WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 |   ...   | 2 | 3 ||

32

1

28

0

28

1

7,510-4

30-5/11

2

0

0

-

0

-

0

* - указана частота на сайт, на геном, за поколение.

дисгенеза – оно оказывается на порядок величин выше, чем при -облучении или температурном воздействии (Mackay, 1987; Гришаева, Иващенко, 1997; Васильева и др., 1997). Полученные в нашей работе результаты согласуются с этими данными: в y2-717-Х-хромосоме в результате индуцирующих скрещиваний частота перемещений hobo высокая, в то время как используемые дозы радиационного воздействия не повлияли на частоту событий (табл. 4). Отсутствие транспозиций hobo в линии y2-717 закономерно, поскольку, по данным ПЦР-анализа, в геноме линии y2-717 отсутствует полноразмерная копия hobo. Наблюдаемые нами эксцизии hobo-элементов в группе 30-4 могли появиться в результате гомологичной рекомбинации или репликативно, когда ДНК-полимераза “проскакивает” шпильку, образованную терминальными повторами последовательности мобильного элемента. Возможно, низкая частота эксцизионных событий в нашем эксперименте связана с недостаточно большой выборкой материала. Также, это может быть связано с типом мобильного элемента: в большинстве работ изучено воздействие радиации на ретротранспозоны. О влиянии радиации на эксцизии транспозонов известно, что в клетках Е. сoli при -облучении происходит возрастание частот элиминации транспозона Tn10 в зависимости от дозы облучения (Журавель, Борейко, 2002). Также, -радиация может оказывать влияние на эксцизии Р-элемента в соматических тканях эмбриона (Handler, Gomez, 1997).

В ряде работ было выявлено влияние отсроченных эффектов радиации на геном. Существует мнение, что индуцируемая радиацией дестабилизация генома дрозофилы имеет отдаленные процессы действия (Шоханов и др., 1997; Ратнер и др., 2001). В нашей работе отсроченного воздействия используемых доз -радиации на распределение hobo не обнаружено (табл. 11). В группе 30-5/11 использовали массовую культуру, а не семейные скрещивания, как в других группах, поэтому особи с поврежденными радиационным воздействием геномами могли не выжить или не оставить потомства, а также, поскольку мы оценивали эффект радиационного воздействия спустя одиннадцать поколений, повреждения могли быть утрачены.

ПЦР-анализ геномной ДНК мух в группе 30-4 позволил выявить появление двух дополнительных полос на уровне 550 и 750 пн, которых нет в других группах, что, возможно, говорит о возникновении новых вариантов дефектных hobo-последовательностей (рис. 7).

Рис. 7. ПЦР-анализ линии y2-717 до и после облучения разными дозами -радиации с праймерами на ORF hobo-элемента.

1) маркер молекулярной массы (100 пн – 1,5 тпн); 2) y2-717 (30-5/11); 3) y2-717 (3-4); 4) y2-717 (30-4); 5) y2-717; 6) y+ w N+, содержит полноразмерный hobo-элемент; 7) PsB4, содержит клонированный полноразмерный hobo-элемент в составе вектора; 8)- HindIII. Стрелка указывает на положение ПЦР-продукта полноразмерной копии hobo-элемента.

Причиной появления новых вариантов делетированных hobo могла послужить рекомбинация между hobo-последовательностями, поскольку известно, что радиационное воздействие способно увеличивать частоту рекомбинационных событий.

ВЫВОДЫ

  1. Показано, что в популяции Drosophila melanogaster Умани распространены как полноразмерные, так и делетированные hobo- и Р-элементы и наблюдается полиморфизм между особями, как по количеству hobo-элементов, так и по сайтам их распределения в Х-хромосомах. Обнаружено, что hobo-элемент присутствовал в популяции Умани и до начала вспышки мутабильности по гену yellow (до 1982 г.).
  2. Установлено, что транспозиционная активность hobo-элементов после индуцирующих транспозиции скрещиваний способна сохраняться в течение десятков поколений и каждое новое скрещивание вызывает увеличение числа копий и частоты транпозиций hobo в Х-хромосомах производных линии y2-717.
  3. Выявлено, что наблюдаемая у мутантных производных линии y2-717 Drosophila melanogaster Умани локус-специфическая hobo-обусловленная нестабильность гена yellow сопровождается hobo- и Р-транспозиционными событиями в других локусах Х-хромосомы. Следовательно, супернестабильность локуса yellow служит маркером активности hobo- и Р-элементов в Х-хромосоме в целом.
  4. Получены экспериментальные данные, свидетельствующие о том, что hobo-элемент способен проявлять транспозиционную активность в клетках соматических тканей. Во-первых, выявлена взаимосвязь между присутствием в геноме активного hobo-элемента и повышением частоты рекомбинаций на клетках крыла (тест SMART) Drosophila melanogaster. Во-вторых, с помощью метода FISH, продемонстрировано перемещение hobo-элемента в клетках соматических тканей у Drosophila melanogaster и получена оценка частоты hobo-транспозиций - 3,5x10-2 на сайт, на Х-хромосому.
  5. Показано, что при отсутствии каких-либо воздействий, индуцирующих транспозиции мобильных элементов, в y2-717Х-хромосоме гены стабильны в клетках генеративных тканей (метод РСПЛМ), и наблюдается постоянная картина распределения hobo-элементов в клетках генеративных и соматических тканей (метод FISH). В геноме линии y2-846 происходят транспозиции hobo-элемента в клетках соматических и генеративных тканей без дополнительной индукции, таким образом, для высокой транспозиционной активности hobo-элемента в геноме линии y2-846, по-видимому, достаточно наличия его полноразмерной копии.
  6. При однократном и многократном воздействии -радиацией дозой 3 Гр и 30 Гр не обнаружено изменений в картине распределения hobo-элементов в хромосомах линии y2-717 Drosophila melanogaster.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Kovalenko L.V., Zakharenko L.P., Zakharov I.K. Possible influence of hobo mobile element on the frequency of somatic mutations in the wing cells of Drosophila melanogaster // Drosophila Inform. Serv. 2002. № 85. P. 72-75.

2. Захаренко Л.П., Перепелкина М.П., Коваленко Л.В., Захаров И.К. Нестабильность генома Drosophila melanogaster в природе и под влиянием -радиации / В кн.: Медицинские и экологические эффекты ионизирующего излучения. Материалы 2 Международной научно-практической конференции, 20-21 мая 2003 г. Северск - Томск. // Северск-Томск, 2003. С. 55-57.

3. Захаренко Л.П., Коваленко Л.В., Захаров И.К. Причины высокой мутабильности в гене yellow у Drosophila melanogaster из Умани / В кн.: 3 съезд ВОГиС, Генетика в 21 веке: современное состояние и перспективы развития. Москва, 6-12 июня 2004 г. Т. 2. – Москва. 2004. Т. 2. С. 200.

4. Zakharenko L., Kovalenko L., Zakharov I. The Drosophila melanogaster hobo transposon moves like a retrotransposon // In: Genome Instability and Repair, Sagerbrush Inn and Conference Center. Taos, New Mexico, USA. March 15-20, 2005. – Keystone Symposia. 2005. P. 72.

5. Васильева Л.А., Кикнадзе И.И., Киселёва Е.В., Гундерина Л.И., Истомина А.Г., Голыгина В.В., Ваулин О.В., Воронин Д.А., Илинский Ю.Ю., Захаренко Л.П., Коваленко Л.В. и др. Механизмы генетической изменчивости популяций и видов Diptera // Динамика генофондов растений, животных и человека. Отчётная конференция. Москва. 2005. С. 35-36.

6. Коваленко Л.В., Захаренко Л.П., Захаров И.К. Транспозиции hobo-элемента в соматических клетках Drosophila melanogaster // Генетика. 2006. Т. 42. № 2. С. 177-184.

7. Коваленко Л.В., Захаренко Л.П., Волошина М.А. и др. Поведение транспозонов hobo и P в нестабильной линии yellow2717 Drosophila melanogaster и ее производных после скрещиваний с лабораторной линией // Генетика. 2006. Т. 42. № 6. С. 748-756.

8. Захаренко Л.П., Коваленко Л.В., Перепелкина М.П., Захаров И.К. Влияние -радиации на индукцию транспозиций hobo-элемента у Drosophila melanogaster // Генетика. 2006. Т. 42. № 6. С. 763-767.

9. Васильева Л.А., Захаренко Л.П., Коваленко Л.В. и др. Механизмы генетической изменчивости популяций и видов Diptera: Мобильные генетические элементы в популяциях и в опыте // Программа фундаментальных исследований РАН. № 11. “Биоразнообразие и динамика генофондов”. Подпрограмма 2. “Динамика генофондов”. Сборник материалов. – М: ФИАН. 2007. С. 24-25.

Pages:     | 1 |   ...   | 2 | 3 ||






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»