WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 |   ...   | 2 | 3 || 5 | 6 |   ...   | 11 |

При подборе условийгидролиза КСБ и КМБ ферментным препаратом«Флавоэнзим» принимали во внимание, чтоэтот комплекс протеаз, продуцентом которыхявляется низший гриб Asp.orhizae, обладает рНоптимумом активности вблизи рН 6,0, то естьдля проведения процесса не требуетсярН-статирование с применением щелочи.Кроме того, ферменты, входящие в состав«Флавоэнзима», обладают более высокой, всравнении с «Панкреатином» устойчивостьюк автолизу и термической инактивации.Следствием этого является возможностьпроведения процесса в течение значительнобольшего (в сравнении с «Панкреатином»)времени, чем достигается существенноеувеличение степени расщепления белковогосубстрата. Как следует из данных табл. 5,степень гидролиза, достигаемая при 20 часахгидролиза КСБ, оказывается выше, чем при 6часах обработки. При этом более 70%белкового материала переходит во фракцию вдиапазоне молекулярных масс менее 1,4 кД,т.е. представляет собой свободныеаминокислоты и олигопептиды.

Таблица 5

Молекулярно-массовоераспределение гидролизатов КСБ «Лакпродан80»

Флавоэнзимом» вколичестве 5% по массе сухих веществ

через 6 и 20 часовгидролиза

Диапазон молекулярных масс,кД

Относительное распределение,%

при продолжительностигидролиза, ч

6

20

1

Более166

3,6

3,1

2

166-28,2

2,2

1,4

3

28,2-11,0

5,1

1,9

4

11,0-4,0

22,7

9,4

5

4,0-1,4

15,8

13,7

6

Менее1,4

50,6

70,5

Значение рН реакционнойсмеси, изначально равное 6,6 (чтосоответствует собственному значению рНбелковых субстратов при их восстановленииводой) снижается на 0,5 единицы в течениепервого часа гидролиза и далее не меняетсяв пределах точности измерения напротяжении всего процесса. В результатеотсутствия рН-статирования в гидролизатене накапливаются катионы натрия или калия,что облегчает его использование в составеСП, требования к минеральному составукоторых являются весьма жесткими, а такжеделает более эффективнымхроматографическое фракционированиегидролизата.

Оптимизация параметрафермент-субстратного соотношения пригидролизе КСБ и КМБ «Флавоэнзимом»показала, что глубина гидролиза растётвплоть до 5% фермента по массе сухих веществреакционной смеси (табл. 6). Дальнейшееувеличение вносимого «Флавоэнзима»нецелесообразно, т.к. приводит кизбыточному накоплению потенциальноаллергенных материалов ферментногопрепарата в гидролизате, а также кудорожанию процесса.

Таблица6

Зависимость ММРгидролизатов КМБ при гидролизе«Флавоэнзимом» от

фермент/субстратногосоотношения, продолжительностьгидролиза

20 часов, температура50+1С

Диапазон молекулярных масс,кД

Относительное распределение,%

при фермент/субстратномсоотношении

0,5%

2,0%

5,0%

1

Более158

12,0

6,8

9,7

2

158-79,4

1,5

0,7

0,7

3

79,4-28,2

11,2

5,4

1,3

4

28,2-11,2

8,1

3,3

1,7

5

11,2-4,5

10,4

18,0

6,0

6

4,5-1,4

16,6

18,3

12,7

7

Менее1,4

40,2

47,5

67,9

Отдельно изученавозможность использования двухстадийныхсхем протеолиза с последовательнойобработкой «Панкреатином» и«Флавоэнзимом» или в обратнойпоследовательности без промежуточнойинактивации фермента. Результаты (данныене показаны) свидетельствуют о том, чтотакая обработка позволяет повысить на 10-20%содержание в ФГМБ продуктов глубокогогидролиза белка (молекулярной массой менее1,4 кД) и одновременно снизить количествовысокомолекулярных белковых фракций. Темне менее, их полная элиминация при этом всёравно не достигается.

В исследуемыхпрепаратах ФГМБ в процессе ФГ«Панкреатином» определяли содержаниесвободных аминокислот. Результатыисследований приведены в табл. 7.

Как показал анализпредставленных экспериментальных данных,накопление свободных аминокислотпроисходило пропорциональнопродолжительности ФГ. Выявлено, что белки в составе КСБтребуют большего времени для ФГ, чтосвязано, вероятно, с меньшей атакуемостьюферментами ряда глобулярных сывороточныхбелков (-лактоглобулин, сывороточныйальбумин) в сравнении с казеинами,доминирующими в составе КМБ. Вместе с тем,способность пептидов - продуктов гидролизаказеина ингибировать ферментативнуюреакцию приводит к тому, что процесспротеолиза сывороточных белковоказывается, судя по накоплениюаминокислот, более растянутым вовремени.

В процессе лабораторныхисследований на основании анализаостаточной протеолитической активностиферментов установлены оптимальные режимыинактивации: температура 93±2оС с выдержкой 5±0,2мин.

Таблица 7

Накопление свободныхаминокислот в процессе ФГ молочных белковпри
температуре 50+1оС, рН 7,5+0,1

Аминокислоты, мкмоль/л

Белковые субстраты

КМБ

КСБ

продолжительность ФГ, ч

0,5

1,5

3,0

5,0

0,5

1,5

3,0

5,0

Триптофан

917

1000

2100

2169

350

400

605

1750

Фенилаланин

1442

2017

4033

4096

244

689

1333

2689

Лейцин

1847

1947

3447

5516

1200

1856

2218

3622

Изолейцин

692

731

1077

1201

686

971

1743

2657

Треонин

-

433

556

603

-

500

1200

1575

Метионин

436

564

1107

1176

311

667

800

1489

Лизин

950

1168

2515

2615

920

1218

2619

3220

Валин

500

730

1181

1270

1233

1600

2367

3567

Гистидин

-

17

69

75

-

-

-

-

Аргинин

-

17

69

75

-

-

-

Аланин

256

319

531

608

967

1133

1233

2267

Серин

-

209

280

316

-

216

350

418

Глутаминовая

кислота

1250

2333

2600

2671

429

857

1025

1243

Глицин

69

100

115

173

19

114

200

343

Тирозин

688

Pages:     | 1 |   ...   | 2 | 3 || 5 | 6 |   ...   | 11 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»