WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 || 3 | 4 |   ...   | 8 |

- разработкатеоретического обоснования ипрактического применения су­ществующих иразработка принципиально новыхбиологических веществ с использованием современных методовбиотехнологии для нужд ветеринарии. Для решения цели исследований былипоставлены следующие задачи:

1.Теоретическиобосновать использование БАВ вветеринарной практике. 2.Исследовать влияние хитозана намеханизм гомеостаза и гуморальную и неспецифическую защиту организма уживотных.

3.Изучитьантибактериальную активность хитозана кштаммам микобак-терий и, вчастности, для профилактики и лечениятуберкулеза.

4.Провести работы поактивации хитозана для повышения егосорбцион-ных свойств при использовании вкачестве кормовых добавок для КРС.5.Исследовать антиметастическуюактивность олигомеров хитозана и егоприменение в сочетании с экстрактомпротивоонкологического фитосбо­ра.

6.Изучитьантиоксидантную активностьи ранозаживляющую способность хитозана при использовании на животных.

7.Обосноватьиспользование коллагеназы, пробиотиков,синбиотиков для профилактики и лечения вветеринарии.

8.Изучить возможностьиспользования в качестве кормовых добавоки компонентов питательных сред цеолита,автолизата хлебопекарных дрожжей, яично-дрожжевогогидролизата для использования в различныхотраслях сельскогохозяйства.

9.Осуществитьпрактическое использование рассмотрениеБАВ в ветери­нарии.

10.Рассчитать предполагаемуюэкономическую эффективность от широ­кого примененияисследованных БАВ в ветеринарии.

1.3. Научная новизна.Применение препаратовнизкомолекулярного сукцината хитозана вызывает усилениефункционирования механизмов го-меостаза уживотных (телят), усиливает антителогенез иувеличивает титры циркулирующих в кровиантител, а также активирует факторы,характери­зующие гуморальную инеспецифическую защиту организма.

Впервыеэкспериментально подтверждено, чтохитозан обладает бакте-риостатическим иранозаживляющим действиемпо отношению к патогенным возбудителямзабо­леванийживотных и птиц и при нанесении имхимических и термических ожогов.

Впервые разработанаметодика активации хитозана, котораяпозволила получить сорбент семкостью на 40-60% больше, чем у исходногополимера. Показано, что акцинати сукцинат хитозана со степеньюдеацетилирования 87-97% имолекулярной массой 50-250 кДа обладаетмаксимальной сорбционной емкостью (80-10мг/г) и успешно испытан на животных иптицах.

Показано, чтоповышенная удельная активность радиоцезияв рационе животныхобусловливает ряд негативных изменений,таких как снижение числаэритроцитов, гемоглобина в крови посравнению с нормой. Скармли­вание дополнительно косновному рациону препаратов хитозанаоказало ра-диопроекторноедействие.

Опыты по добавке низкихдоз хитозана к кормовому рациону молоднякасельскохозяйственныхживотных показали достоверное повышениепривесов на 5-6% у животныхопытных групп по сравнению сконтролем.

Антиметастатическийсинергизм действия в фитохитодезтерапиивозмо­жен присочетании олигомерной фракции хитозана скомпонентами сложного состава экстрактапротивоонкологического фитосбора. Кромеэтого, обнару­женный эффект может быть косвеннымподтверждением наличия синергети-ческого антиоксидантного (и,по-видимому, поливакцинного) действияэкс­трактовлекарственного сырья, особенно длямногокомпонентных фитосбо­ров и при сочетании сполиэлектролитами природногопроисхождения.

Разработана технологияполучения фитохитодезов - биологическиактив­ныхдобавок к пище, состоящих из сухихэкстрактов сбора лекарственных растений и хитозана полифракционногосостава в виде его водорастворимой формы.

Впервые в результатеанализа полученных экспериментальныхданных установлено, чтоиспользование ферментного препаратаколлагеназы улучшает качественные характеристики готовогопродукта при внесении его в мясное сырье.

Впервые разработанныйкормовой белок-добавка - синбиотик«Правита» по сравнению сдругими кормовыми белковыми продуктамиобладает более высокойпитательной ценностью и биопротекторнымисвойствами в качествекормовой добавки для птиц.

Результатыисследования кормовой биологическойдобавки (цео-лит+культура Echerichia coli VL 613)подтвердили ее эффективность взамендорогого кристаллическоголизина.

Разработанная кормоваядобавка с использованием цеолита придобавлении в питательную среду былауспешно использована при культивированииклеток перепелиных эмбрионов глубиннымспособом, позволила увеличить конечнуюконцентрацию клеток.

Все изготовленныесерии препарата для борьбы с личинкамикровосо­сущих комаров Aedes aegipty сиспользованием культуры B.thusingiensis H-14 шт.1501 и автолизата хлебопекарных дрожжей вкачестве компонента пита­тельной среды побиологической активности соответствовалитребованиям НТД и оказалисьэффективными.

Применениеяично-дрожжевого гидролизата в качествелечебно-профилактическойдобавки для подкормки пчел, обеспечиваетпрофилактику заболеванияпчел - нозематоза, компенсации белковойнедостаточности и ус­корения процессовжизнедеятельности пчелиных семей.

Впервые установлено,что бактерии L.planturum,шт. М-30 и B.subtilis,

шт. В-1948, обладаютдостаточным уровнем антогонистическойактивно­стьюк условно-патогенным и патогенныммикроорганизмам. Кроме того, они обладают достаточным уровнемустойчивости к широкому кругу анти­биотиков, чтопозволяет сочетать антибиотическую ипробиотическую тера­пию в случае эпидемии вхозяйствах.

1.4. Практическая значимость работы.Результаты проведенныхисследований были использованы присовершенствовании технологийпроизводства хитозана, биопрепаратов,используемых для профилактики, лечения, атакже повышения резистентности ипродуктивности животных. Аттестованопроизводство и получено Свидетельство огосударственной регистрациилекарственного средства для животных.Зарегистрировано в Российской Федерации.Утверждено заместителем РуководителяФедеральной службы по ветеринарному ифитосаниарному надзору Е.А.Непоклоновым 15мая 2007г.

1.5.Апробация работы. Основные положения работы былипредставлены на следующих конференциях:

- Международнойнаучно-практической конференции «Научныеосно­выпроизводства ветеринарных биологическихпрепаратов»ВНИТИБП,
Щелково,2007г.;

- Ш Международномветеринарном конгрессе по птицеводству,Мо­сква,2007г.

1.6. Основные положения ирезультаты, выносимые на защиту.

  1. Теоретическое обоснование ипрактическое использование хитозана длягуморальной и неспецифической защитыорганизма животных, по антибактериальной активности,сорбционных свойств, антиметастической активности и оксидантнойактивности для профилактики и лече­ния вветеринарии.
  2. Использование ферментногопрепарата коллагеназы для улучшенияка­чественныххарактеристик мяса и мясныхпродуктов.
  3. Теоретическое обоснование ипрактическое применение пробиотиков,синбиотиков в сельскомхозяйстве.
  4. Исследование и практическоеприменение различных кормовых доба­вок и компонентовпитательных сред при выращиваниибройлерных цыплят, препаратов противкровососущих, нематоза пчел, антибиотико- ипробиотикоскопию и повысить эффективностьфитопрепаратов на основе хитозана в случаеугрожающей ситуации в сельскомхозяй­стве.

1.7.Публикации. Порезультатам диссертации опубликованоработ, в
том числе статейв научных журналах, докладов в сбор­никах научныхконференций.

1.8..Структура и объемдиссертации. Материалыдиссертации изло­жены на 192 страницах машинописноготекста и состоит из следующих

разделов: введение,обзор литературы, собственныеисследования, обсужде-

ние полученныхрезультатов, выводы и данные опрактическом использова­нии научныхвыводов, список использованнойлитературы 348 источников, в

том числе217отечественных и 131 зарубежных.Работа содержит 18 таблиц, 9рисунков, 52страницыприложений.

2. СОБСТВЕННЫЕИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы иметоды

Работа выполнена запериод с 2000 по 2007 гг. во Всероссийскомнауч­но-исследовательском итехнологическом институте биологическойпро­мышленности (РАСХН) совместно сцентром «Биоинженерия» (РАН), ЗАО «Биопрогресс» (Щелково, Россия),Кубанским государственным медицин­ским университетом(г.Краснодар) ГосНИИСинтезбелок попрограмме «Со­ставить руководящие иинформационно-справочные документы пообеспече­ниюкачествалекарственных средств для животных наэтапах их разработки, апробации и производства всоответствии с НациональнымЗаконодательст­вом и Международными Требованиями» (per.№ ИС-01.200.2.08792) и в со­ответствии спланом НИР иОКР ВНИТИБП отраслевых научных программ иФедеральной целевойнаучно-технической программы«Ветеринарное благо­получие (2001-2005 гг.).

Изучение влияниянизкомолекулярного сукцината хитозана наиммунный ответ телят на фоне их плановойиммунизации против пастереллеза телятпрово­дили в2006 году на базе МТФ ООО «Автобан» вКраснодарском крае. Титр специ­фических антителопределялся методом непрямого ИФА, афракции хитозана разделялись мембраннымметодом. Исследования сывороток крови насодержа­ниеиммуноглобулинов различных классовпроводились методом радиальнойиммунодиффузии (РИД) в лаборатории иммунологииВИЭВ под руководством членакорреспондента РАСХН Ю.Н.Федорова.

Опыты по определениюантимикробного эффектакислоторастворимого хи­тозана ивыживаемости микобактерий проводили соследующими штаммами: типичными -Mycobacterium avium (штамм IEKBM УААН),Mycobacterium bovis и атипичными -M. fortuitum, M.smegmatisM. intracellulare предоставленными ННЦ «ИЗКВМ», Г. Харьков. Атипичныемикобактерии, как и возбудителитубер­кулеза,вызывают сенсибилизацию к туберкулинукрупного рогатого скота. Они широко распространены во внешнейсреде и попадая в организм, обуславлива­ют повышеннуючувствительность к туберкулину умлекопитающих. Данные бактерии частоиспользуют как тестовые при разработкедезинфицирующих пре­паратов при туберкулезе.

В работе использоваликрабовые кислоторастворимые хитозаны с ММ58 и 87 кДа, а такжеводорастворимые: сукцинат хитозана смолекулярной массой 380,0 кДа,и низкомолекулярный хитозан смолекулярной массой 38 кДа, произ­водства ЗАО"Биопрогресс" (Щелково, Россия).

Определениеантиоксидантной активности осуществляли спомощью прибора дляопределения антиоксидантной активностилекарственных препа­ратов, продуктов питания ибиологически активных веществ «ЯузаAAA 01» на базе ОАО «НПР«Химавтоматика» по величинеокислительно-восстановительного потенциала,определяемого амперометрическимтитрова­нием.В качестве маркера для количественнойоценки использовали дигидро-кверцитин.

Раневые покрытияготовили следующим образом: хитозанпроизводства ЗАО «Биопрогресс» растворялив 1% янтарной кислоте, добавляли масляныйраствор анестезина, эмульгировали вприсутствии лецитина, частично осаждали израствора содой и сшивали янтарнымангидридом. Полученный гель высушивали навоздухе при 25-300С и получали пленки.

В качестве опытныхживотных использовали белых беспородныхкрыс с массой тела 180-200 г, которым подэфирным наркозом воспроизводилитермический и химический ожоги надепилированной поверхности тела площадью 2см.

В работе по изучениювлияния ферментного препарата коллагеназына мясопродукты препаратвводили в концентрациях 0,03%, 0,05% и 0,1% достадии термообработкимясопродуктов.

Качество продукцииоценивалось по следующим показателям:содер­жаниевлаги, содержание сухих веществ,содержание связанной влаги, потеря массы, общая органолептическаяоценка.

Пребиотик «Авистим»для птиц приготовлен на основекультуральной жидкостивысшего гриба Fusarium sambucinumMKF 2001 -3 и исследована его антиоксидантная активность призащите птиц.

При разработкетехнологии получениялечебно-профилактических кор­мовых белковыхдобавок-синбиотиков для птициспользовалась биомасса

дрожжей-сахаромицетов,в которую добавлялась биомасса грибаFusarium Sanbucinum МКГ-2001-3, пробиотики Bac.subtilis имолочнокислые бактерии.

Препарат поднаименованием «Провит» был испытан набройлерных цыплятах.

В качестве наполнителякормовой биологической добавки для цыплятбыл использован цеолит Хотынецкогоместорождения Орловской области в виде мелкозернистой крошкиразмером частиц до 1 мм и биомасса E.coliVL 613, синтезирующая одну изнезаменимых аминокислот - лизин в ор­ганизмецыплят.

Для производствапрепарата для борьбы с личинкамикровососущих ко­маров Aedes aegiptyиспользовался автолизатэнтопатогенной культуры Bacillus thuringiensis Н-14 штамм ИПМ-1501 содержащейэндотоксин. Выра­щивание культуры Bac.thuringiensis осуществлялась в биореактореАНКУМ-2 емкостью 10 л напитательной среде, содержащей автолизатхлебопекарных дрожжей.

Четыре опытные сериияично-дрожжевого гидролизата и подкормкипчел в сухом и жидком видеисследованы по основным физико-химическимхарактеристикам и прошлииспытания на пасеке учхоза «Леоновский»Мос­ковскойобласти, совхозе «Малынь» Шекинскогорайона, Тульской области и пчелосовхоза «Беканский» СевернаяОсетия.

Исследования in vitro антогонистической активности ичувствительно­сти к антибиотикам проводились поотношению бактерий L.plantarum,

шт.М-30, B.subtilis, шт.В-1975 и методомострогенного антагонизма вотношениипатогенных и условнопатогенных микроорганизмов - S.tuphimurium, S.dublin, S.gallinfrum, 3- штаммов E.coli:К-88, К-99, А-20 и полевогоизолята E.coli,выделенного от больнойптицы. Об антогонистической активностиштаммов судили по величине зоны задержкироста тест-культуры.

Для обеспечениякачества и безопасности производствабиологически активныхвеществ в биотехнологии необходимособлюдать Международные правила GMP, требовании ИСО ианализа рисков БАССР.

Для анализа истатистической обработкиэкспериментальных данных использовались методы дискретногораспределения, t-распределения Стью-дента, %2- распределения, корреляционныйанализ, одно и многофакторная регрессия, критерий значимости идоверительные интервалы (Н.Джонсон, Ф.Лион «Статистика и планированиеэксперимента в технике и науке. Мето­ды обработки данных.М.: Мир, 1980 - 611 с).

3. РЕЗУЛЬТАТЫИССЛЕДОВАНИЙ

З.1.Применение низкомолекулярногосукцинита хитозана в качестве им-муномодулятора при вакцинациителят против пастереллеза

Разработанспособ мембранногоразделения фракции (ультрафильтра­ция)низкомолекулряного хитозана, позволяющийполучать полимер с задан­ной молекулярной массой.По сравнению с хроматографическимиметодами фракционированияультрафильтрация дает возможностьполучать достаточно высокий выход продукта с более низкойсебестоимостью.

Результатыисследования на токсичность фракцийхитозана, полученных мембранным разделением поданной методике, представлены нарис.1.

Рис.1. Зависимостьтоксичности хитозана от молекулярноймассы при внутрибрюшинном введении белыммышам

Pages:     | 1 || 3 | 4 |   ...   | 8 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»