WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 |   ...   | 4 | 5 || 7 | 8 |   ...   | 11 |

Полученные результатыпозволили установить, что эффективногоснижения АГ ФГМБ можно добиться при двухповторных циклах УФ и СУФ; дальнейшие циклыобработки не дают эффекта. Длягипоаллергенных продуктов на основегидролизатов КСБ предпочтительнымявляется процесс СУФ, так как он позволяетполучать гидролизаты с гарантированносниженной до требуемого уровня АГ.

Таблица 12

Влияние кратности УФ иСУФ на АГ гидролизата КСБ«Флавоэнзимом»

Число УФ(циклов)

АГ

УФ 10 кД

СУФ 5кД

1

ИсходныйФГМБ

1.10-3

1.10-3

2

1 цикл

5.10-5

2.10-5

3

2 цикл

2.10-5

0,9.10-6

4

3 цикл

2,5.10-5

1.10-6

Таким образом, впроцессе исследований, осуществленных вданной главе, установлены технологическиепараметры мембранных обработок для ФГМБ,используемых в энтеральном питании (ФГМБ 1),критической характеристикой которогоявляется ММР; ФГМБ, используемых в лечебноми лечебно-профилактическом питании припищевой аллергии и непереносимости белковкоровьего молока (ФГМБ 2 и ФГМБ 3), длякоторых критическая характеристика -остаточная АГ белков коровьего молока всоставе белкового компонента продукта (неболее 110-5 и110-4, соответственно). Видмембранной обработки, основные икритические характеристики упомянутыхФГМБ представлены в табл. 13.

Таблица 13

Характеристики ФГМБ дляСП после мембранной обработки

Образец

Белок,

фермент

Мембранная обработка

Характеристики ФГМБ

УФ

СУФ2

НФ

М ср, кД

АГ, неболее

ФГМБ1

КСБ,

«Панкреатин»

+

-

+

5,8

110-4

ФГМБ 2

То же

-

+

+

5,3

310-5

ФГМБ 3

КСБ,

«Флавоэнзим»

-

+

-

1,4

110-5

Для направленногорегулирования ММР в ФГМБ предложен принципрасчёта мембранного фракционирования сучётом различных факторов: селективностимембран (УФ, СУФ, НФ) по конкретнымдиапазонам молекулярных масс, кратностиобработки, степени концентрирования истепени диафильтрации, требуемогосоотношения пептидных фракций, ММРисходного ФГМБ. В результате выведеныформулы, позволяющие с высокой точностьюрассчитывать ММР в ФГМБ, подвергнутыхуказанным видам мембранныхобработок.

Глава 6. Исследованиезакономерностей удаления фенилаланина изФГМБ с использованием АХр. Получив удовлетворительные данныепо исследованию закономерностейфракционирования гидролизатов, полученныхиз концентратов молочных белков, провелиизучение содержания фенилаланина вполученных образцах. В дальнейшем длясорбции фенилаланина использовали методАХр. В качестве неподвижной фазы применялипористые гранулы химическимодифицированного полистирола ХАД-16.

Эксперименты проводиликак в лабораторных условиях (колонка2,540 см), так и на пилотной установке вусловиях опытного производства (колонка44100 см). В качестве основного критерияподобия при переходе к пилотной установкепринято время элюирования полного объемаколонки, которое составило 100 минут. Объемнаносимого раствора гидролизата составлялне более 12% от объема хроматографическойколонки (больший объем приводил к объемнойперегрузке). Концентрация исходногогидролизата составляла от 25 до 45% по сухимвеществам. При больших концентрацияхотмечались эффекты неоднородностинанесения материала на колонку и еговыпадения в осадок, что резко снижалоэффективность разделения. При меньшихконцентрациях наносимого материала падалапроизводительность колонки.

Основныетехнологические параметрыхроматографического фракционирования налабораторной и пилотной колонке приведеныв табл.14.

Таблица 14

Технологическиехарактеристики препаративнойхроматографии

Показатель

Лабораторнаяколонка

Пилотнаяколонка

Размеры,см

2,540

44100

Неподвижнаяфаза

ХАД-16

ХАД-16

Подвижнаяфаза

Дистиллированная

вода

Обратноосмотическая вода

Концентрациинаносимого ФГМБ, %

25-45

45

Объемнаносимого ФГМБ, % от объема колонки

Не более12

Не более12

Скоростьэлюирования

2,5 см3/мин

1,5л/мин

Продолжительность элюированияполного объема колонки, мин

100

100

Во всех случаях длянанесения на колонку ХАД-16 использовалинизкомолекулярные фракции, полученные врезультате мембранной обработки(препараты предварительно высушивали либов лаборатории методом лиофилизации, либо вусловиях производства методомраспылительной сушки). Перед нанесением нахроматографическую колонку гидролизатрастворяли в дистиллированной илиобратноосмотической воде и очищалимикрофильтрацией.

В процессе АХр вхроматографических фракциях определялиоптическую плотность, массовую долю сухихвеществ и отношение этих показателей,являющееся качественным критериемприсутствия фенилаланина в образце.Предварительный скрининг показалнедостаточную эффективность удаленияфенилаланина из гидролизатов КМБ и КСБ,полученных под действием «Панкреатина»(данные не показаны). Поэтому основнаячасть экспериментов, как в лабораторных,так и в промышленных масштабах, былапроведена с использованием гидролизатовКСБ, полученных с использованием«Флавоэнзима».

Результатыхроматографической очистки гидролизатовбелков коровьего молока хорошовоспроизводились при переходе отлабораторной колонки к полупромышленнойпилотной для всех использовавшихсяпрепаратов. Это свидетельствует окорректности выбора общейпродолжительности элюирования препарата вкачестве критерия подобияхроматографического процесса вцелом.

В табл. 15 приведенырезультаты хроматографическогофракционирования гидролизата КСБ,полученного путем обработки«Флавоэнзимом» и промышленной СУФ черезмембрану с размером пор 5 кД.

Таблица 15

АХр ФГМБ (гидролиз КСБ«Флавоэнзимом» +

СУФ 5 кД) на колонке ХАД-16(2,540 см)

Образец

Объем выхода V, мл

D280

RI, %

D280/RI,%

Содержание в % от нанесенного

Phe, %

VD280,

VRI, %

1

Фракция1

30

0,22

1,4

0,16

0,17

4,62

0,006

2

Фракция2

30

1,34

6,8

0,20

1,02

22,42

0,027

3

Фракция3

30

2,00

6,0

0,33

1,532

19,78

0,052

4

Фракция4

30

2,10

3,9

0,54

1,60

12,86

0,207

5

Фракция5

30

2,37

2,0

1,19

1,81

6,59

0,532

6

Фракция6

30

2,53

1,2

2,11

1,93

3,96

1,300

7

Объединенныефракции 1-4

120

1,42

4,5

0,32

4,12

59,3

0,093

8

Объединенныефракции 1-3

90

1,19

4,7

0,25

2,73

46,3

0,036

9

Исходный ГКСБ

20

196

45,5

4,31

100

100

2,09

Примечание. RI, % - массоваядоля сухих веществ, определеннаярефрактометрическим методом; VRI, % -масса сухих веществ во фракции в граммах,рассчитанная по концентрации сухихвеществ и объему фракции; VD280 - количествооптических единиц (280 нм) во фракции,характеризующее количество ароматическихаминокислот; D280/RI, % - параметр, характеризующийстепень удаления ароматическихаминокислот из образца; Phe, % - массовая доляфенилаланина в пересчёте на белковыйэквивалент.

Из приведенных втаблице результатов видно, что еслиотбирать в качестве продукта сумму фракций1-3, то выход по сухим веществам составит 46,3%при содержании фенилаланина вобъединенной фракции 0,036% по массе сухоговещества. Препарат с таким содержаниемфенилаланина удовлетворяет современнымтребованиям к качеству белковогокомпонента лечебных продуктов питания сосниженным содержанием фенилаланина. Еслипродолжать собирать продукт по мереэлюирования, то будет происходить резкоеувеличение содержания фенилаланина вобъединенной фракции. Поэтому чрезвычайноважной является стабильная работа колонкии элементов хроматографической системы(насосы, коллектор и т.д.) для точного отборафракций с целью получения препаратагарантированного качества.

Pages:     | 1 |   ...   | 4 | 5 || 7 | 8 |   ...   | 11 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»