

±4

1:480

±40

-

Через 2 меспосле 2-й вакцинации,

1:400

±0

1:1920

±180

1:320

±20

1:150

±10

-

1:960

±30

1:1920

±200

1:360

±20

1:200

±0

-

Через 3 меспосле 2-й вакцинации

1:150

±10

1:960

±30

1:150

±10

1:50

±0

-

1:720

±20

1:1600

±0

1:280

±40

1:80

±5

-

ского района Московскойобласти были испытаны несколько вариантовинактивированной ассоциированной вакциныпротив некробактериоза КРС с лечебной ипрофилактической целями, включая вариантвакцины с им- муномодулятором «Гликопин»(ГМДП), в сравнении с Югославскойассоциированной вакциной «Памавак» на 170головах крупного рогатого скота.Впоследствии, лучшим вариантом вакциныпротив некробактериоза КРС было привитовсе поголовье (1347 коров) этого хозяйства.Другой вариант (эмульгированной) опытнойсерии инактивированной ассоциированнойвакцины против некробактериоза КРС былиспытан на 381 голове КРС в совхозе«Луховский» Октябрьского района г.Саранска. В дальнейшем в совхозе«Барыбино» опытно-промышленной сериейинактивированной ассоциированной вакциныпротив некробактериоза КРС с ГОАадъювантом, было привито 32 коровыразличными дозами этого препарата. В этомхозяйстве были исследованы такженекоторые параметры иммунитета,стимулируемого этой вакциной.

В результатепроведенных исследований былоустановлено, что вакцинация животныхинактивированными ассоциированнымивакцинами против инфекционных заболеванийконечностей овец и некробактериоза КРСявляется эффективным методом борьбы сэтими болезнями. Их эффективностьоказалась выше, чем у Югославскойассоциированной вакцины «Памавак» иэмульгированной моновакцины противкопытной гнили овец. В итоге, в качествеадъюванта был выбран 3% ГОА как менеереактогенный по сравнению с масляным идешевый. Наиболее эффективной оказаласьдвукратная иммунизация животных синтервалом 28 –30 дней при подкожном введении в областиколенной складки для КРС и в области нижнейтрети шеи для овец в дозах по 5 мл на 1 головуживотного.

Срок иммунитета,стимулируемого этими вакцинами непревышал 6 месяцев, поэтому перспективнойявлялась однократная реиммунизация через5-6 месяцев после второй вакцинации дляподдержания иммунитета у привитыхживотных.

Инактивированнаяассоциированная вакцина противинфекционных заболеваний конечностей овецполучила название «Овикон», аинактивированная ассоциированная вакцинапротив некробактериоза конечностей КРС–«Нековак».

2.6. Разработка методовконтроля ассоциированных вакцин.

За основу лабораторныхметодов контроля вакцин «Овикон» и«Нековак» брали существующие стандартныеметодики: отбор проб по ОСТ 10-07-001-93,определение внешнего вида визуально,определение стерильности согласно ГОСТ28085-89 –«Препараты биологические. Методбактериологического контролястерильности». При этом в питательныхсредах с посевами и пересевами не должнобыть визуальных признаков ростамикрофлоры. Определение безвредностипроводили также по стандартной методике,используя 10 белых мышей и двух кроликов,при подкожном введении в соответствующихдозах. Вакцины считали безвредными,если животные в течение 10 суток оставалисьживы и клинически здоровы. Допускалосьобразование в местах введения вакцинприпухлостей различной величины.Принципиально важным и сложным стал вопросо разработке методов контроля антигенной ииммуногенной активности ассоциированныхвакцин «Овикон» и «Нековак» ввиду большогоколичества антигенов и анатоксиноввходящих в их состав. Ранее, нами в качествелабораторного контроля антигеннойактивности вакцины против копытной гнилиовец инактивированной эмульгированной былразработан метод определения антител в РАу вакцинированных кроликов.Предварительно нами были изученывирулентные и иммуногенные свойстваD. nodosus налабораторных моделях. В результатеисследований было установлено, чтолабораторные животные (кролики, белые мыши,морские свинки и другие) не чувствительны кD. nodosus. Приразличных методах заражения и дозахкультуры D. nodosusне вызывали заболевания и падежалабораторных животных (Панасюк С.Д., 1982).Однако, нами было экспериментальноустановлено, что динамика накопленияантител в крови вакцинированных кроликов вполовинных дозах (от дозы овцы) повторяетдинамику накопления агглютининов упривитых овец только на более низкомуровне соответственно 1:720-1:880 и 1:2133-1:2533 напике накопления. При этом коэффициенткорреляции был в высокой степениположительным (r=+0,83-+ 0,99). Это позволилоиспользовать кроликов в качествелабораторной модели контроля антигеннойактивности вакцины против копытной гнилиовец ВИЭВ инактивированнойэмульгированной (Панасюк С.Д. 1982, 1983).Предложенный метод прошел проверку наОрской и Армавирской биофабриках и надежнообеспечивал качество указанной вакцины домомента снятия её с производства. Учитываятот факт, что в состав вакцины «Овикон»входит антиген D. nodosus, мы использовали указанный методконтроля антигенной активности этойвалентности на кроликах в тех жепараметрах, как и у вакцины против копытнойгнили овец. Более того, учитывая потерювирулентных свойств культур F. necrophorum (быструюпотерю вирулентных свойств культур припересевах на жидких питательных средах ивозможность образования L-форм). Нами были проведенысравнительные исследования по определениюдинамики антител у вакцинированныхкроликов, овец и КРС. Результатыисследований показали, как длявалентности D. nodosus, так и для валентностиF. necrophorum имеется возможностьиспользовать кроликов в качествелабораторной модели для оценки антигеннойактивности вакцин. Корреляция титровагглютининов у вакцинированных кроликов иовец, а также у привитых кроликов и КРС былаочень высокой и соответственно составлялаr=+0,97 и r=+ 0,99,что показано в таблице 5.Полученные результаты позволили намрасширить эксперимент и продолжитьиспользовать кроликов в качествелабораторной модели антигенной активностивспомогательных валентностей S. aureus, C.perfringens т. А, A. pyogenesассоциированных вакцин«Овикон» и «Нековак».

Полученные результатыпозволили установить тот факт, чтопривитые вакцинами «Овикон» и «Нековак»кролики могут быть лабораторной

Таблица 5

Сравнительноеантителообразование у вакцинированных(валентность F.necrophorum)

кроликов, овец,КРС


Вакцины,

Животные,

Дозы,

Срокиисследований

Двукратная доза (мл)

Количество животных (гол.)

Срокиисследований

Коэффициент корреляции ®

Средние титры агглютининов вРА

До 1-йвакцинации

1-я вакцинация

1 месяцпосле

1-й вакцинации

2-я вакцинация

2 неделипосле 2-й вакцинации

1месяц

после 2-йвакцинации

2месяца

после 2-йвакцинации

Вакцина«Овикон»,

Кролики

4

10

1:70±10

1:560±30

1:1440±40

1:1360±60

1:1200±30

Вакцина«Овикон», Овцы

10

10

1:100±0

1:1520±60

1:2560±120

1:2480±80

1:2240±40

+0.97

Pages:     | 1 |   ...   | 3 | 4 || 6 | 7 |   ...   | 11 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»