WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 |   ...   | 6 | 7 || 9 |

В связи с этим нами былаиспытана возможность стимулированияранней фазы репаративного процесса за счётаппликаций с экстрактом хрящевой и костнойтканей 14-дневного куриного эмбриона, атакже с пептидным биорегуляторомхондролюксом. Хондроциты и остеобласты наданном периоде развития эмбрионахарактеризуются высокой степеньюинтенсивности пролиферативного процесса,поскольку идёт рост массы костногоскелета. Кроме того, в специальныхэкспериментах в условиях invitro исследовали ряд важныхсвойств этого экстракта. Прежде всего, насинтересовали хемоаттрактивные свойстваэкстракта хрящевой и костной тканейэмбриона. Хемотаксический индекс этогоэкстракта в агарозе практически равнялсяхемотаксическому индексу классическогохемоаттрактанта С5а (индекс С5а составил2,22±0,05, индекс экстракта эмбриональныххрящевой и костной тканей 2,86±0,05).

Таким образом,аппликации экстрактов эмбриональныххрящевой и костной тканей на раневуюповерхность значительно стимулировалираннюю фазу репаративного процесса устарых животных за счёт значительноиндуцированной миграции клеток ипоследующей секреции ими биологическиактивных субстанций. Об этомсвидетельствуют данные о более раннемпоявлении грануляционной ткани по краямраны. Морфологически это подтверждаетсяконстатацией выраженной инфильтрациилейкоцитами в области поврежденной кожнойповерхности. В итоге, экстрактыэмбриональных хрящевой и костной тканей,применяемые в виде аппликаций, не толькоускоряли раннюю стадию репарации, но иоказывали влияние на восстановительныепроцессы в матриксе.

Одной из актуальныхпроблем геронтологии является особенностьформирования и течения репарационногопроцесса в костной ткани. Это объясняется,в первую очередь, тем, что рисквозникновения костных дефектов пристарении организма чрезвычайно высок,особенно учитывая проблему остеопороза. Кэтому следует добавить трудности в лечениитравматических переломов в старческомвозрасте. Всё это, безусловно,характеризует важность изученияособенностей репарации костной ткани вгеронтологическом аспекте.

В нашем исследованиидля решения обозначенной выше проблемыбыли использованы две модели повреждениякостного скелета – дефект трубчатой кости и плоскойкости черепа старых животных.

Дефект трубчатой костивоспроизводили в виде сквозного тоннелячерез все слои бедренной кости кролика.Диаметр тоннеля составлял 2-3 мм. Стенкисозданного дефекта покрывали тонкойстальной плёнкой с целью предотвращениязакрытия его при длительном наблюдении.Как показало наблюдение за ходомзаполнения костного «вакуума» черезопределённые временные промежутки,репаративный процесс можноохарактеризовать несколькими стадиями.Начиная с 3-ей недели, в начале тоннеля состороны костного мозга отмечалось началообразования костной ткани, котораяпостепенно поднималась на поверхностьтоннеля и покрывала образовавшийсястолбик костного мозга. Процессформирования костного футляразаканчивался к 30-35 дню от началаэксперимента.

Данный процессостеогенеза в условиях тоннельногодефекта трубчатой кости обусловленвыработанным в процессе эволюциимеханизмом взаимодействия междукроветворными клетками-предшественникамии предшественниками костной ткани,остеобластами. Поэтому в настоящее времявполне обоснованно выделяется как единаяфункциональная система «костный мозг– костнаяткань». В нашем исследовании этот парадигмбыл подтверджден специальнымиэкспериментами с аутотрансплантациейкостного мозга в брыжейку кишечника,атипичное для кроветворения место [ПатентРФ № 227741]. Между листками брыжейкивводилось 0,2-0,3 мл пунктата костного мозгабедренной кости кролика. Через 5-7 днейпосле повторной лапаротомии на местеинъекции взвеси костного мозга отмечалисьнастоящие островки гемопоэза. При анализегистологических срезов констатировалирост миелоидного и эритроидного ростковкроветворения. В конце экспериментаучастки кроветворения покрывались костнымфутляром. Это происходило на 30-35 дни послеаутотрансплантации. Поскольку в видимомгемотрансплантате присутствовали клеткистромы костного мозга, то именно эти клеткиявились источником образованияостеобластов, которые и формироваликостный покров для растущего очагакостного мозга.

Эти данные указывают наважность взаимодействия предшественниковгемопоэтических клеток с элементамистромы, что важно учитывать при оценкерепарационного процесса в костной ткани. Устарых животных туннелирование трубчатойкости характеризовалось, прежде всего,резко замедленным процессом миграциифибробластов в просвет тоннеля - к 25-30суткам этот врастающий столбик достигалдлины одной трети всего пространства.Кроме того, растущие фибробласты былирасположены рыхло, образование очаговгемопоэза было весьма скудным. Костныйфутляр в эти сроки только начиналорганизовываться, так и не достигаявершины растущего столбикафибробластов.

Применение пептидногобиорегулятора хондролюкса путем еговведения в просвет тоннеля в началеэксперимента меняло характеррепарационного процесса. Так, на 10-12 днибыло отмечено значительно болееинтенсивное заполнение тоннелямигрирующими фибробластами. Образующийсястолбик фибробластов достигал половиныобразованного пустого пространства, а егоплотность примерно равнялась таковой вконтрольных экспериментах. При этомзначительно увеличилось количествообразующихся очагов кроветворения. Вновьобразующийся костный футляр по краямтоннеля также прогрессировал в своёмразвитии, достигая почти одной трети иболее от длины образованного тоннеля.Таким образом, введение хондролюксаспособствовало более выраженной миграциифибробластной основы вновь образующегосякостного мозга.

Особенностирепаративного процесса в костной ткани устарых животных изучалось также вэкспериментальной модели на примерезакрытия костного дефекта в плоских костяхчерепа кролика. Эта серия экспериментовбыла проведена с целью использованияэндохондрального типа образования костнойткани. Именно этот тип костеобразованияотмечен в ряде костных структур плоскойформы (например, ключицы). Сравнениединамики репарации костного дефекта вуказанных условиях у старых контрольных иподопытных животных с применением данногоспособа лечения и без какого-либовмешательства выявило у животныхконтрольной группы заметное удлинениесрока репарации. Так, закрытие дефекта безприменения пластики сингенным хрящем иаппликаций с пептидным биорегуляторомхондролюксом у старых животных занималоболее 28 дней, тогда как у молодых животныхэтот процесс обычно завершается к 21 дню.Морфологический анализ показал, чтозамедление репарации костного дефекта устарых животных связано с вялым характероммиграции клеток стромы в очагповреждения.

Морфологическийконтроль за динамикой костной репарациипозволил довольно четко определитьособенности этого процесса у старыхживотных. Особенно ярко эти качестваманифестируются в начальном периодепроцесса на сроке 7 суток. К этому временитрансплантируемая пластина аутохрящаслабо подвергается дефрагментации. Крометого, незначительное представительствофибробластов не обеспечивает выраженнойсинтетической активности упомянутыхклеток. Результатом этого являетсянепрочное соединение образованныхколлагеновых волокон с неповрежденнойстромой, то есть резко замедляется началообразования будущего губчатогоостова.

Применение методапластики сингенным хрящем и аппликаций спептидным биорегулятором хондролюксомпозволяет значительно ускорить процессрепарации костной ткани, что выражается вполном закрытии костного дефекта уживотных подопытной группы уже к 21дню.

В настоящемисследовании была предпринята попыткакоррекции замедленного процесса репарациив двух различных видах тканей: костнойткани и коже. Применение предложенных намивосстановительных процедур в экспериментепозволило достигнуть выраженной коррекциилокальных повреждений кожи и дефектовкостной ткани. Очевидно, что экстрактхрящевой и костной тканей 14-дневногокуриного эмбриона содержит в себе некакой-то один стимулирующий фактор, а в егосоставе присутствует целый комплексстимулирующих пептидов. Именно поэтомуприсутствие в экстракте эмбриональныхтканей смеси биологически активныхвеществ способствовало достижениюпозитивных результатов в коррекциинарушений сложной последовательностиорганизующегося репарационного процесса.

Это обстоятельствонашло свое подтверждение в эксперименте сприменением пептидного биорегуляторахондролюкса, разработанного на основеэкстракта из хрящевой и костной тканейтелят. Хондролюкс содержитнизкомолекулярные пептиды, обладающиетканеспецифическим действием на клеткихрящевой и костной тканей, выражающимся вповышении их пролиферативной активности иоптимизации обменных процессов в них[Рыжак Г.А., Коновалов С.С., 2004]. Ранее былопоказано, что хондролюкс способствуетповышению минеральной плотности костей укрыс в экспериментальной моделипостменопаузального остеопороза иускорению репарационных процессов вхрящевой ткани коленного сустава крыс вэкпериментальной моделипосттравматического остеоартроза[Поворознюк В.В. и соавт., 2008].

В нашем исследованииприменение пептидного биорегуляторахондролюкса в виде аппликаций на раневуюповерхность эксцизионной раны итермического ожога приводило к болеебыстрому и качественному течениюрепарационного процесса: сокращались повремени все этапы заживления раневойповерхности у старых животных, приближаяськ общеизвестным срокам, наблюдаемым умолодых животных. При этом наблюдаласьактивизация фибробластов, приводившая кболее раннему образованию коллагеновыхволокон de novo и неоангиогенезу, чтообусловливало формирование мягкогоэластичного рубца на месте повреждения ужена 21 сутки наблюдения, в то время как уконтрольных животных при заживлениираневой поверхзности естественным путемтребовалось не менее 28 суток наобразование грубого рубца. Важно отметить,что применение экстракта эмбриональныххрящевой и костной тканей такжеукорачивало сроки заживления раны, однакоприменение хондролюкса способствовалоформированию наиболее качественного ифизиологичного рубца.

Результатыпроведенного исследования объективносвидетельствуют о том, что препараты наоснове экстрактов из различных органов итканей являются активными регуляторамиорганогенеза, что дает основаниярекомендовать их изучение в качествелекарственных средств, предназначенныхдля оптимизации репарационных процессов вразличных тканях при старении.

ВЫВОДЫ

1. При старениизначительно снижаются количественные икачественные характеристикипролиферативного процесса, что отражаетсяна выраженности восстановительногопроцесса при заживлении эксцизионных ранкожи и дефектов костного скелета.

2. Заживлениеэксцизионных ран кожи у старых животныхзначительно замедляется за счётпролонгирования раннего периодарепаративного процесса, требующеговыраженной миграции клеток крови иактивации резидентных макрофагов ифибробластов в месте повреждения.

3. Репаративныйпроцесс в зоне эксцизионных ран у старыхживотных отличается отставанием повремени начала образования грануляционнойткани.

4. Экстрактэмбриональных хрящевой и костной тканейобладает наиболее выраженнымихемоаттрактивными свойствами и содержитбиологически активные пептиды, обладающиепролиферативной активностью.

5. Медленноразвивающийся репаративный процесс вобласти эксцизионных ран кожи у старыхживотных существенно ускоряется истановится качественно более выраженнымпри аппликациях на область поврежденияэкстракта эмбриональных хрящевой икостной тканей и пептидного биорегуляторахондролюкса.

6. Восстановлениекостного дефекта у старых животныххарактеризуется вялым течением и слабойактивацией стромальной ткани по перифериидефекта.

7. Аппликацияпептидного биорегулятора хондролюкса ихрящевая пластинка, помещённые на областькостного дефекта плоских костей черепа,резко сокращают срок восстановленияповреждённой кости по типуэндохондрального остеогенеза за счётускоренной мобилизации и активациистромальных элементов в зонеповреждения.

8. Применениеаппликаций с экстрактом эмбриональныххрящевой и костной тканей и пептидногобиорегулятора хондролюкса в качествестимуляторов репаративного процесса приповреждении кожного покрова и дефектовкостного скелета у старых животных невызывает в организме старых животныхпризнаков атипичного роста, чтоподтверждается морфологическиммониторингом через 6 месяцев послеокончания лечения.

9. Экстрактыэмбриональных тканей могут служитьосновой для разработки лекарственныхсредств, ускоряющих репаративные процессыпри повреждении кожи и костной ткани пристарении.

10. Необходимостьстимуляции репаративных процессов кожнойи костной тканей при старении могут бытьдополнительным показанием к применениюпептидного биорегуляторахондролюкса.

ПРАКТИЧЕСКИЕРЕКОМЕНДАЦИИ

1. Экстрактыэмбриональных тканей могут служитьосновой для разработки эффективныхлекарственных средств для стимуляциирепаративных процессов при повреждениикожи и костной ткани у пациентов пожилого истарческого возраста.

2. Для ускорениязаживления повреждений кожи и костныхдефектов рекомендуется применятьпептидный биорегулятор хондролюкс в видеаппликаций на поврежденную поверхностьежедневно до полного заживления раневойповерхности или костного дефекта.

Список работ, опубликованныхпо темедиссертации

Статьи в журналах,включенных в Перечень ВАК

Министерстваобразования и науки РоссийскойФедерации:

Pages:     | 1 |   ...   | 6 | 7 || 9 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»