WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     || 2 | 3 |

На правах рукописи

ОРШАНКО АЛЛА МИХАЙЛОВНА

ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ПОЛЛИНОЗА И ЛАТЕНТНОЙ СЕНСИБИЛИЗАЦИИ

14.00.36 – АЛЛЕРГОЛОГИЯ И ИММУНОЛОГИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

Москва – 2009

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Российский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научный руководитель:

доктор медицинских наук,

член-корреспондент РАМН Порядин Геннадий Васильевич

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук,

профессор Балякин Юрий Викторович

доктор биологических наук,

профессор Бержец Валентина Михайловна

Ведущая организация:

НИЦ «Институт иммунологии» ФМБА России

Защита состоится «21» декабря 2009 года в 14.00 часов на заседании диссертационного совета Д 208.072.05 при ГОУ ВПО РГМУ Росздрава

по адресу: 117997, г. Москва, ул. Островитянова, д. 1.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО РГМУ Росздрава по адресу: 117997, г. Москва, ул. Островитянова, д. 1

Автореферат разослан «24» октября 2009 года

Ученый секретарь диссертационного совета

кандидат медицинских наук, доцент Т.Е. Кузнецова

Общая характеристика диссертации

Актуальность проблемы

Согласно результатам многочисленных популяционно-статистических исследований, распространенность аллергических заболеваний в течение последних 30 лет повсеместно удваивается каждые десять лет [Лусс Л.В., 2004; Дыбунова Е.Л., 2008]. Атопия является наиболее распространенной формой гиперчувствительности немедленного типа. Поллиноз, которым страдают 5 - 30% населения планеты, является типичным представителем группы атопических заболеваний [Zeller S., et al., 1993; Palma-Carlos A.G., 1995]. Такая патология имеет четко выраженную сезонность, связанную с наступлением периода цветения растений.

Возникновение поллиноза обусловлено взаимодействием экзогенных и эндогенных провоцирующих факторов, особое место среди которых занимает наследственная предрасположенность, климато-географические особенности региона, степень аллергенности растений [Балаболкин И.И., 1996; Жерносек В.Ф., с соавт. 1999; Дыбунова Е.Л., 2008]. Необходимость изучения этого состояния обусловлена тем, что поллиноз, представляя из себя самостоятельное заболевание, одновременно является предболезнью для более тяжелой патологии, в частности для бронхиальной астмы [Адо А.Д., 1978; Лусс Л.В., 2004; Gonzleaz Diaz S.N., et al., 2002; Koh Y.Y., et. al., 2003].

Несмотря на многочисленные клинико – экспериментальные исследования, не все аспекты патогенеза поллиноза изучены. В настоящее время опубликовано большое число работ, посвященных изучению общего уровня Т-лимфоцитов (CD3) и хелперно-индукторных клеток (Th) в обострение и ремиссию, цитокиновому профилю, особенностям клеточного состава слизистой оболочки носа при поллинозе в различные стадии заболевания. Однако, развернутых исследований популяционно-субпопуляционного состава лимфоцитов периферической крови в обострение и ремиссию поллиноза до сих пор не проведено, не смотря на то, что данные о наличии отклонений в иммунном статусе больных поллинозом в ремиссии появились достаточно давно [Majori M., at. all., 1997].

На сегодняшний день остается не изученным содержание в периферической крови при поллинозе цитотоксических Т-лимфоцитов (CD8), нет данных о субпопуляционном составе естественных киллеров (NK-клеток). Практически отсутствуют сведения об относительном содержании в периферической крови В-лимфоцитов и степени их дифференцировки.

Активационный процесс описывается в большом числе публикаций, уже многое известно об экспрессии основных активационных антигенов в обострение и ремиссию поллиноза. Сформирована концепция о нарушении индукции активационного апоптоза при атопических заболеваниях [Порядин Г.В., 2008]. Тем не менее, в доступной литературе нет сведений об уровне экспрессии лимфоцитами периферической крови рецептора для входа в активационный апоптоз (Fas-антигена) в различные стадии заболевания.

Одним из наиболее эффективных методов оценки состояния иммунной системы является использование моноклональных антител для определения поверхностного фенотипа лимфоцитов. С помощью этого метода можно получить представление о количественном составе лимфоцитов и характере активационных процессов.

Латентная сенсибилизация - это состояние, предшествующее клинически выраженной аллергии [Феденко Е.С., 2001]. В настоящее время проблема латентной сенсибилизации находится в стадии изучения. Получены эпидемиологические данные о проценте перехода состояния латентной сенсибилизации в клинически выраженную аллергию [Horak F., 1985; Bodtger U., 2004]. Есть сведения об особенности экспрессии хемокиновых рецепторов на лимфоцитах, о дегрануляционной способности тучных клеток и базофилов у лиц, с выявленной латентной сенсибилизацией [Assing K., et al., 2006; Jensen B.M., et al., 2006; Holse M., et al., 2006]. Однако, все еще отсутствуют надежные иммунологические критерии диагностики латентной сенсибилизации.

Исходя из описанного выше, сформированы следующие цели и задачи для исследования.

Цель исследования

Идентификация иммунологических критериев, коррелирующих с клинической картиной поллиноза, и являющихся перспективными для лабораторной диагностики латентной сенсибилизации.

Задачи исследования

  1. Изучить популяционный и субпопуляционный состав Т, В-лимфоцитов и NK-клеток в стадиях обострения и ремиссии поллиноза.
  2. Уточнить особенности активационных процессов в стадиях обострения и ремиссии поллиноза на основе анализа структуры фенотипического состава общей популяции лимфоцитов.
  3. Идентифицировать маркеры лимфоцитов, достоверно отражающих клиническое течение (переход ремиссии в обострение) поллиноза.
  4. Провести сравнительное исследование фенотипических особенностей иммунокомпетентных клеток здоровых субъектов и лиц с латентной сенсибилизацией.
  5. Идентифицировать иммунологические критерии, перспективные для лабораторной диагностики латентной сенсибилизации.
  6. Выработать алгоритм лабораторной диагностики для выявления латентной сенсибилизации у лиц, составляющих группу риска для атопических заболеваний.

Научная новизна

Впервые проведено сравнительное фенотипическое исследование лимфоцитов больных поллинозом в стадии обострения и ремиссии с использованием широкого спектра показателей Т-, В-клеточного иммунитета и NK-клеток. Впервые дана иммунологическая характеристика активационного процесса лимфоцитов и выявлены особенности Fas-зависимого апоптоза в зависимости от стадии поллиноза.

Впервые описан фенотипический состав лимфоцитов у пациентов с латентной сенсибилизацией. Предложены диагностические лабораторные критерии для выявления этого состояния в группах риска.

Практическая значимость

Полученные результаты работы существенно дополняют представление об иммунопатологических механизмах развития поллиноза и латентной сенсибилизации.

Выявление основных иммунологических отклонений, характерных для латентной сенсибилизации, дало возможность сформировать критерии ее лабораторной диагностики.

Предложенный алгоритм исследования позволил выделить в группе больных поллинозом лих, имеющих иммунологические признаки «неполноценной» ремиссии, указывающие на формирование латентной сенсибилизации к новым аллергенам. С целью предотвращения расширения спектра чувствительности таким больным рекомендовано проведение профилактических курсов иммунокоррегирующей терапии в зимнее время года.

Реализация результатов исследования

Результаты исследования внедрены в работу в отделения иммунопатологии взрослых и интенсивной терапии НИЦ «Института иммунологии» ФМБА России и в научно-педагогический процесс на кафедре патологической физиологии ГОУ ВПО РГМУ.

Апробация диссертации

Основные результаты работы доложены на Европейском конгрессе по астме (Москва, 2001); 5-ом конгрессе по Современным проблемам аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии, РААКИ (Москва, 2002).

Структура и объем диссертации

Диссертационная работа изложена на 99 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, 3 глав собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций. Работа иллюстрирована 7 таблицами и 16 рисунками. Указатель литературы включает 154 (из них 73 отечественных, 81 зарубежных).

Положения, выносимые на защиту

  1. Состояние латентной сенсибилизации ассоциируется с увеличением процентного содержания в периферической крови лимфоцитов с CD54+- и CD95+-антигенами; определение уровня экспрессии этих маркеров на лимфоцитах является целесообразным для лабораторной диагностики данного состояния.
  2. Поллиноз характеризуется выраженными изменениями популяционно-субпопуляционного состава лимфоцитов и параметров активационного процесса как в стадию обострения, так и в ремиссию.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

По материалам диссертации опубликовано 4 печатные работы, 2 из которых - в рецензируемых научных изданиях ВАК.

СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИОННОГО ИССЛЕДОВАНИЯ

Материал и методы

Объектом исследования в данной работе были лимфоциты периферической крови больных поллинозом и пациентов с латентной сенсибилизацией.

Больные поллинозом в стадии ремиссии и пациенты с латентной сенсибилизацией отбирались специалистами отделения иммунопатологии взрослых ГНЦ «Института Иммунологии» ФМБА России (заведующий – профессор, д.м.н. Латышева Т.В.); больные в обострение поллиноза - сотрудниками кафедры патофизиологии РГМУ (заведующий кафедрой – профессор, д.м.н. Порядин Г.В).

В настоящее исследование были включены 42 больных с поллинозом: 17 в обострении, 25 в ремиссии, в возрасте от 17 до 45 лет. 20 больных составляли женщины, 22 – мужчины. Продолжительность заболевания у разных лиц варьировала от 2 до 20 лет. Все пациенты имели диагноз «поллиноз», подтвержденный кожными тестами и/или наличием аллергенспецифических IgE в крови, а также прошли стандартный курс клинического, лабораторного и инструментального обследования (общий анализ крови, общий анализ мочи, биохимический анализ крови, исследование на ВИЧ, НВS-Ag, HCV-Ab).

В аллергологическом анамнезе в обследованной группе чаще всего встречалась сочетанная сенсибилизация к пыльце деревьев и смеси сорных трав - 16 человек (38,0%). Сенсибилизация к пыльце деревьев была у 14 больных (33,4%), повышение чувствительности одновременно к пыльце деревьев, злаков и смеси сорных трав отмечалось у 6 больных (14,3%), у такого же числа пациентов имелась сенсибилизация к сорным травам.

С диагнозом «латентная сенсибилизация» было 15 пациентов в возрасте от 14 до 47 лет, из них 7 мужчин и 8 женщин. Все пациенты с латентной сенсибилизацией отобраны из числа больных, проходивших обследование и лечение по поводу различных аллергических и хронических инфекционно-аллергических заболеваний.

Заключение о наличии латентной сенсибилизации основывалось на положительных результатах кожных скарификационных проб. Их назначали для уточнения причин имевших место аллергических реакций (самостоятельных или сопровождавших хронические заболевания), послуживших мотивом для обращения за лечебной помощью. У всех 15 отобранных для исследований больных кожные тесты выявили наличие латентной сенсибилизации к пыльцевым аллергенам, тогда как ни один из этих пациентов не отмечал наличия (ни в настоящем, ни в прошлом) каких-либо аллергических реакций (в виде конъюнктивита, ринита, крапивницы или бронхоспастических реакций) в ситуациях вероятного контакта с этими аллергенами.

Группу контроля составили 26 практически здоровых добровольцев из числа студентов РГМУ в возрасте от 18 до 35 лет (16 женщин и 10 мужчин), которые по всем антропометрическим показателям соответствовали двум предыдущим группам больных. В момент сдачи крови на анализ все лица из группы контроля были здоровы и не имели аллергических реакций в анамнезе.

При исследовании иммунного статуса применяли методы иммунофенотипирования мембранных антигенов лимфоцитов периферической крови с использованием моноклональных антител производства НПЦ «МедБиоСпектр» (Россия). При количественной оценке субпопуляций лимфоцитов использовали идентификационные маркеры Т-лимфоцитов (CD3, CD4, CD8), NK-клеток (СD16, CD56), В-лимфоцитов (CD20, CD72, мембраносвязанные IgM, IgG). Активационные процессы в иммунной системе изучали путем количественной оценки лимфоцитов, несущих следующие антигены: CD25, CD71, HLA-DR, CD95, CD54, CD23. С помощью флюоресцентной микроскопии в выделенной из проб крови фракции лимфоцитов определяли абсолютное и относительное число клеток, позитивных в отношении указанных маркеров.

Сравнивали перечисленные иммунологические показатели, рассчитанные у пациентов в стадии обострения поллиноза и ремиссии; в стадии ремиссии поллиноза и в группе здоровых лиц; среди пациентов с латентной сенсибилизацией и здоровыми лицами. При статистическом анализе полученных данных для оценки различий между средними значениями количественных показателей использовали параметрический критерий Стьюдента (t-тест). Различия расценивали как достоверные при критических значениях t, соответствовавших 95% доверительному интервалу (р< 0,05). Для облегчения компьютерных расчетов применяли программу «Биостат».

Результаты исследования

Особенности Т, В и NK-клеточного звеньев иммунной системы являются объектом изучения исследователей в связи с обязательным участием этих видов лимфоцитов в развитии аллергической реакции. Обострение аллергического воспаления, в свою очередь, изменяет показатели клеточного иммунитета.

Состояние латентной сенсибилизации, судя по процентному содержанию субпопуляций лимфоцитов с изучавшимися идентификационными CD-антигенами, ассоциируется с тенденцией к понижению относительного числа Т-лимфоцитов и NK-клеток при отсутствии изменений доли В-лимфоцитов.

Так, если в контроле (группа здоровых добровольцев) количество CD3+-клеток составило в среднем 66,7±1,0%, то у лиц с латентной сенсибилизацией оно оказывалось заметно ниже - 49,9±3,4% (р<0,05). Причем, падение общей численности Т-лимфоцитов отмечалось у 60,7% обследованных.

Pages:     || 2 | 3 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»