WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 || 3 | 4 |

Принцип метода регистрации осмотической и кислотной резистентности эритроцитов заключается в фотометрической регистрации кинетики распада клеток, помещенных в гипоосмотический раствор хлорида натрия (0,55%) или путем добавления к суспензии эритроцитов раствора соляной кислоты. Кинетические кривые (эритрограммы) являются графическим отражением последовательного вступления клеток различной степени стойкости в стадию гемолиза. С целью выявления скрытых структурных повреждений в мембранах эритроцитов изучали кинетику гипоосмотического гемолиза при 0,55% растворе хлорида натрия, что соответствует точке критической резистентности для клеток контроля (Резван С.Г., 1996 г.). Кинетику кислотного гемолиза эритроцитов, позволяющую оценить величину гидрофобного барьера проницаемости белковых компонентов мембраны, регистрировали после добавления к 5 мл суспензии эритроцитов 100 мкл 0,1 М раствора соляной кислоты (Гительзон И.И., 1960г.).

Забор крови для проведения исследования структурно-функциональных свойств эритроцитов производился на 3 - 4 сутки жизни из вены головы новорожденного во вторую пробирку после набора крови на биохимическое исследование по назначению неонатолога в стандартных условиях: между 800 и 900 часами в процедурном кабинете при температуре окружающей среды 23-240С одной процедурной медицинской сестрой. Кровь самотеком набирали в пробирку со стабилизатором (5% цитрат натрия). Пробирка помещалась в сумку-холодильник и транспортировалась в течение 1 часа после забора в лабораторию. Для каждого из 20 новорожденных было построено 2 типа эритрограмм (кислотная и осмотическая), которые являются результатом обобщения основных параметров эритрограмм, полученных в 4-х и более параллельных исследованиях. В общей сложности было проведено более 160 исследований эритроцитов крови. С помощью методов автоматической регистрации осмотических и кислотных эритрограмм определен вклад как отдельных факторов (анемии, ХВГП, обвития пуповиной), так и сочетания факторов в накопление структурно-функциональных изменений в мембранах эритроцитов.

Методы статистического анализа. Статистическая обработка полученных результатов проводилась на персональном компьютере с помощью пакета универсальных программ «Excel» и «Statistica v.6» с использованием общепринятых параметрических и непараметрических методов. Обработка вариационных рядов включала подсчет значений средних арифметических величин (М), стандартной ошибки (m), стандартного отклонения (). Частота признаков представлена c указанием стандартной ошибки для качественных признаков, стандартного отклонения для количественных признаков. Для сравнения средних величин количественных переменных  использовали t-критерий Стьюдента. Качественные показатели сравнивали по критериям Хи-квадрат и Манна-Уитни. Достоверными считались различия между группами при вероятности ошибки менее 5% (р<0,05), Гланц С., 1998 г. Для выявления взаимосвязей между изучаемыми показателями применяли метод корреляционного анализа, включающий как оценку коэффициента корреляции Спирмена (r), так и уровень его значимости (p). Определение факторов риска развития фето-материнской трансфузии проводилось с помощью многомерного регрессионного анализа с 95% доверительным интервалом.

Каждая эритрограмма рассчитывалась, как средняя из 4 повторных исследований для каждого обследуемого ребенка.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

На первом этапе исследования нами был проведен сравнительный анализ трех групп родильниц, обследуемых на содержание в периферической крови эритроцитов с НbF. Дети, рожденные от матерей I и II групп, имели анемию на первые сутки жизни (у всех детей, рожденных от резус-отрицательных матерей, имела место отрицательная проба Кумбса, что свидетельствовало об отсутствии иммунного гемолиза.). I группу составили 70 женщин, у которых в первые 6 суток после родов уровень фетальных эритроцитов в периферической крови составил 0 – 3 ‰ (в среднем 1,4±0,3‰). Во II группе было 36 родильниц, у которых в первые 6 суток после родов в периферической крови определялось 4 ‰ и более фетальных эритроцитов (в среднем 4,7±1,7 ‰). В контрольной группе было 38 родильниц, дети которых не имели анемии в раннем неонатальном периоде (Hb при рождении от 151 до 220 г/л (в среднем 182,3±20,8 г/л), содержание эритроцитов 4,8±0,4х1012/л). В периферической крови этих женщин были выявлены эритроциты, содержащие фетальный гемоглобин от 0 до 3‰ (в среднем 0,7±0,2‰).

Выявлены статистически значимые различия между I и контрольной группами по следующим признакам: инфекции (герпес, краснуха, сифилис, гепатит «С» и др.), краевое прикрепление пуповины; между II и контрольной группами – по частоте встречаемости заболеваний пищеварительной системы, анемии 2-ой половины беременности, гестоза 2-oй половины беременности, инфекции (герпес, краснуха, сифилис, гепатит «С» и др.), краевого прикрепления пуповины, низко расположенной плаценты; между I и II группами – по частоте эрозии шейки матки, гестоза 2-oй половины беременности.

При сравнении групп новорожденных, чьи матери обследовались на содержание эритроцитов с НbF, отмечено достоверное различие между I и контрольной, а так же между II и контрольной группами по показателям красной крови у ребенка (уровню эритроцитов и гемоглобина). По остальным показателям, таким как пол новорожденного, масса и длина тела при рождении, оценка по шкале Апгар на 1 и 5 мин, протекание раннего неонатального периода группы были сопоставимы (отличия не были статистически значимыми).

Мы провели корреляционный анализ между показателем гемоглобина у новорожденных при рождении и осложнениями течения беременности и родов у женщин. Оказалось, что в первой группе анемия у ребенка коррелировала с плевистым прикреплением пуповины (r = + 0,30), с кесаревым сечением (r = + 0,29) и варикозной болезнью у матери (r =+0,28) (p<0,05). Во второй группе обнаружена статистически значимая ((p<0,05) корреляционная связь между показателями гемоглобина у ребенка и наличием бесплодия в анамнезе (r = + 0,35), с эрозией шейки матки (r = -0,24), ХВГП (r =-0,36), варикозной болезнью (r = +0,25).

Сильная корреляционная связь (p<0,001) между содержанием фетальных эритроцитов в крови матери и гемоглобином у ребенка обнаружена только во второй группе при втором и третьем исследовании гемоглобина (r = + 0,41 и r= +0,61), что свидетельствуeт в пользу постгеморрагической анемии у ребенка в результате фето-материнской трансфузии.

В контрольной и в первой группах корреляционной зависимости между гемоглобином ребенка при рождении и содержанием фетальных эритроцитов в крови матери не было выявлено (r = - 0,18 и - 0,12 соответственно).

Таким образом, содержание в крови матери более 4‰ фетальных эритроцитов может свидетельствовать о фето-материнской трансфузии и возможном развитии у ребенка острой постгеморрагической анемии.

Таблица 1

Корреляционная связь количества фетальных эритроцитов в крови родильниц группы II и исследуемых показателей по Кенделю.

Исследуемые показатели

Коэффициент корреляции

Первобеременные

0,28*

Повторно беременые, но первородящие

-0,31*

Бесплодие

0,26*

Эрозия ш/м

0,22*

Кандидоз

-0,22*

Угроза 1-ой половины беременности

-0,28*

Низкий Нв 2-ой половины беременности

-0,27*

*-достоверно значимые факторы (p<0,05)

Далее нами был проведен сравнительный анализ зависимостей сочетанного действия изучаемых факторов на содержание фетальных эритроцитов в крови беременной женщины с установлением приоритета каждого из них. Изучаемые факторы были разбиты на группы при отсутствии выраженности автокорреляции исследуемых параметров в группах.

В результате комплексного изучения влияния 69 факторов на изменение количества фетальных эритроцитов в крови родильниц установлено, что наибольшим влиянием обладает группа факторов осложненного течения беременности и ее вклад составляет 23 %. Выявлено, что количество эритроцитов, содержащих фетальный гемоглобин находится в прямой зависимости от таких факторов, как гестоз 1-ой и 2-ой половины беременности (р =0,002 и 0,003 соответственно) и в обратной зависимости - низкого уровня гемоглобина во второй половине беременности (р =0,03), ХВГП (р =0,01) и угрозы выкидыша в 1-ой половине беременности (р =0,04). Результаты проведенных исследований совпадают с данными Скосыревой Г.А. и Васильева А.Т. (1975 год), которые в своих исследованиях установили, что при клинических признаках угрожающего выкидыша и преждевременных родов количество фетального гемоглобина ниже, чем при не осложненном течении беременности, в то время как при специфических дерматозах, анемиях, токсикозах количество фетального гемоглобина выше, чем при не осложненной беременности.

На втором месте по влиянию на содержание фетальных эритроцитов в крови женщины была группа факторов гинекологического анамнеза матери, из которых самым значимым заболеванием была эрозия шейки матки. В совокупности факторов гинекологические заболевания дают более 11 % вклада.

Группа факторов патологии плаценты и пуповины дает совокупный вклад 6,6 %, однако ни один фактор по отдельности не был статистически значимым. Остальные группы факторов имели низкий суммарный вклад (от 3% до 1 %).

Рис. 3 Факторы риска развития фето-материнской трансфузии

Анализ результатов, полученных при проведении первой части исследований, посвященных изучению фето-материнской трансфузии, как фактора риска развития постгеморрагической анемии новорожденного, позволил сделать заключение, что диагностически значимым критерием фето-материнской трансфузии для возникновения постгеморрагической анемии у новорожденного является уровень содержания фетальных эритроцитов в материнской крови, составляющий 4 ‰ и более. К факторам риска повышения содержания фетальных эритроцитов в крови женщины отнесены: эрозия шейки матки, гестоз 1-ой и 2-ой половины беременности, анемия 2-ой половины беременности.

На втором этапе нашего исследования для изучения осмотической и кислотной резистентности эритроцитов периферической крови нами было проведено изучение эритрограмм у новорожденных трех групп.

I группа – дети с анемией, сочетанной с конъюгационной гипербилирубинемией и постгипоксическим состоянием;

II группа – дети с коньюгационной гипербилирубинемией и различными последствиями гипоксии (церебральная ишемия и постгипоксическое состояние);

III группа – дети только с последствиями перенесенной гипоксии (церебральная ишемия и постгипоксическое состояние).

Исследуемые группы новорожденных были вполне сопоставимы, как по антропометрическим данным, так и степени перенесенной гипоксии в родах, учитывая оценку по шкале Апгар на 1 -й и 5-й минутах. У всех детей, рожденных от резус-отрицательных матерей, имела место отрицательная проба Кумбса, что свидетельствовало об отсутствии иммунного гемолиза.

Анализ течения беременности у матерей обследованных новорожденных показал, что настоящая беременность протекала с осложнениями у женщин всех трех групп. Наиболее частыми осложнениями были: гестоз и анемия 2-ой половины беременности, инфекционные заболевания (ОРВИ, пиелонефрит), ХФПН, ХВГП. В I группе чаще относительно других групп встречалась анемия 2-й половины беременности, во II группе – угроза прерывания беременности, а в III – обвитие плода пуповиной.

Таблица 2

Показатели кислотного и гипоосмотического гемолиза эритроцитов новорожденных трех групп (M ± m)

Показатели кислотного и гипоосмотического гемолиза

I группа

(n = 40)

II группа

(n = 72)

III группа

(n = 48)

Gmax,%

76,6 ± 4,6

84,8 ± 3,0

81,2 ± 7,1

Kmax, отн. ед.

0,5 ± 0,1*

0,9 ± 0,1*

0,8 ± 0,1*

t lat, с

131,8 ± 40,6

188,1 ± 31,8

181,2 ± 31,2

G120,%

4,0 ± 0,6

6,2 ± 3,4

1,7 ± 0,3

n- количество исследований, * (р I- II < 0,05; р I- III = 0,06).

При анализе эритрограмм были выявлены статистически значимые различия трех групп по средним величинам основного параметра кислотной эритрограммы – Kmax, характеризующего гемолитическую активность среднестойких эритроцитов, доля которых в циркулирующей крови достигает 90%. Однако, анализ средних величин, отражающих максимальную долю гемолиза эритроцитов, дает представление об общих тенденциях и не показывает особенностей осмотической резистентности эритроцитов у отдельных новорожденных, в связи с чем были рассмотрены отдельно случаи в сочетании с клиническими данными.

Pages:     | 1 || 3 | 4 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»