WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 | 2 || 4 | 5 |   ...   | 9 |

Принцип метода: растворбелка в щелочной среде связывается сионами меди, содержащимися в реактивеБенедикта, и даёт продукт реакциифиолетового цвета. Интенсивность окраскипропорциональна содержанию белка.

Для приготовленияреактива Бенедикта 17,3 г цитрата натрияи 10 г карбоната натрия растворяли в 50 млдистиллированной воды при нагревании, недоводя до кипения (раствор а). Растворфильтровали и доводили объём раствора до 85мл дистиллированной водой. 1,73 г сульфатамеди растворяли в 10 мл дистиллированнойводы (раствор б). Растворы а) и б) объединялив общий объём в мерной колбе, доводя до 100 млдистиллированной водой.

Для определениясодержания белка в экстрактахэмбриональных тканей к 0,1 мл исследуемойжидкости добавляли 1,9 мл дистиллированнойводы и 2 мл 6% раствора NaOH. Раствортщательно перемешивали идобавляли 0,2 мл реактиваБенедикта. Встряхивали и через 15 минутфотометрировали на спектрофотометре СФ-46 вультрафиолетовом свете при длиневолны 330 нм.

Для построениякалибровочного графика готовили рядрабочих стандартных растворов альбумина сконцентрациями 0,1; 0,5; 1,0; 1,5; 2,0; 4,0; 6,0; 8,0 г/л.Рабочие стандарты обрабатывали по той жеметодике, как и пробы экстрактов, и поданным спектрофотометрирования строиликалибровочный график, по которомуопределяли содержание белка в экстрактахэмбриональных тканей в г/л.

Пептидныйбиорегулятор

Для ускорениярепарационных процессов в коже и костнойткани применяли пептидный биорегуляторХондролюкс®,представляющий собой препаратполипептидной природы, получаемый путемэкстракции из хрящей крупного рогатогоскота не старше 12-месячного возрастаили свиней. В состав Хондролюкса входятполипептиды с молекулярной массой от 75до 846 Да. В медицинскойпрактике используется в виде прозрачногобесцветного раствора для инъекций.

Результатыэкспериментального изучения показали, чтоХондролюкс оказывает тканеспецифическоедействие, проявляющееся в стимуляции ростаэксплантатов хрящевой и костной тканеймолодых и старых крыс в органотипическихкультурах. Кроме того, Хондролюкспроявляет остеопротекторное действие,выражающееся в нормализации минеральнойплотности костной ткани крыс вэкспериментальной модели остеопороза,вызванного овариоэктомией, ихондропротекторное действие, выражающеесяв препятствовании развитиюдегенеративно-дистрофических изменений вхрящевой ткани суставной поверхности вэкспериментальной моделипосттравматического остеоартроза у крыс[Поворознюк В.В. и соавт., 2007].

На основаниирезультатов экспериментального изученияпредполагается эффективность примененияХондролюкса для лечениядегенеративно-дистрофических заболеванийпозвоночника и суставов (остеохондроза,остеоартроза и др.), а также для лечения ипрофилактики остеопороза. В настоящеевремя Хондролюкс находится на стадииклинического изучения [Патент РФ № 2302872.2007].

Методы статистическойобработки результатов исследования

Статистическуюобработку результатов исследованияпроводили по стандартным программам дляперсональных компьютеров. Использовалиспециализированные пакеты прикладныхпрограмм для медико-биологическихисследований (“Statistica-5.0” и “Microsoft Exсell”),обеспечивающих выполнение общепринятыхматематико-статистических методов (расчетпараметров вариации признаков, t-критерийСтьюдента для зависимых равновеликих инезависимых разновеликих выборок)[Григорьев С.Г. и соавт., 2002].

РЕЗУЛЬТАТЫИССЛЕДОВАНИЯ

Характеристикабиологической активности и биохимическогосостава экстрактов из эмбриональныхтканей

Процесс старенияорганизма характеризуется значительнымснижением активности иммунной системы, атакже снижением темпов и качества обменныхпроцессов. В этой связи резервныевозможности стареющего организмазначительно ограничены при восстановлениицелостности тканей после повреждения.Принимая во внимание всёвышеперечисленное, актуальной задаченйявляется необходимость моделированиямеханизмов, которые могли бы ускорить иусилить по выраженности вялотекущийрепаративный процесс у старых особей спомощью применения биологическихактиваторов. Таковыми, на наш взгляд,представляются различные биологическиесубстанции (пептиды, цитокины, факторыроста и т.д.), обладающие свойствомстимулировать миграцию клеток, ихпаракринную функцию, синтез необходимыхдля репаративного процессакомпонентов.

Для реализациипоставленной задачи нами избраныэкстракты из эмбриональных тканей14-дневных куриных эмбрионов (экстрактэмбриональной печени, экстрактэмбриональных хрящевой и костной тканей,экстракт эмбрионального сердца исосудистого пучка). Ниже приводятся данныенекоторых биохимических показателей ибиологической активности перечисленныхвыше эмбриональных тканей.

Содержание белка вэкстрактах эмбриональных тканей

Данный показательиспользовали в качестве основного маркерадля приготовления препаратов изэкстрактов, которыми лечили эксцизионныераны. Таким образом удавалось получитьэкстракт определённой концентрации ивыявить оптимальную дозу, которая можетбыть использована в экспериментальноймодели. В таблице 1 приводятся данные посодержанию общего белка в экстрактахэмбриональных печени, сердца и хрящевой икостной тканей.

Таблица 1

Содержание белка вэкстрактах эмбриональных тканей

Экстракт

Содержаниебелка, г/л

Экстрактэмбриональной печени

13,2±1,32

Экстрактэмбрионального сердца и сосудистогопучка

7,6±0,81

Экстрактэмбриональных хрящевой и костнойтканей

9,2±0,96

Протеолитическаяактивность экстрактов эмбриональныхтканей

Протеолитическиеферменты, выделенные из экстрактовэмбриональных тканей, представляютинтерес в аспекте возможной деградациибелковых молекул. В наших экспериментахэтот показатель является прямым маркёромобразования пептидных молекул различнойвеличины, которые содержат в своём составестимуляторы пролиферации, миграции идифференцировки клеток. Эти сведения даютнам возможность констатировать фактприсутствия биологических активаторов вполученных экстрактах.

Таблица 2

Протеолитическаяактивность экстрактов эмбриональныхтканей

Экстракт

Диаметр зоныобесцвечивания № 1, мм

Диаметр зоныобесцвечивания № 2, мм

Диаметр зоныобесцвечивания № 3, мм

Экстракт эмбриональнойпечени

6,8±0,08

9,2±0,31*

7,7±0,28*

Экстракт эмбриональных хрящевой икостной тканей

9,5±0,41

18,0±0,48

16,5±0,41

Экстракт эмбрионального сердца исосудистого пучка

7,0±0,17

14,0±0,36*

12,0±0,27*

Контроль (печень взрослогоживотного)

7,0±0,09

20,3±0,34

15,5±0,26

* р<0,05 по сравнению споказателем в контроле.

.

Рис. 1. Протеолитическаяактивность экстрактов эмбриональныхтканей (метод прямой зимографии).

Данные, представленные втаблице 2 и на рисунках 1, 2, показывают,что экстракты эмбриональных тканейобладают высокой степенью агарознойактивности, которая особенно проявляется вэкстрактах хрящевой и костной тканей исердца и сосудистого пучка, приближаясь кпоказателям агарозной активности вконтрольных образцах, где в качествеисточника агарозной активностииспользовали кусочки печени взрослогоживотного. Данное свойство является весьмаважным в формировании костного скелета и,как показывает эта серия экспериментов,хрящевая и костная ткани эмбриона такжеобладают выраженной агарознойактивностьюКак свидетельствуют данныетаблицы 2, наиболее выраженнаяпротеолитическая активность отличаетэкстракты из эмбрионального хрящевой икостной тканей, а также сердца исосудистого пучка: диаметры зонобесцвечивания экстракта эмбриональныххрящевой и костной тканей практически неотличаются от показателей в контроле.Средней коллагеназной активностьюобладает экстракт эмбрионального сердца исосудистого пучка; достоверно меньшей посравнению с контролем активностью(р<0,05) обладает экстракт эмбриональнойпечени.

Выявленнаяпротеолитическая активность экстрактовэмбриональных тканей свидетельствует оналичии в них биологическихактиваторов.

pH экстрактовэмбриональных тканей

Одним из важнейшихусловий для обеспеченияоптимального характера обменных процессовявляется показатель pH в гуморальных средахорганизма. Учитывая последующееприменение экстрактов в виде аппликаций наповрежденные ткани животного, былаисследована величина pH в различных серияхприменяемых в эксперименте экстрактов.Полученные результаты исследованиясвидетельствуют о том, что pH используемыхдля аппликации экстрактов эмбриональныхтканей характеризуются значениями,близкими к физиологическим показателям(табл. 3).

Таблица 3

рН экстрактовэмбриональных тканей

Экстракт

рН

Экстрактэмбриональной печени

7,15±0,02

Экстрактэмбрионального сердца и сосудистогопучка

7,05±0,05

Экстрактэмбриональных хрящевой и костнойтканей

7,11±0,06

Хемоаттрактивныесвойства экстрактов эмбриональныхтканей

Исследованияхемотаксической активности экстрактовэмбриональных тканей представляют в нашемисследовании наиболее важные их свойства,проявляющиеся во влиянии на клетки,циркулирующие в периферической крови, и нарезидентные клеточные формынепосредственно в тканях. Это, преждевсего, обусловливается тем, что в изучаемыхнами моделях тканевого повреждения(эксцизионные раны) данный феномен играетодну из ведущих ролей в формированииранней воспалительной реакциирепаративного процесса.

Таблица 4

Хемоаттрактивныесвойства эмбриональных экстрактов

Экстракт

Индексхемотаксиса нейтрофилов

Экстрактэмбриональной печени

2,22±0,07

Экстрактэмбрионального сердца и сосудистогопучка

2,64±0,11

Экстрактэмбриональных хрящевой и костнойтканей

2,86±0,05

St. Aureus209

1,75±0,03*

Среда199

7,03±0,21*

С5а компоненткомплемента

2,22±0,05

* р<0,05 по сравнению споказателем при действии С5а компонентакомплемента.

В таблице 4 приведеныданные о хемоаттрактивных свойствахизучаемых экстрактов эмбриональных тканейв сравнении с классическимхемоаттрактантом С5а компонентомкомплемента и аттрактивными свойствамизолотистого стафилококка. Данные таблицы 4указывают на то, что хемоаттрактивныесвойства экстрактов эмбриональных тканейпо силе проявления равны эффекту,полученному при действии классическогохемоаттрактанта: индекс хемотаксисанейтрофилов при действии экстрактовэмбриональных тканей не отличается отданного показателя при действии С5акомпонента комплемента, но достоверноотличается при действии золотистогостафилококка штамм 209 и среды 199(р<0,05).

На основанииприведённых цифровых данных по силеаттрактивных свойств хемоаттрактантыэкстрактов эмбриональных тканей можнорасположить в следующем порядке: экстрактэмбриональных хрящевой и костной тканей,экстракт эмбрионального сердца,экстракт эмбриональнойпечени.

Полученные результаты похемоаттрактивным свойствам экстрактовэмбриональных тканей в отношениинейтрофильных лейкоцитов дают всеоснования для применения их в используемыхнами моделях с повреждением кожнойповерхности.

Таким образом,результаты исследований свидетельствуют отом, что экстракты из эмбриональных тканейхарактеризуются содержанием белка от 7,6±0,81г/л до 13,2±1,32 г/л и обладаютпротеолитической и хемоаттрактивнойактивностью, что позволяет рассчитывать наих эффективность в усилении процессоврепарации поврежденных тканей стареющегоорганизма.

Результаты исследованияпоказали, что наибольшей протеолитическойи хемоаттрактивной активностью обладаетэкстракт из эмбриональных хрящевой икостной тканей, поэтому в экспериментах постимуляции репаративных процессов уживотных применяли именно этот экстракт ввиде аппликаций на поврежденную раневуюповерхность.

Коррекция течения раневого процесса пристарении

С целью изученияэффективности воздействия различныхбиорегуляторов на процесс заживленияэксцизионных ран сравнивали между собой 3группы старых животных контрольная группа, у которыхпроцесс заживления раны протекал только сповторением перевязок (9 кроликов), и 2подопытные группы: с момента повреждения идо полного заживления раны животным 1подопытной группы (10 особей) производилиаппликации с экстрактом из эмбриональныххрящевой и костной тканей, а животным 2подопытной группы (10 особей) – аппликации спептидным биорегуляторомхондролюксом.

Pages:     | 1 | 2 || 4 | 5 |   ...   | 9 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»