WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 | 2 || 4 | 5 |

Содержание F и DHEAS в образцах плазмы крови определялось иммуноферментными методами с помощью стандартных наборов реактивов («Алкор-Био», Санкт-Петербург – для F и «DSL», США – для DHEAS). Коэффициент вариации уровня гормонов в пределах одной реакции для каждого образца крови не превышал 10%, разных реакций – 15%. Эритроциты подвергали гемолизу и гемолизаты сразу же после приготовления использовали для определения активности антиоксидантных ферментов: СОД (EC 1.15.1.1, Cu, Zn-SOD), ГР (EC 1.6.4.2), ГП (EC 1.11.1.9), ГТ (EC 2.5.1.18). Активность СОД измерялась полярографическим методом (Rigo A. et al., 1975) в Институте проблем хи­мической физики РАН (г. Черноголовка) к.б.н. Т. Н. Богатыренко. Активность ГР, ГП, ГТ измерялась кинетическими спектрофотометрическими методами (Beutler E., 1975). Интенсивность процессов ПОЛ измерялась по концентрации продуктов, реагирующих с тиобарбитуровой кислотой (ТБК-АП) спектрофотометрическим методом (Ohkawa Y. et al., 1979). Активность СОД, ГР, ГП, ГТ и уровень ТБК-АП вычислялись в отношении к уровню общего белка, который определялся по методу Лоури (Lowry O.H. et al., 1951). Активность ГР выражалась в нмоль НАДФН за 1 мин на 1 мг общего белка эритроцитов, ГП – в ммоль восстановленного глутатиона (GSH) в 1 мин на 1 мг общего белка эритроцитов, ГТ – в мкмоль конъюгата глутатиона с 1-хлор-2,4-динитробензолом (GSДНБ) за 1 мин на 1 мг общего белка эритроцитов, СОД – в ммоль фермента на 1 мг общего белка эритроцитов, уровень ТБК-АП – в нмоль малонового диальдегида на 1 мг общего белка эритроцитов.

Статистическая обработка данных

Статистическая обработка результатов исследования производилась общепринятыми статистическими методами с использованием дисперсионного (ANOVA) и корреляционного анализа, t–критерия Стьюдента на базе статистических приложений к программе MS Office Excel 2000. Данные в таблицах и рисунках представлены в виде среднего арифметического ± ошибка среднего арифметического (M±m).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

1. Особенности функционирования ГГАС, эритроцитарной АОФС и ПОЛ в эритроцитах крови у самок макак резус разного возраста в условиях острого психоэмоционального стрессового воздействия

Динамика уровня F в плазме крови и активности эритроцитарной ГР в ответ на острое стрессовое воздействие у самок макак резус разного возраста представлены на рис. 1.

Рис. 1. Динамика уровня F в плазме крови (а) и активности эритроцитарной ГР (б) у молодых и ста­рых самок макак резус в ответ на острое стрессовое воздействие (M ± m).

** p<0,01; *** p<0,001 – по отношению к соответствующим значениям до начала иммобилизации

(0 мин) у молодых животных;

1)** p<0,01; 1)*** p<0,001 – по отношению к соответствующим значениям F до начала иммобилизации (0 мин) у старых животных;

2)* p<0,05 – возрастные различия

Как видно из рисунка 1а, концентрация F увеличивалась как у молодых, так и у старых животных, при этом максимальный подъем уровня F в плазме периферической крови у старых животных был существенно ниже по сравнению с молодыми животными (1300 ± 90 нмоль/л против 1572 ± 80 нмоль/л у молодых животных, p<0,05).

В ответ на стрессовое воздействие существенно увеличивалась активность ГР у молодых животных, в то время как повышение активности ГР у старых животных было менее выраженным по сравнению с молодыми животными и не носило статистически значимого характера (рис. 1б). Кроме того, за исключением исходных значений, достоверных возрастных различий в динамике активности ГР в ответ на стрессовое воздействие выявлено не было. По-видимому, это обусловлено более высокой базальной активностью ГР у старых животных. Однако, возрастные различия выявлялись при выражении активности ГР в процентах от базального уровня с более высокой стресс-реактив­ностью ГР у молодых животных, поскольку исходный уровень активности этого фермента у них был ниже (табл. 1).

Таблица 1

Динамика активности ГР (нмоль НАДФН/мин/мг белка) в эритроцитах крови у моло­дых и старых самок макак резус в ответ на острое стрес­совое воздействие (M ± m, % от исходного уровня)

Возраст, лет

Время, мин

0

30

60

120

240

6-8

100

150 ± 20

185 ± 20

193 ± 20

220 ± 26

20-27

100

104 ± 20

118 ± 10*

129 ± 10*

129 ± 16*

* p<0,05 – возрастные различия

У молодых животных между активностью ГР и концентрацией F отмечалась тесная положительная корреляционная зависимость в течение всех четырех часов эксперимента. Так, коэффициент корреляции между динамикой концентрации F и динамикой активности эритроцитарной ГР в интервале 0-240 мин составлял r = 0,78 ± 0,09. На протяжении же первых двух часов величина коэффициента корреляции приближалась к 1 (r = 0,98 ± 0,04). У старых обезьян, в отличие от молодых обезьян, отмечалась слабая корреляция между динамикой активности ГР в эритроцитах и динамикой уровня F в плазме крови. Так, коэффициент корреляции в диапазоне от 0 до 240 мин был равен 0,52 ± 0,15, а в диапазоне от 0 до 120 мин составил 0,67 ± 0,13.

В отличие от активности ГР, активность СОД у молодых самок макак резус в ответ на стрессовое воздействие, наоборот, снижалась (рис. 2а).

Рис. 2. Динамика активности СОД в эритроцитах крови у молодых (а) и старых (б) самок макак резус в ответ на острое стрессовое воздействие (M ± m).

* p<0,05;  ** p<0,01 – по отношению к уровню СОД до начала иммобилизации (0 мин) у молодых обезьян и в 1-й подгруппе старых обезьян; 1)* p<0,05;  1)** p<0,01 – по отношению к соответствующим значениям активности СОД до начала иммобилизации (0 мин) во 2-й подгруппе старых обезьян; 2)*** p<0,001 – по отношению к величине базальной активности СОД во 2-й подгруппе старых обезьян

По базальной активности СОД и по характеру изменений СОД в условиях стресса старые животные были сгруппированы в 2 подгруппы. Первую подгруппу составили 5 животных, у которых базальная активность СОД и ее динамика в ответ на стрессовое воздействие были аналогичны таковым у молодых животных (рис. 2б). Вторую подгруппу составили 5 старых животных, у которых базальная активность СОД была достоверно ниже, чем у животных первой подгруппы (соответственно 6,28 ± 0,24 и 8,50 ± 0,10 ммоль/мг белка, p<0,001) и повышалась в ответ на стрессовое воздействие в отличие от старых животных первой подгруппы и молодых животных (рис. 2б).

Активность эритроцитарных ГП и ГТ не претерпевала существенных изменений в условиях стресса (табл. 2).

Таблица 2

Динамика активности ГП и ГТ в эритроцитах крови у молодых и старых самок макак резус в ответ на острое стрессовое воздействие (M ± m)

Время, мин

ГП (ммоль GSH/мин/мг белка)

ГТ (мкмоль GSДНБ/мин/мг белка)

молодые животные

0

0,639 ± 0,069

4,447 ± 0,474

30

0,704 ± 0,081

4,523 ± 0,222

60

0,686 ± 0,080

3,989 ± 0,277

120

0,637 ± 0,079

3,934 ± 0,299

240

0,697 ± 0,086

4,170 ± 0,250

старые животные

0

0,667 ± 0,050

3,858 ± 0,679

30

0,598 ± 0,048

3,437 ± 0,722

60

0,738 ± 0,059

3,222 ± 0,516

120

0,747 ± 0,059

3,455 ± 0,340

240

0,728 ± 0,076

3,614 ± 0,435

Концентрация ТБК-АП в эритроцитах крови в ответ на острое стрессовое воздействие значимо увеличивалась у старых животных, в то время как у молодых животных не претерпевала достоверных изменений (табл. 3).

Таблица 3

Динамика уровня ТБК-АП (нмоль/мг белка) в эритроцитах крови у молодых (n=5) и старых (n=5) самок макак резус в ответ на острое психоэмоциональное стрессовое воздействие (M ± m).

Возраст,

годы

Время, мин

0

30

60

120

240

6-8

0,262 ± 0,039

0,269 ± 0,029

0,285 ± 0,045

0,268 ± 0,026

0,277 ± 0,036

20-27

0,259 ± 0,005

0,273 ± 0,007

0,298 ± 0,024

0,286 ± 0,007*

0,306 ± 0,010*

* p<0,05 – по отношению к соответствующим значениям до начала иммобилизации (0 мин)

Таким образом, подтверждено наличие выраженных возрастных изменений в реакции ГГАС и эритроцитарной ГР, отмечаемое ранее у небольшой группы животных (Гончарова Н.Д. и др., 2006; 2007; Gon­cha­rova N.D., 2006; Шмалий А.В., 2007). Кроме того, выявлены выраженные возрастные различия в реакции эритроцитарной СОД в ответ на острое стрессовое воздействие в послеполуденные часы. При этом тесная корреляционная связь между изменениями уровня F и активности ГР в условиях стресса, а также её снижение при старении указывают на важную роль нарушений стресс-реактивности ГГАС в развитии возрастных нарушений стресс-реактивности ГР эритроцитов. Наряду с повышением активности ГР выявлялось снижение активности СОД в эритроцитах у молодых животных. У половины старых животных активность СОД в базальных условиях носила сходный с молодыми животными характер. У другой половины старых животных (2-я подгруппа) базальная активность СОД была существенно ниже по сравнению как с молодыми животными, так и животными 1-й подгруппы, в ответ же на стрессовое воздействие она повышалась.

Возрастные нарушения стресс-реактивности эритроцитарных ГР и СОД, по-видимому, являются основной причиной активации ПОЛ, в эритроцитах у старых животных. Активация ПОЛ, в свою очередь, неизбежно приводит к повреждению клеточной мембраны эритроцитов, что сопро­вож­дается нару­шением их функциональной активности, и, по-видимому, снижением надежности транспорта кислорода к тканям. Это заключение согласуется с литературными данными выявившими увеличение интенсивности ПОЛ и снижение электрофоретической подвижности эритроцитов в условиях острого стресса у грызунов (Крылов В.Н. и Дерюгина А.В., 2005).

2. Индивидуальные особенности функционирования ГГАС и эритроцитарной АОФС у самок макак резус разного возраста в условиях стресса, обусловленного изменением условий жизни, частично сглаженного вследствие предварительной адаптации животных

2.1. Особенности функционирования коры надпочечников у самок макак резус разного возраста с разным типом поведения

Не было отмечено статистически значимых различий в концентрации F ни между группами молодых и старых обезьян с одинаковым поведением (т.е. возрастных изменений), ни между различными поведенчес­кими группами в каждом возрастном диапазоне (табл. 4). Отмечалась, однако, тенденция к более высоким концентрациям F у жи­вотных с депрессивноподобным поведением как в молодом, так и старом возрасте.

Таблица 4 

Концентрация F (нмоль/л) в плазме крови у самок макак ре­зусов разного возраста с разным типом поведения (М±m)

Pages:     | 1 | 2 || 4 | 5 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»