WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 | 2 || 4 |

Наиболее выраженные изменения были отмечены при концентрациях 50 и 100 нг/мл VEGF. В качестве положительного контроля использовали 100 ед/мл TNF- и 1 мкг/мл LPS. Известно, что оба этих фактора усиливают экспрессию мРНК VEGF макрофагами, что было подтверждено и нашими исследованиями. Также нами было показано, что VEGF в концентрациях 50 и 100 нг/мл достоверно усиливает экспрессию макрофагами мРНК TSP-1 (Табл. 3). Тот факт, что макрофаги усиливают экспрессию мРНК VEGF и VEGFR1 в ответ на действие VEGF in vitro, показано нами впервые. Усиление синтеза макрофагами VEGF, VEGFR1 и VEGFR2 может создавать дополнительную петлю усиления ангиогенной активности макрофагов в тканях. Описанные эффекты VEGF на мононуклеарные фагоциты могут иметь значение при росте опухолей человека и животных, при которых отмечается увеличение концентрации этого фактора в сыворотке крови.

Полученные нами данные по влиянию VEGF на макрофаги in vitro отличаются от изменений тех же показателей в макрофагах на поздних сроках роста гепатомы, когда наблюдали усиление синтеза мРНК VEGFR2 и TSP-1 и не отмечали усиления синтеза мРНК VEGF и VEGFR1 (Табл. 4).

Таблица 3. Влияние VEGF на синтез мРНК VEGF, VEGFR1, VEGFR2 и TSP-1 перитонеальными макрофагами мышей in vitro.

стимулятор

мРНК

VEGF

VEGFR1

VEGFR2

TSP-1

контроль

4,94±0,36

2,78±0,45

2,9±0,05

8,99±0,15

VEGF

10нг/мл

6,58±0,47*

3,08±0,64

3,38±0,25

10,13±1,36

VEGF

50нг/мл

6,64±0,42**

5,09±0,37*

5,21±1,71*

11,48±0,65**

VEGF 100нг/мл

6,57±0,64*

5,54±0,24**

4,49±1,04

11,84±1,17*

ЛПС

1мкг/мл

6,97±0,71*

4,65±1,08

4,94±0,99

10,53±0,46*

TNF- 100ед/мл

6,85±0,78*

4,78±1,8

3,74±0,53

13,73±1,95*

Примечание: * - различия с контролем по критерию Вилкоксона достоверны при р<0,05; ** - при р< 0,01.

Таблица 4. Сравнение синтеза мРНК VEGF, VEGFR1, VEGFR2 и TSP-1 перитонеальными макрофагами мышей при росте гепатомы in vivo и под влиянием VEGF in vitro.

Перитонеальные макрофаги

Синтез мРНК

VEGF

VEGFR1

VEGFR2

TSP-1

при росте гепатомы (35 сут)

под влиянием VEGF in vitro

Примечание: увеличение уровня экспрессии мРНК по отношению к контролю,

= отсутствие изменений в уровне экспрессии мРНК.

По всей видимости, усиление синтеза макрофагами VEGFR2 и TSP-1 на поздних стадиях опухолевого роста не связано с усилением локального синтеза VEGF в перитонеальной полости животных.

Заключение. В настоящем исследовании в качестве экспериментальной модели была использована гепатома 22а, вызывающая состояние Т-клеточного иммунодефицита, выражающегося в развитии прогрессирующей инволюции тимуса, лимфопении и опустошении Т-зависимых зон отдельных лимфатических узлов (Киселева, 2002). Нами было показано, что рост опухоли не сопровождается повышением уровня содержания VEGF в циркуляции, однако сопровождается усилением экспрессии мРНК VEGF стромальными клетками тимуса, а также TSP-1 тимоцитами.

Мы предполагаем, что изменения локального синтеза VEGF и TSP-1 в тимусе могут способствовать развитию Т-клеточного иммунодефицита благодаря тому, что VEGF может усиливать апоптоз тимоцитов (Киселева, 2002). Кроме того, усиление экспрессии мРНК VEGFR2 тимоцитами, происходящее параллельно с усилением синтеза мРНК VEGF стромой, может обуславливать их повышенную чувствительность к апоптозу. В таком случае, активация оси строма– VEGF тимоциты– VEGFR2 с конечным эффектом в виде апоптоза может являться одним из механизмов запустевания вилочковой железы. Данные по влиянию TSP-1 на тимоциты отсутствуют, однако известно, что TSP-1 способен вызывать апоптоз преиферических Т-клеток (Manna, Frazier, 2003).

Другим механизмом развития инволюции тимуса при опухолевом росте, дополняющим действие предыдущего, может служить усиленный выход популяции незрелых тимоцитов на периферию. VEGF и TSP-1 могут способствовать данному процессу, а функциональная неполноценность Т-клеток и их повышенная чувствительность к апоптозу будет создавать предпосылки для их ускоренной элиминации на периферии. Так известно, что VEGF усиливает трансэндотелиальную миграцию различных типов клеток, главным образом, усиливая проницаемость эндотелия (Zhang et al., 2001; Naiyer et al., 1999). TSP-1 является матриклеточным белком, который в отличие от структурных компонентов матрикса, играет важную роль во взаимодействиях клетка-клетка и клетка-матрикс. В частности, он играет важную роль в адгезии и миграции Т-лимфоцитов (Forslow et al., 2007). Можно предположить, что VEGF и TSP-1 образуют тандем, имеющий важное значение для подвижности тимоцитов, а VEGFR2 участвует в реализации этого эффекта. Показанное нами усиление экспрессии мРНК VEGFR2 тимоцитами дополняет данные литературы, полученные недавно, о важной роли именно этого рецептора в инволюции тимуса у мышей в ответ на введение VEGF интактным животным (Huang et al., 2007).

Кроме того, было установлено, что на поздних сроках роста гепатомы в макрофагах также усиливается экспрессия мРНК TSP-1 и рецептора VEGF – VEGFR2. Влияние TSP-1 на миграционную активность моноцитов/макрофагов не вполне изучено, однако известно, что TSP-1 способен контролировать состав воспалительного очага (Puolakkainen et al., 2005; Agah et al., 2002). Мы предполагаем, что усиление синтеза макрофагами мРНК TSP-1 и VEGFR2 может также свидетельствовать о возможной локальной активации миграционной активности данных клеток.

Таким образом, в работе показано, что рост опухоли может оказывать ряд системных эффектов на клетки иммунной системы, а именно – на синтез VEGF стромой тимуса, на синтез VEGFR2 и TSP-1 тимоцитами и макрофагами. Какие сигналы со стороны опухоли могут приводить к подобным эффектам В настоящий момент существует точка зрения, что активация клеток иммунной системы и запуск синтеза определенных молекул может происходить под влиянием «сигналов тревоги» (Martzinger, 2007). Такими сигналами могут являться компоненты разрушенных клеток, попадающие в кровоток при развитии некроза в опухолевом узле, а также нуклеиновые кислоты, аденозин, АТФ, белки теплового шока и др. (Frantz et al., 2005). Подобные молекулы способны вызывать активацию клеток, удаленных от очага опухолевого роста, через toll-подобные, аденозиновые и другие рецепторы. Например, известно, что аденозин стимулирует синтез VEGF в клетках эндотелия (Ryzhov et al., 2006), что, возможно, вносит вклад в усиление синтеза этого фактора стромой тимуса.

Усиление синтеза TSP-1 макрофагами может иметь важное значение для опухолевой прогрессии, обеспечивая локальную супрессию Т-клеточного иммунитета в различных тканях и органах иммунной системы. Иммуносупрессорный эффект TSP-1 в отношении различных популяций Т-клеток описан в литературе (Zamiri et al., 2005; Beppu et al., 2001; Marteau et al., 2005).

Данные, полученные нами в исследовании, имеют важное значение для понимания взаимодействия опухоли, факторов регулирующих ангиогенез и клеток иммунной системы. Антиангиогенная терапия широко применяется при различных заболеваниях, сопровождающихся усилением синтеза VEGF, таких как рост опухолей, псориаз, ревматоидный артрит. Полученные данные о локальном синтезе VEGF в тимусе подчеркивают важность применения антиангиогенных препаратов (специфических блокаторов рецепторов VEGF, или ингибиторов активности молекул, опосредующих проведение сигнала от этих рецепторов в клетке) в терапии опухолей не только для ингибиции опухолевой неоваскуляризации, но и для поддержания нормального функционирования Т-клеточного иммунитета. Впервые показано влияние роста опухоли на синтез ангиорегуляторных молекул в клетках иммунной системы, удаленных от опухолевого узла. Это важно для понимания связи опухолевой прогрессии с функционированием иммунной системы в организме. Рост опухоли не просто привлекает клетки иммунной системы для реализации их про-, либо антиангиогенного потенциала, но и способен регулировать созревание и активацию клеток иммунной системы, а также синтез этими клетками факторов ангиогенеза, характеризующихся иммуносупрессорными эффектами. Данные представленной работы подчеркивают необходимость проведения дальнейших исследований взаимодействия роста опухоли с клетками иммунной системы и могут внести значимый вклад в область теоретической онкоиммунологии.

ВЫВОДЫ

  1. Тимоциты интактных мышей способны конститутивно экспрессировать мРНК VEGF и TSP-1, а также мРНК VEGFR2, но не VEGFR1.
  2. Перитонеальные макрофаги интактных мышей способны конститутивно экспрессировать мРНК VEGF и TSP-1, а также мРНК рецепторов VEGF: VEGFR1 и VEGFR2.
  3. Инволюция тимуса при росте гепатомы 22а сопровождается усилением синтеза мРНК VEGF стромальными клетками тимуса и не сопровождается изменением уровня содержания VEGF в сыворотке крови.
  4. Рост экспериментальной гепатомы вызывает однонаправленное изменение синтеза мРНК VEGFR2 и TSP-1 в тимоцитах и перитонеальных макрофагах, удаленных от опухолевого узла, что может рассматриваться в качестве системного эффекта роста опухоли.
  5. Синтез мРНК VEGF, VEGFR1 и VEGFR2 в перитонеальных макрофагах интактных мышей усиливается в присутствии VEGF in vitro, что может создавать дополнительную петлю усиления ангиогенной активности макрофагов в тканях.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Статьи:

  1. Крылов А.В., Степанова О.И. Синтез рецепторов VEGF в макрофагах и лимфоцитах мышей// Вестник Уральской медицинской академической науки.- 2006.- Т.14,- №3,- С.315-318.
  2. Киселева Е.П., Крылов А.В., Людыно В.И., Суворов А.Н. Влияние VEGF на пролиферацию и апоптоз тимоцитов мышей in vitro// Бюлл. экспер. биол. и мед.- 2005.- Т.139,- №5.- С.533-537.
  3. Степанова О.И., Крылов А.В., Людыно В.И., Киселева Е.П. Экспрессия геновVEGF-A и VEGF-C и их рецепторов в лимфоцитах и макрофагах мышей// Биохимия- 2007.- Т.72,- №11.– С.1194-1198.
  4. Крылов А.В. Фактор роста эндотелия сосудов (VEGF) как модулятор воспалительной и ангиогенной активности макрофагов// Достижения фундаментальных наук в решении актуальных проблем медицины: Сборник материалов конференции.- Астрахань, 2006. -С.133-136.

Тезисы:

Pages:     | 1 | 2 || 4 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»