WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 || 3 | 4 |

Группа пациентов с обострением БА была выделена для подтверждения роли инфекционного фактора в генезе обострения БА, период обследования и наблюдения соответствовал периоду госпитализации.

Методы исследования

1) Клинико-лабораторные исследования: клинический анализ крови; общий анализ мокроты при её наличии, посев мокроты на микрофлору и определение антибиотикограммы (в условиях стационара), исследование функции внешнего дыхания (спирография, индивидуальная пикфлоуметрия), флюорография или рентгенография органов грудной клетки по показаниям.

2) Аллергологическое обследование: сбор аллергологического анамнеза, постановка кожных проб с неинфекционными аллергенами (при отсутствии данных в амбулаторной карте), определение уровней общего и специфических IgE. При проведении кожного тестирования использовались неинфекционные аллергены НИИВС г. Ставрополя. Оценку результатов кожных проб осуществляли в соответствии с методическими рекомендациями Минздрава СССР №10-11/20 от 10.03.85 г. Определение уровня общего IgE и IgE-специфических антител к бытовым, пыльцевым аллергенам и аллергенам некоторых грибковых и условно-патогенных микроорганизмов проводили с помощью непрямого твёрдофазного метода иммуноферментного анализа (ИФА), разработанного в лаборатории аллергодиагностики ГУ НИИВС им. И.И. Мечникова РАМН.

3) Вирусологическое обследование, обследование на предмет инфицирования Mycoplasma pneumoniae, Chlamydophila pneumoniae (n=19). Принцип обследования больных был единым, как можно более быстрое тестирование в первые 2 суток с момента поступления в стационар, проведение исследований в динамике с интервалом 2-3 недели.

Проводились исследования по выявлению РНК и ДНК вирусов; противовирусных антител; антигенов микоплазм и антител к Mycoplasma pn.; антител классов IgG, IgA и IgM к Chlamydophila pn.

Основными субстратами для выявления РНК и ДНК вирусов служили эпителиальные клетки, полученные путём мазков со слизистой носа и глотки. Полученный материал доставляли в лабораторию генной терапии вирусных инфекций ГУ НИИВС им. И.И. Мечникова РАМН для дальнейшего исследования методом ПЦР на наличие вирусов гриппа А (H3N2), респираторно-синцитиальных вирусов (РС-вирусов), риновирусов, вирусов парагриппа 2 и 3 типа, аденовирусов.

В НИИ гриппа РАМН ( г. С-Петербург ) исследовали уровни IgG к вирусам гриппа А ( Н1N1, H3N2 ) и В, аденовирусу, РС-вирусу, вирусам парагриппа 1 и 3 типа и IgM к РС-вирусу в парных сыворотках методом ИФА с помощью тест-систем ООО «Предприятия по производству диагностических препаратов» (г. С-Петербург).

В ГУ НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи РАМН определяли специфические к Chlamydophila pneumoniae антитела IgG, IgA и IgM классов. С этой целью использовали тест непрямой микроиммунофлюоресценции (MИФ).

Там же определяли антигены микоплазм в сыворотке крови с использованием реакции агрегатгемагглютинации (РАГА) и уровень антител к Mycoplasma pneumoniae в парных сыворотках с помощью реакции пассивной гемагглютинации (РПГА).

4) Иммунологическое обследование.

В лаборатории индукторов интерферонов ГУ НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи РАМН определяли показатели ИФН статуса. Для исследования использовали цельную гепаринизированную кровь больных. Определение проводили микрометодом по методике С.С. Григорян и соавт.

Определяли следующие параметры ИФН статуса:

  • циркулирующий (сывороточный) ИФН в крови;
  • уровень продукции ИФН- лейкоцитами при стимуляции их вирусом болезни Ньюкасла (ВБН), штамм Канзас, с известным режимом и последующей инактивацией вируса-индуктора in vitro;
  • уровень продукции ИФН- лейкоцитами при индукции их митогеном – фитогемагглютинином ( ФГА Р, «Difco» ) в дозе 10 мкг/мл in vitro.
  • уровень продукции спонтанного ИФН in vitro.

За показатели ИФН- в норме принимались значения 640-1280 Ед/мл, ИФН- – 128-256 Ед/мл, сывороточного ИФН < 2-8 Ед/мл, спонтанно продуцируемого ИФН < 2 Ед/мл. При дефиците интерфероногенеза 1, 2, 3, 4 степени продукция -ИФН лейкоцитами соответственно составляла 320, 160-80, 40 и менее 40 Ед/мл, продукция -ИФН лейкоцитами – 64, 32-16, 8, 4 и менее Ед/мл.

Чувствительность к ИФН-индуцирующему воздействию циклоферона оценивалась по способности препарата индуцировать ИФН, титры которого превышают титр продуцируемого -ИФН в два и более раза.

В той же лаборатории определяли уровни сывороточных ИФН- и IL-4 методом ИФА с помощью тест-систем «ProCon IFN-» и «ProCon IL-4» ООО «Протеиновый контур», г. С-Петербург. Исследование проводили согласно инструкциям.

5) Математическая обработка результатов исследования.

При обработке данных использовали общепринятые методы вариационной статистики, определяя среднюю величину, стандартную ошибку средней. Достоверность различия средних величин определяли с помощью t-критерия Стъюдента. Оценку различия средних величин иммунологических показателей проводили с помощью непараметрических критериев: Вилкоксона – для зависимых выборок и Манна-Уитни – для независимых выборок. Различия считались достоверными, если уровень значимости не превышал 5% ( р < 0,05 ). Статистическую обработку осуществляли, используя компьютерную программу «Statistica 6.0».

Характеристика исследуемых препаратов.

Препараты разрешены к применению в практике отечественного здравоохранения и имеют регистрационные удостоверения:

  1. терапевтическая поликомпонентная вакцина Иммуновак-ВП-4 из антигенов условно-патогенных микроорганизмов, РУ № 93/270/20 от 17.11.93.;
  2. низкомолекулярный синтетический индуктор интерферона циклоферон, Р№ 001049/03-2002.

1)Поликомпонентная вакцина Иммуновак ВП-4 разработана в НИИВС им. И.И. Мечникова РАМН. Она является оригинальным препаратом, состоящим из комплексов антигенов, извлечённых из специально селекционированных штаммов Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae, Proteus vulgaris, Escherichia coli, обладающих высокой иммуногенной активностью, слабыми сенсибилизирующими свойствами и широкой перекрёстной протективной активностью антигенов. В препарате содержатся ассоциированные с белком липополисахариды, выделенные из Klebsiella pneumoniae, Proteus vulgaris и E. coli; протеогликан Klebsiella pn., а также тейхоевые кислоты и полисахаридные антигены Staphylococcus aureus. Вакцина является активным стимулятором иммунитета в отношении ряда этиологически значимых условно-патогенных микроорганизмов и обладает иммуномодулирующими свойствами, повышая неспецифическую реактивность организма. Мы вводили Иммуновак ВП-4 комбинированным назально-подкожным способом. Этот метод включал 3 интраназальных и 5-6 подкожных введений препарата. При интраназальном введении препарат вводили 3 дня подряд с увеличением дозы от 1-ой до 4-х капель. Через 3-5 суток переходили к подкожному введению в дозах от 0,05 до 0,2 мл., соблюдая интервал между инъекциями 3-5 суток.

2)Циклоферон. Этот препарат является N-метилглюкаминовой солью акридонуксусной кислоты. Это низкомолекулярный индуктор интерферона. Основными клетками-продуцентами интерферона после введения циклоферона являются макрофаги, Т- и В-лимфоциты. Циклоферон эффективен в отношении вирусов клещевого энцефалита, гриппа, гепатита, герпеса, цитомегаловируса, вируса папилломы и других вирусов. Циклоферон 0,15 г. применяли перорально по 0,3 г/сут на 1, 2, 4, 6, 8, 11, 14, 17, 20, 23 дни. Курсовая доза 3,0 г.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Результаты иммунологического обследования.

Нам представлялось целесообразным исследование системы ИФН у больных БА ввиду характерных для них высокого уровня заболеваемости острыми респираторными инфекциями и возникновения обострений астмы на этом фоне.

Группа больных с обострением БА влючала 7 мужчин и 12 женщин в возрасте от 17 до 66 лет с лёгким и среднетяжелым течением атопической формы БА. Больные поступили на стационарное лечение в связи с тяжелым (8 человек) и среднетяжелым обострением заболевания (11 человек) на фоне острой респираторной инфекции.

Общее количество больных БА в фазе ремиссии заболевания составило 67 человек: с лёгким течением БА - 23 чел. (12 женщин и 11 мужчин), со среднетяжелым течением БА – 33 чел. (24 женщины и 9 мужчин) и с тяжелым течением БА –11человек (10 женщин и 1 мужчина).

Представленные группы больных в фазе ремиссии достоверно отличались между собой по количеству дневных и ночных приступов удушья в неделю, по ОФВ1, по объёму базисной терапии и по критериям ВОЗ они соответствовали больным с лёгким, среднетяжелым и тяжелым персистирующим течением БА. У пациентов в фазе обострения отмечено учащение приступов удушья до несколких раз в день и достоверное снижение ОФВ1 по сравнению с больными в фазе ремиссии.

Мы провели оценку ряда иммунологических показателей в зависимости от тяжести течения и фазы БА ( табл. 2).

В фазе ремиссии в группах больных с разной тяжестью течения заболевания отмечен только достоверно более высокий уровень общего IgE в группе больных с лёгким течением БА по сравнению с группой больных с тяжелым течением БА и достоверно более частое наличие спонтанного ИФН у больных с тяжелым персистирующим течением БА по сравнению с группой больных со среднетяжелым течением заболевания.

При обострении БА выявлено достоверное повышение уровня лейкоцитов по сравнению с пациентами в фазе ремиссии заболевания, достоверное снижение уровня лимфоцитов по сравнению с пациентами с лёгким и среднетяжелым течением БА вне обострения, достоверно более низкий уровень сывороточного ИФН по сравнению с пациентами с тяжелым персистирующим течением БА, достоверно более высокий уровень общего IgE по сравнению с больными со среднетяжелым и тяжелым течением заболевания вне обострения, достоверно более частая встречаемость повышенного уровня общего IgE по сравнению с больными вне обострения.

Во всех группах больных, независимо от степени тяжести и фазы заболевания, отмечена выраженная недостаточность ИФН-продуцирующей способности лейкоцитов. Практически у всех пациентов со стойкой и нестойкой ремиссией БА и у всех пациентов с обострением БА на фоне острой респираторной инфекции выявлены недостаточность II степени -ИФН-продуцирующей способности лейкоцитов и дефицит II-III степени по продукции -ИФН лейкоцитами. Продукция -ИФН лейкоцитами была снижена в среднем в 5-6 раз от нижней границы нормы, продукция -ИФН – в 6-12 раз, причём, показатели продукции интерферонов лейкоцитами достоверно не отличались в группах (рис. 1 и рис. 2). Отмечена тенденция к более низкой продукции - и -ИФН лейкоцитами больных в фазе обострения заболевания по сравнению с больными вне обострения.

Несмотря на переносимую респираторную инфекцию, у пациентов в фазе обострения БА не отмечено повышения уровня сывороточного ИФН (за исключением одного пациента с тяжелым обострением БА). В результате не обеспечивается необходимый уровень противовирусной защиты клеток. При БА вне обострения выявлено повышение уровня сывороточного ИФН у 23 больных и наличие спонтанного ИФН 2 Ед/мл у 19 больных, причём достоверно более частое в группе больных с тяжелым персистирующим течением БА, что может косвенно свидетельствовать о наличии вирусного/ бактериального инфицирования этих больных. Возможно, речь может идти о наличии персистирующей вирусной инфекции.

Отмечено, что уровни сывороточных ИФН- и IL-4 достоверно не отличались в группах в зависимости от тяжести течения и от фазы БА.

1-норма, 2-лёгкое течение БА, ремиссия, 3-среднетяжелое течение БА, ремиссия, 4- тяжелое течение БА, ремиссия, 5- обострение БА

Рисунок 1. Продукция -ИФН лейкоцитами в норме и при БА.

1-норма, 2-лёгкое течение БА, ремиссия, 3-среднетяжелое течение БА, ремиссия, 4- тяжелое течение БА, ремиссия, 5- обострение БА

Рисунок 2. Продукция -ИФН лейкоцитами в норме и при БА.

Таблица № 2.

Иммунологическая характеристика групп.

Группа

больных

Лейко-циты,

х 10(9)/л, М±m

Эози-

нофилы

(%),

М±m

Лимфо-

циты

(%),

М±m

Моно-

циты

(%),

М±m

Сывор

ИФН,

Ед/мл,

М±m

Продукция

-ИФН

лейкоцитами,

Ед/мл,

М±m

Продукция

-ИФН

лейкоцитами,

Ед/мл,

М±m

Сывор.

-ИФН,

пкг/мл,

М±m

IL-4,

пкг/мл,

М±m

Общий

IgE,

кЕ/л,

М±m

БА, лёгкое

течение, ремиссия, n=23 (1)

5,93±

0,42

2,4±

0,67

35,1±

4,8

6,6±

0,94

8,86±

1,42

126,08±

21,3

14,34±

1,58

143,4±

59

135±

60,5

572,7±

153

БА, среднетяжелое

течение, ремиссия, n=33 (2)

6,1±0,35

3,0±

0,58

35,0±

1,78

4,9±

0,66

9,27±

1,57

143,9±

24,2

11,36±

2,14

62,36±

9,5

43,8±

20,2

468,3±

130

БА, тяжелое

персистирующее

течение

n=11 (3)

7,1±0,81

4,25±

2,1

32,37±

3,57

5,7±

1,53

12,54±

2,58

186,36±

53,67

Pages:     | 1 || 3 | 4 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»