WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 | 2 || 4 | 5 |   ...   | 8 |

Анализ уровня антителв сыворотке крови подопытных животныхпо­казал, чтопри введении хитозана у телят наблюдалосьувеличение титра спе­цифических антител, выявленных внепрямом ИФА, в сравнении с контро­лем. Средние титрыантител уживотных опытной и контрольной групппред­ставленыв таблице 1.

Таблица 1

Средний титр антителпри вакцинации телят против пастереллеза всочетании с препаратомхитозана

Группыживотных

Титры антител

Через 14 дней

Через 21 день

Через 60 дней

Опыт

1:700

1:1400

1:1700

Контроль

1:666

1:733

1:1200

Через 14 суток послевакцинации разница между титрами антител уживотных опытной иконтрольной групп составила 0,95%. Через 21-есутки после вакцинациисодержание антител у телят опытной группыпрогрессивно возрастало на52,63% по сравнению с контролем. На 60-й деньпосле вакци­нации титры антител в обеих группахсоставляли 1:1700 и 1:1200 соответст­венно, т.е. уживотных, вакцинированных совместно схитозаном, титр анти­тел на 70% выше, чем у контрольныхживотных, которым этот препарат не вводили(рис.2)

Титр антител

дни

Фон14день21 день 60дней

Рис.2.Динамика титровантител в сыворотках крови КРС на фоневакцинации совместно с хитозаном

Таким образом, на всехэтапах исследования отмечена выраженнаятенденция к повышению уровня выработкиантител при применении хитозана посравнению с контролем.

Результатыисследования сывороток крови насодержание иммуногло­булинов различных классовпредставлены в таблице 2.

Таблица 2.

Содержаниеиммуноглобулинов отдельных изотипов вкрови телят опытной иконтрольной групп

Группы

IgG, мг/мл

Ig M, мг/мл

Ig А, мг/мл

Через 14 суток после вакцинации(т=5)


Опыт

20,50±1,73

2,73 ±0,28

0,24± 0,1

Контроль

20,30 ±1,36

2,47±0,14

0,22±0,01

Через 21 после вакцинации(п=5)Опыт


Опыт

21,14±2,01

3,35 ± 0,3

0,21 ±0,03

Контроль

21,36 ±0,54

3,32 ±0,54

0,23 ± 0,04

Изучение влиянияхитозана на иммунобиологический статусмолодня­ка КРСпри вакцинации против пастереллезапоказало, что применение дан­ного полимера вкачестве иммуномодулятора обусловилоиндукцию развития долгосрочного иммунитета,повышенную выработку специфическихантител и образование иммунногоответа на месте введения вакцины. Такимобразом, выявлено наличиеиммуномодулирующих и адъювантных свойствисполь­зуемого препарата хитозана присочетанном его введении крупномурогато­мускоту с пастереллезной вакциной.

Приведенныеисследования показали, что использованиепрепаратов хитозана может вызватьоптимизацию механизмов гомеостаза уживотных, усиливать антителогенез иувеличивать титры циркулирующих в кровианти-

тел.

Обобщая данные,полученные в результате проведенныхэксперимен­тов, можно заключить, что введениехитозана 4-х месячным телятам одновре­менно с вакцинациейпротив пастереллеза обусловило:

-увеличение титра специфическихантител в сравнении с контролем, выявленных в непрямом ИФА;

- предотвращениеснижения уровня гемоглобина и повышениекоэф­фициента метаболической активациинейтрофилов крови к 14 суткам после вакцинации;

-активацию механизмов,обеспечивающих поглощение чужеродногоматериаланейтрофилами к 21 суткам послевакцинации.

3.2 Антимикробныйэффект влияния кислоторастворимогохитозана противвозбудителей туберкулеза

В работе использоваликрабовые низкомолекулярныеводорастворимые хитозаны смолекулярной массой (ММ), равной 4;7;8;5;11;24 кДаи степенью деацетилирования(СД) 85%, N-сукцинил хитозан с ММ 396 кДа, икислоторастворимые хитозаны с ММ 96, 177 и 380 кДа,полученные на базе ЗАО «Био­прогресс» (Щелково,Россия). Образцы низкомолекулярногохитозана были полученыферментным гидролизом с помощьюхитонолитического комплек­са Streptomyces kurssanovi и из хитина восковой моли Colleria mallonella.

Для изучениячувствительности клеток к антимикробномудействию хитозана готовили 0,025;0,05; 0,75; 0,1; 0,2; 0,3; 0,5; 1,0 % растворы хитозана впитательной яичной среде, после чегокоагулировали при температуре 90°С в течение 60 минут. Затем высевали 0,5мл микробной суспензии на чашку Петри с питательнойсредой в присутствии хитозана или безхитозана (кон­троль). Посевы с клетками культивировали втечение 28 дней при температу­ре 37°С, учет ростакультур на средах проводили каждые 7-10дней.

Работу проводили сштаммами микобактерий Mycobacterium smegmatis шт 211 (предоставлен лабораторией«Биотехнология стероидов», Центра «Биоинженерия» РАН), штаммы Mycobacterium avium (штамм Vailee) пре­доставлены ННЦ«ИЭКВМ), г. Харьков.

Зависимость процентагибели микобактерий от ММ хитозанаприведе­на втаблице 3 и на рис.3.

Таблица 3

Влияниекислоторастворимого хитозана с различнойММ на гибель микобактерий M.smegmatis при экспозициив течение 1 часа,


t=37°C и рН=6,8 ед.рН


№пп

ММ, кДа

X=lgx

Y % гибели микобактерий

1.

4

0,60

80

2.

7

0,84

77

3.

8,5

0,93

75

4.

11

1,04

68

5.

24

1,38

57

6.

96

1,98

37

7.

177

2,25

18

8.

396

2,60

4

Оценка зависимостипроцента гибели бактерий откислоторастворимо­го хитозана с различной ММ и времениэкспозиции проводились методами регрессионного и корреляционногоанализа.

Предварительныеисследования и аналитические соотношенияпозво­лялисчитать % гибели микробных клеток линейнойфункцией от логарифма молекулярной массы (ММ)хитозана. При этом регрессионная задачасводит­ся коценке параметров в уравнении

где Х – lgx (молекулярнаямассахитозана)(1)

Y - % гибеликлеток

Y,%

100

80

60

40

20

х

0 2496177396 х, ММ, кДа

Рис. 3. Зависимостьпроцента гибели микобактерий M.smegmatis

молекулярной массыхитозана через 1 час при t=37°C и рН-6,8 ед.рН

График зависимости % гибелимикобактерий от ММ хитозана представлен нарис. 4.

Yo%

100

80

60

40

20

00,51,01,52,02,5 3,0lgх

Рис.4. Линеризованнаязависимость % гибели микобактерий отlg (MM) хитозана согласно уравнения(4).

Коэффициенткорреляции Rрассчитывался из уравнениявида:(2)

R= 0,9

Данные значения R свидетельствуют отесной линейной связи между % гибели микобактерий и ММкислоторастворимого хитозана, которыйосо­бенноэффективен при низких значениях ММ =4,7,8,5,11.

Первоначально опыты по определениювыживаемости микобактерий были проведены на атипичномтестовом штамме M.smegmatis.bGieTKHM.smegraatic инкубировали схитозаном краба с ММ-4-396 кДа и хитозаномвосковой моли с ММ от 7-177 кДа вконцентрациях 0,1% при температуре

370 С, на качалке. После этого пробытитровали и высевали на чашки Петри. В качестве контроля использоваликлетки, не обработанные хитозаном. Поистечении 72 часов инкубации определяликоличество жизнеспособных кле­ток (КОЕ).

Из рис.3 следует, чтопроцент гибели клеток М. smegmatis после 60 мин экспозиции при 37°С и рН 6,8оставлял 0-76% в зависимости от ММ ис­пытанных хитозанов.Наименьшей чувствительностью клеткиобладали к вы­сокомолекулярным образцам хитозана с ММ 96 и 177кДа. Высокомолеку­лярный крабовый хитозан с ММ 396 кДав концентрации 0,1 % не обладал антибактерийным действием. Максимальнойактивностью в отношении кле­ток микобактерийобладали низкомолекулярные хитозаны с ММ 4-8,5кДа.

Полученные результатысвидетельствуют о том, что хитозанобладает бактериостатическим действием поотношению к возбудителю туберкулезави­дов M.bovis и М. avium, что указываетна перспективность дальнейшихисследо­ваний с целью применения его длялечения и профилактики туберкулезасель­скохозяйственных животных иптиц.

Наиболее выраженный антимикробный эффект вотношении всех изу­чаемых тест-культур показалипрепараты кислоторастворимогохитозана с молекулярной массой(ММ) 58 и 87 к Да и степеньюдеацетилирования 80-80,3%(см.табл. 4).

Таблица 4

Антимикробный эффектхитозана в отношении изучаемых тест-культур

Конц, %

Хитозан, ММ 87 кДа

Хитозан, ММ 58 кДа

0,025

М. avium

М. Bovis

М. fortuitum

М. intracellulare

М. avium

М. Bovis

М. fortuitum

М. intracellulare

0,0 5

+

++++

++++

++++

+

++++

Pages:     | 1 | 2 || 4 | 5 |   ...   | 8 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»