WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 |   ...   | 3 | 4 || 6 | 7 |   ...   | 10 |

Результатыпроведенных иммуногистохимическихисследований обобщены в Таблице 3. Полученные данные позволилисделать заключение том, что в большинствеисследуемых органов и тканейчеловека рецептор экспрессирован вэндотелиальных клетках микроциркуляторного русла, а такжев гладкомышечных клетках кровеносныхсосудов в некоторых изисследуемых тканей. Для подтвержденияданных выводов нами была проведена двойная иммунофлюоресценция ссовместным использованием двух антител:поликлональных выращенных против CL имоноклональных – против маркеров индивидуальных типов клеток:эндотелиальных, гладкомышечных клеток,лейкоцитов и макрофагов(данные не показаны). Данные проведенногоанализа также подтвердили специфическую экспрессию CL вэндотелиальных клеткахмикроциркуляторного русла

человека.

Исследованиелокализации и экспрессии функциональнойформы CL рецептора в тканях и клетках

Высокая специфичностьантител позволила нам также определитькакие формы CL рецептораэкспрессированы в тканях человека (Рисунок10). Данные проведенных исследованийуказывают на то, что в большинствеисследованных тканей человекаэкспрессирован функциональный рецептор(терминально гликозилированный, ассоциированный с плазматическоймембраной клетки) (Рисунок 10), и что этотрецептор находится наповерхности эндотелиальных клеток всоответствии с результатамииммуногистохимии (Рисунок 9).Дополнительный анализ позволилопределить, что в раковыхопухолях также экспрессированфункциональный рецептор (Рисунок10Б).

Гликозилирование СLрецептора in vivo.

Белковые экстрактыбыли получены
изнормальных и раковых тканей
человека и проанализированыс
применением методаSDS-PAGE
привосстанавливающих условиях с
последующей обработкой иммуноблотов с использованиемантител LN-1436 выращеннымипротив СL человека. Стрелка, негликозилированный (~37 кД); открытый ромб,основно-гликозилированный(~45 кД); черный ромб,терминально-гликозилирован-ный (~55 кД) виды рецептора. (А)

Нормальные тканичеловека (эндометрий, миометрий и желтоетело) содержат СL в той или инойформе.

Экспрессия рецептораотсутствует с плаценте человека на позднихстадиях бееременности. (Б) В тканяхраковых

опухолей (почек,яичников, лейомиомы и саркомыКапоши) основная форма СL -терминально

гликозилированныйрецептор.

Таким образом, намибыли выращены антитела, позволяющиеопределять не только наличие, но ифункциональную форму (экспрессированнуюна поверхности клетки) CL рецептора в клетках и тканяхчеловека. Высокая специфичность данныхантител позволила нам провести дальнейшиеисследования по изучению свойстврецептора в эндотелиальных клетках микроциркуляторного руслачеловека.

Исследованиеспецифичности и динамики десенситизации CLрецептора

Для выявления свойстврецептора экспрессированного в ЭКМРчеловека, как типа клеток в которыхрецептор экспрессирован in vivo, нами была проведена серияэкспериментов по изучению:

- экспрессии формрецептора (дегликозилированного, основно-и терминально-
гликозилированного);

  • экспрессии RAMPs;
  • внутриклеточной локализациирецептора;
  • транспорта и интернализациирецептора;
  • специфичности рецептора к АМ иCGRP;
  • десенситизации рецептора.

Экспрессия CL рецептораи RAMPs в эндотелиальных клеткахмикроциркуляторного русла человека

Экспрессия различныхформ рецептора была проанализирована сприменением методов иммуноблоттинга. Нами быливыявлено что в эндотелиальных клеткахмикроциркуляторного руслачеловека (ЭКМР) присутствуют как основно-так и теминально-гликозилированная формы рецептора (Рисунок 11А).

Орган

Другие типыклеток

CL-ИР

Заметки

ЭндотелийCL-ИР

лимфатический






очень сильная

узел

эндотелий

.++



.++++

экспрессиясильная

матка

эндотелий

.++++

эпителий гладкомышечные клетки

• _

.+++

экспрессиясредняя




миометрия

.+

.++

экспрессия

яичники

эндотелий

•/+

перициты

•/+

.+

слабаяэкспрессия

желчный






отсутствие

пузырь

эндотелий

.++++

гладкомышечныеклетки

.++

.-

экспрессии




эпителий слизистойоболочки

•+/-

Н/О

Не определялся

легкие

эндотелий

.++++





миндалины

эндотелий

.+++

плоский эпителий

.+/++

ОЯ

Окраска ядра CL -иммунно-




лимфоидные клетки

.+

CL-ИР

реактивность



•/+





желудок

эндотелий

или.+++

шифовый эпителий париетальные клетки




надпочечники

эндотелий

.++/+++.-/+ или

эпителий

•/+



слюнная железа

эндотелий

++

эпителий протоковсерозный эпитлеий

.+



паращитовидная







железа

эндотелий

-/++

эпителий

.++/++++



яички

эндотелий

.+/++

сперматогонии клеткиЛейдига

.+

Сильная ОЯ


трахея

эндотелий

.++





почка

эндотелий

.++++

эпителий гладкомышечные клетки

.+++



пищевод

эндотелий

.++

сосудов

эпидермис

гладкомышечныеклетки

.+++.++/+++



кожа

эндотелий

•/+

сосудов

.++++



печень

эндотелий

.+

гепатоциты

Pages:     | 1 |   ...   | 3 | 4 || 6 | 7 |   ...   | 10 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»