WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 |   ...   | 2 | 3 || 5 |

0,52±0,015*

44,5±1,8*

0,15±0,001*

0,33±0,005*

42,0±1,3

Дексаметазон

10-7М

0,20±0,008

0,43±0,020

46,6±1,1*

0,12±0,004

0,26±0,010

44,2±1,1

10-5М

0,21±0,009

0,45±0,017*

45,7±1,0*

0,13±0,007

0,29±0,007*

43,5±1,0

10-3М

0,22±0,010*

0,49±0,015*

44,9±0,9*

0,14±0,005*

0,31±0,009*

43,1±2,1

Примечание: В таблице приведены средние данные из результатов 6-8 опытов; * - различия групп статистически значимы по сравнению с контролем (псориазом) (р < 0,05)

Оценка влияния гестагенов на -глюкозидазу показала, что в действии прогестерона имеется тенденция к повышению свободной и общей активности фермента, однако это действие не было статистически значимым. АБМП, более выраженно, чем прогестерон, повышал долю свободной активности фермента на 16%, начиная с концентрации 10–5М. Более выраженное повышение активности фермента (на 40%) при действии соединения наблюдалось в фибробластах кожи мужчин (Табл.3.).

Таким образом, псориаз в острой стадии характеризуется резким снижением свободной и общей активности лизосомальных ферментов в фибробластах кожи и выходом их из мембран лизосом. Все исследуемые гормоны концентрация-зависимо повышают активность обоих ферментов в фибробластах псориатической кожи, приближая значения к значениям нормы. Гестагены, наряду с глюкокортикоидами обладали выраженным мембраностабилизирующим действием, в большей степени действуя на катепсин Д, чем на -глюкозидазу.

Содержание ТБК-активных соединений в фибробластах кожи человека при псориазе

На следующем этапе оценивалось содержание ТБК-активных соединений в фибробластах кожи мужчин и женщин при псориазе. Результаты экспериментов показали, что значения исследуемого параметра превышали таковые в фибробластах интактной кожи на 60%. Далее, оценивалось влияние исследуемых гормональных соединений на содержание ТБК-активных продуктов, в зависимости от пола и концентрации гормона (Рис.1.).

Как видно из рисунков, глюкокортикоиды (гидрокортизон, дексаметазон) статистически значимо снижали содержание ТБК-активных соединений на 20-25%, начиная с концентрации 10-5М. По мере увеличения концентрации, увеличивалось и действие гормонов на клетки. В максимальной исследуемой концентрации (10-3М), гормоны статистически значимо снижали исследуемый параметр на 30-35% по сравнению с контролем (псориазом), приближая значения параметра к значениям нормы.

Прогестерон, наряду с глюкокортикоидами, статистически значимо на 10-13% снижал содержание ТБК-активных соединений, начиная с концентрации 10-5М в фибробластах кожи как мужчин, так и женщин. АБМП действовал на исследуемый параметр более выражено, чем глюкокортикоиды и прогестерон, снижая его содержание в той же концентрации на 17-20%, а в концентрации 10-3М – на 32-34% (Рис.1.). Соединение действовало в равной степени на содержание ТБК-активных

соединений в фибробластах кожи мужчин и женщин.

Рис. 1. Влияние стероидов на содержание ТБК-активных соединений в фибробластах кожи при псориазе (1 час инкубации) (М±m; нмоль/мг белка)

Примечание: В таблице приведены средние данные из результатов 6-8 опытов;

- различия групп статистически значимы по сравнению с контролем (р < 0,05)

Таким образом, псориаз в острой стадии характеризуется повышением окислительных процессов в фибробластах кожи в 1,5-2 раза по сравнению с нормой. Все исследуемые гормоны концентрация-зависимо снижали интенсивность процессов ПОЛ (содержание ТБК-активных соединений) в фибробластах псориатической кожи. Наибольшую антиокислительную активность, независимо от пола, проявляли глюкокортикоиды и АБМП в концентрации 10-3М, снижая содержание ТБК-активных соединений в клетках и приближая значения параметра к норме.

Параметры редокс-системы глутатиона в фибробластах кожи человека при псориазе

Оценка влияния исследуемых стероидов на компоненты редокс-системы глутатиона в фибробластах кожи человека при псориазе без воздействия и при воздействии на них гормональных соединений дала следующие результаты. При сравнении полученных данных с данными ранее проведенных исследований на фибробластах интактной кожи было выяснено, что значения отдельных компонентов редокс-системы глутатиона в фибробластах при псориазе в 2,5 раза ниже, чем таковые в норме. Полученные результаты согласуются и дополняют результаты, полученные ранее на нашей кафедре [Ухина Т.В., 2004].

Начиная с концентрации 10-7М, глюкокортикоиды (гидрокортизон, дексаметазон) оказывали выраженное действие на параметры редокс-системы глутатиона, статистически значимо повышая содержание GSH и активность ферментов его метаболизма (GSH-red и GSH-per) в фибробластах кожи. Сходное с глюкокортикоидами действие оказывал прогестерон. В отличие от прогестерона, АБМП более выражено повышал уровень GSH в фибробластах кожи в концентрации 10–5М. При этом, однако, исследуемые параметры повышались в 1,5 раза сильнее, чем при действии прогестерона, приближая значения к значениям нормы. В максимальной концентрации (10-3М) действие гормонов на исследуемые параметры было еще более выраженным.

Таким образом, псориаз в острой стадии характеризуется снижением параметров редокс-системы глутатиона (содержания GSH и активности ферментов GSH-red и GSH-per) в 2,5 раза. Все исследуемые гормоны концентрация-зависимо повышали значения исследуемых параметров, приближая их к значениям нормы. АБМП, наряду с глюкокортикоидами и в большей степени, чем прогестерон, обладал выраженным антиокислительным действием. Вероятно, гормоны могут регулировать антиперекисную защиту организма за счет их влияния на редокс-систему глутатиона.

Метаболическая активность фибробластов кожи человека при псориазе

Конечным этапом нашей работы явилось исследование метаболической активности фибробластов патологически измененной кожи при псориазе.

В результате исследования сохранялись основные тенденции касательно действия глюкокортикоидов и гестагенов на клетки. По истечении 5 суток инкубации стероидов с клетками, гидрокортизон и, в большей степени, дексаметазон в концентрациях 10-7 и 10-6М вызывали подавление их метаболической активности на 30-40%, а в концентрации 10-5М - на 50%. Действие прогестерона являлось менее выраженным. АБМП в концентрациях 10-7 и 10-6М подавлял метаболическую активность клеток приблизительно на 25-35%, а в концентрации 10-5М, подобно глюкокортикоидам, оказывал максимальное действие, выражающееся в подавлении метаболической активности клеток на 55%) (Рис.2.).

Рис.2. Влияние стероидных соединений на метаболическую активность (жизнеспособность) фибробластов кожи мужчин при псориазе (5 суток инкубации)

Примечание: - достоверное отличие от контроля при р<0,05. Контроль – жизнеспособность клеток в отсутствии соединений (100±10%)

Анализ данных, представленных на Рис.2., позволил определить ряды по эффективности подавления стероидами метаболической активности фибробластов кожи человека при псориазе (Табл.4.).

Табл. 4. Ряды по эффективности подавления гормонами метаболической активности фибробластов кожи мужчин при псориазе

Срок инкубации

Концентрация

5 суток

10-7М

ГКДМПГАБМП

10-6М

ДМ ГК>ПГАБМП

10-5М

ДМ>АБМПГКПГ

Примечание: ПГ – прогестерон, ГК – гидрокортизон, ДМ – дексаметазон, > – достоверное отличие между соединениями (р<0,001), – недостоверное отличие.

Из таблицы видно, что через 5 суток инкубации клеток со стероидами, гестаген АБМП в концентрации 10-5М, наряду с глюкокортикидами, оказывает выраженное антиметаболическое действие. Возможно, подавление метаболической активности клеток также косвенно указывает на антипролиферативное действие соединения.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Суммируя полученные результаты и учитывая данные литературы, можно заключить, что фибробласты кожи являются весьма перспективным объектом для изучения биохимических и молекулярных аспектов патогенеза псориаза и для поиска новых лекарственных средств, способных уменьшить проявление этого заболевания. В ходе работы нами было установлено, что лизосомальный аппарат фибробластов, интенсивность перекисного окисления липидов и параметры редокс-системы глутатиона в этих клетках подвержены регулирующему влиянию стероидных гормонов. Это воздействие зависит от их концентрации и заключается в снижении активности лизосомальных ферментов, повышении прочности их связывания с мембранами лизосом, а также в снижении интенсивности процессов перекисного окисления липидов и повышении антиокислительной защиты.

Нами впервые было установлено изменение исследуемых биохимических параметров в фибробластах при псориазе и возможность их коррекции с помощью стероидных соединений. При этом эффективность действия гестагенов не уступает глюкокортикоидам.

При анализе результатов исследования, проведенных на фибробластах кожи мужчин и женщин разных возрастов (условно здоровых и больных псориазом), мы выявили, что в патогенезе этого заболевания происходит снижение свободной и общей активности лизосомальных ферментов (в большей степени катепсина Д и в меньшей – -глюкозидазы) на фоне увеличения их высвобождения из мембран лизосом, повышение интенсивности процессов перекисного окисления липидов и снижение антиокислительной системы защиты (параметров редокс-системы глутатиона). Результаты экспериментов на фибробластах интактной кожи человека подтверждают таковые, проведенные на фибробластах интактной кожи крыс.

Кроме того, были установлены корреляционные связи между параметрами оксидантно-антикосидантной системы (содержанием ТБК-активных соединений (rs=0,875, p>0,05), параметров редокс-систем глутатиона (rs=-0,964, p>0,05)) и изменениями активности лизосомальных ферментов. При этом статистически значимых отличий между значениями этих параметров в фибробластах мужчин и женщин выявлено не было.

Анализ действия исследуемых гормонов на клетки показал, что влияние глюкокортикоидов и гестагенов имеет противоположную направленность изменениям, происходящим в фибробластах при псориазе: снижение высвобождения лизосомальных ферментов катепсина Д и -глюкозидазы из мембран лизосом, снижение интенсивности процессов перекисного окисления липидов и повышение антиокислительной системы защиты (параметров редокс-системы глутатиона). Этот факт подтверждает наше предположение о том, что гестагены обладают противовоспалительной активностью и могут быть рекомендованы к соответствующим испытаниям для последующего использования их в качестве компонентов комплексной терапии псориаза

ВЫВОДЫ

1. В фибробластах интактной кожи человека и крыс глюкокортикоиды (гидрокортизон, дексаметазон) и прогестерон, начиная с концентрации 10-7М, оказывают выраженное мембраностабилизирующее действие на лизосомы клеток. Действие АБМП зависит как от времени инкубации с клетками, так и от вида фермента, в отличие от исследуемых гормонов в концентрации 10-5М повышая свободную и общую активность -глюкозидазы.

2. Все исследуемые стероидные соединения (гидрокортизон, дексаметазон, АБМП, прогестерон) снижают интенсивность процессов перекисного окисления липидов в фибробластах интактной кожи человека и крыс. Наибольшее антиокислительное действие оказывают гестагены, в концентрации 10-3М снижая содержание ТБК-активных соединений в клетках в 2 раза по сравнению с нормой.

3. Все исследуемые стероидные соединения (гидрокортизон, дексаметазон, АБМП, прогестерон) обладают выраженным антиокислительным действием, повышая параметры редокс-системы глутатиона (содержание восстановленного глутатиона, активность глутатионредуктазы и глутатионпероксидазы) в интактных фибробластах кожи, начиная с концентрации 10-5М. АБМП, наряду с глюкокортикоидами и в 2-3 раза более выражено, чем прогестерон повышает содержание GSH.

4. Метаболическая активность фибробластов концентрация-зависимо снижается под действием всех исследуемых стероидных соединений. Глюкокортикоиды подавляют её на 30-50% спустя 2 суток инкубации с клетками, а гестагены более выражено проявляют своё действие в концентрации 10-5М только спустя 5 суток инкубации. При этом АБМП оказывает максимальное антиметаболическое действие, подавляя жизнеспособность клеток на 38%.

Pages:     | 1 |   ...   | 2 | 3 || 5 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»