WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 || 3 |

С целью характеристики общего состояния животных при проведении опытов пользовались общепринятыми методами, описанными в соответствующих руководствах (Карпуть И.М., 1986; Кондрахин И.П. с соавт., 2004). Количество эритроцитов и лейкоцитов в крови - путем подсчета в камере Горяева (Кондрахин И.П. с соавт., 2004); определение количества гемоглобина гемоглобинцианидным методом; определение гематокритной величины с помощью микроцентрифуги; СОЭ, тромбоцитов, общий белок - рефрактометрическим методом (Филипович Ю.Б. с соавт., 1975); общие липиды - по цветной реакции сульфофосфованилиновым реактивом; мочевину в сыворотке крови - спектрофотометрическим методом с диацетилмонооксимом (Кондрахин И.П. с соавт., 2004); активность аспартатаминотрансферазы и аланинаминотрансферазы - спектрофотометрически динитрофенилгидразиновым методом (Колб В.Г., 1986); глюкозу - энзиматическим методом; общих иммуноглобулинов - методом преципитации сульфатом цинка (Weaver D.M. et al., 2001); классы иммуноглобулинов - радиальной иммунодиффузии по Манчини; неорганический фосфор - в безбелковом экстракте с ванадат-молибденовым реактивом по Пулсу в модификации В.Ф. Коромыслова и Л.А. Кудрявцевой; натрий, кальций - методом пламенной фотометрии (Кондрахин И.П. с соавт., 2004); меди, цинка, марганца, железа на атомно-абсорбционном спектрофотометре «Perkin Elmer» модель 703 (США).

Морфологические исследования проводили в лабораториях кафедры фармакологии, токсикологии и паразитологии ВГАУ и в отделе патоморфологии ФГУ «Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии» (г. Воронеж).

Для гистологического и гистохимического исследований, через 3, 5, 7, 10, 15 и 20 дней из области раны брали материал. Его фиксировали в 10 % растворе нейтрального формалина и жидкости Карнуа. После проводки в спиртах восхо­дящей крепости заливали в целлоидин-касторовое масло-парафин. На ротаци­онном микротоме делали срезы толщиной 8 мкм. Их окрашивали гематоксили­ном и эозином, по Ван-Гизону, фибрин выявляли по Шуенинову, железо - по Перлсу, полисахариды - ШИК-реакцией, гликозаминогликаны - по методу Хейла и альцеановым синим. Бактерии выявляли карболовым тионином по Николя. Для дифференцировки клеточных элементов крови срезы окрашивали азур П-эозином (Г.А. Меркулов, 1969).

Каждую пробу исследовали в 3-х аналитических повторностях. Полученный цифровой материал приведен в соответствие с государственной системой обеспечения единства измерений «Единицы физических величин» (в соответствии с Международной системой СИ) (ГОСТ 8.471-81). Использованы методы математической статистики, принятые в биологии и медицине (Гублер Е.В., 1978; Лакин Г.Ф., 1990). Расчеты, построение графиков и их описание осуществляли с помощью приложений Microsoft Office 10 и Excel 10 для Windows XP. Достоверность различий оценивали с использованием t-критерия Стьюдента. Статистически значимыми считали различия при р<0,05.

3. РЕ­ЗУЛЬ­ТА­ТЫ СОБСТВЕННЫХ ИС­СЛЕ­ДО­ВА­НИЙ

3.1. Получение, состав и физико-химические свойства препарата «АСК»

Препарат «АСК» является композиционным средством для лечения ран у животных, содержащий кутикулу мышечного желудка птицы, бентонит, фосфогипс, молочную кислоту, метилцеллюлозу, воду дистиллированную при следующем соотношении компонентов, мас. %:

кутикула мышечного желудка птицы – 19,0

бентонит – 25,0

фосфогипс – 10,0

молочная кислота – 1,0

метилцеллюлоза – 0,8

дистиллированная вода – 44,2

Линимент «АСК» изготавливается следующим образом. Бентонит и фосфогипс смешивают в сухом виде до получения однородной массы, которую доводят водой до кашицеобразного состояния. В остальной воде растворяют сначала молочную кислоту, а затем добавляют кутикулу и смешивают до получения однородности. Метилцеллюлозу заливают горячей водой, затем сливают и смешивают с молочнокислой смесью кутикулы. В заключительной стадии все компоненты смешиваются.

Бентонит – природный силикат алюминия (ТУ 5717-001-0049108-99), обогащен солями щелочных и щелочноземельных металлов, содержит в своем составе более 40 различных элементов, жизненно важных для животных: кремний, натрий, калий, кальций, магний, фосфор, железо, марганец, медь, цинк, кобальт, йод и др.

Фосфогипс – отход химического производства (ТУ 6-207-71 Уваровский химзавод), содержит в своем составе дигидрат сульфата кальция, не менее 92%, кремнефториды щелочных металлов, фториды кальция, фосфаты железа и алюминия фторапатиты и др.

Молочная кислота – органическая кислота, образуется в животных тканях, особенно в мышцах и растениях, при консервации, при брожении микроорганизмами.

Метилцеллюлоза – полисахарид, являющийся главной структурной частью клеток наземного и морского мира. В виде метилцеллюлозы связано более 50% всего органического углерода биосферы. Поэтому по распространенности ее можно поставить на первое место среди всех органических веществ живой природы (Цветикова О.Н., 1999).

Кутикула – слизистая оболочка куриного желудка, высушенная при температуре 18-22 °С до 8% массовой доли влаги. Кутикулу получали от птиц как сразу после убоя, так и после хранения в замороженном виде.

В кутикуле содержится 3 вида пепсина: А, D, С, первые 2 содержат 21 и 22 основных аминокислот, а С – 6.

Наибольшая протеолитическая активность куриного пепсина по гидролизу гемоглобина проявляется при рН 2,0 и составляет 150% (И.Н. Щедров, 2005 г.) при температуре 38-40 °С (Аргунов М.Н., Середа С.В., 2004 г.). Выход активного фермента составляет 80-100 г/кг сырья.

3.2. Определение антимикробной активности препарата

По данному этапу исследования проводили в соответствии с ГОСТ 2511-82. Метод бактериального анализа.

В результате проведения исследований данным методом оказалось, что чистый порошок кутикулы давал рост микрофлоры, а готовый препарат в различных разведениях (1:10, 1:50 и 1:100) роста микрофлоры не давал.

При хранении препаратов в течение двенадцати месяцев, в обычных условиях, бакобсемененность чистого порошка кутикулы составляла 18 клеток микроорганизма в 1 г порошка (общее содержание), что соответствует норме, а бакобсемененность готового преперата составляла 0 клеток микроорганизма в 1 г массы (общее содержание), что также соответствует норме.

Результаты данных исследований указывают на то, что «АСК» обладает бактерицидным свойством.

3.3. Определение острой токсичности и класса токсичности

Острую токсичность изучали на белых мышах массой 20-22 г. и крысах массой 200-220 г. Препарат вводили внутрижелудочно в диапазоне доз от 500 до 8000 мг/кг массы тела белых мышей и от 1000 до 10000 мг/кг массы тела белых крыс.

По истечении 14 дней гибели грызунов зарегистрировано не было. Исходя из результатов данного опыта, согласно общепринятой классификации химических веществ (Медведь Л.И., 1964) «АСК» является малотоксичным и относится к 4 классу токсичности.

При испытании острой токсичности препарата не выявлено признаков раздражающего действия, однако, для подтверждения безопасности применения препарата мы провели дополнительные исследования. Про­во­ка­ци­он­ные кож­ные про­бы ­про­во­ди­ли на мор­ских свин­ках ме­то­дом эпи­ку­тан­ных ап­пли­ка­ций. Пе­ред на­ча­лом ап­пли­ка­ций про­во­ди­ли сен­си­би­ли­за­цию жи­вот­ных пу­тём мно­го­крат­но­го на­не­се­ния на ко­жу «АСК». Еже­днев­но на вы­стри­жен­ный уча­сток ко­жи трём мор­ским свин­кам на­но­си­ли вод­ный рас­твор пре­па­ра­та в раз­ве­де­ни­ях 1:10; 1:100; 1:1000. На 14 день (вре­мя ин­ку­ба­ци­он­но­го пе­рио­да) на све­же­вы­стри­жен­ный уча­сток ко­жи на­но­си­ли раз­ре­шаю­щую до­зу «АСК».

В те­че­ние все­го пе­рио­да опы­та за мор­ски­ми свин­ка­ми ве­ли на­блю­де­ние, про­во­ди­ли из­ме­ре­ния тем­пе­ра­ту­ры те­ла, тол­щи­ны кож­ной склад­ки на мес­те эпи­ку­ри­ро­ва­ния, оп­ре­де­ля­ли тем­пе­ра­ту­ру на мес­те нанесения пре­па­ра­та. Из­ме­не­ний в кли­ни­че­ском ста­ту­се жи­вот­ных и на мес­те ап­пли­ка­ций «АСК» не вы­яв­ле­но. На ос­но­ва­нии это­го от­вет­ную ре­ак­цию оце­ни­ва­ли как от­ри­ца­тель­ную.

3.4. Ал­лер­ген­ные и местно-раздражающие свойства пре­па­ра­та «АСК»

В следующем опыте 2 группы по 3 головы в каждой. Животных сенсибилизировали аппликациями линимента по следующей схеме: 2 раза в день 10 суток подряд. Животных первой опытной группы обрабатывали линиментом, животных второй контрольной группы - вазелином медицинским очищенным. Препараты наносили в количестве 0,3-0,5 г на предварительно выстриженный участок кожи спины в межлопаточной области размером 4х4 см. Аппликации делали в направлении от шеи к хвосту, через 4 часа удаляли стерильными тампонами. Через 14 дней с момента последней аппликации вновь эпилировали кожу на участке сенсибилизации и наносили разрешающую дозу изучаемого препарата, соответствующей концентрации. Через 24 часа учитывали клинико-морфологические изменения. Согласно полученным данным констатировали отсутствие воспалительной реакции на месте аппликации препарата зуда (расчесов), изъязвлений, пигментации, аллопеций не наблюдалось, толщина кожной складки не изменялась. Следовательно, линимент «АСК» не обладает местным токсическим и раздражающим действием.

3.5. Изучение эмбриотоксических и тератогенных свойств

В опы­те по изу­че­нию эм­брио­ток­си­че­ско­го дей­ст­вия «АСК» ис­поль­зо­ва­ли 20 бе­ре­мен­ных са­мок бе­лых бес­по­род­ных крыс мас­сой те­ла 205-220 г, которых в дальнейшем разделили на две равные группы. Всех самок спаривали с самцами. На 2-е су­тки бе­ре­мен­но­сти (пе­ри­од им­план­та­ции) по­ло­ви­не са­мок первой группы наносили однократно на выстриженный участок кожи «АСК» равномерным тонким слоем. На 18-е су­тки бе­ре­мен­но­сти (пе­ри­од ор­га­но­ге­не­за) препарат нанесли пяти самкам второй группы. Ос­тав­шим­ся жи­вот­ным в та­ком же объ­е­ме наносили раствор, содержащий 25% бентонита, они слу­жи­ли кон­тро­лем. На 20-е су­тки бе­ре­мен­но­сти про­во­ди­ли убой 2 го­лов жи­вот­ных из ка­ж­дой груп­пы, при этом учи­ты­ва­ли ран­нюю и позд­нюю ре­зорб­цию пло­да, об­щую пло­до­ви­тость, ко­ли­че­ст­во жел­тых тел бе­ре­мен­но­сти, жи­вых и мерт­вых эм­брио­нов, про­во­ди­ли об­мер и взве­ши­ва­ние пло­дов. В ре­зуль­та­те, ни по од­но­му из вы­ше­пе­ре­чис­лен­ных по­ка­за­те­лей между жи­вот­ными опытных и контрольных групп ка­ких - ли­бо от­ли­чий зарегистрировано не было.

Ос­тав­ших­ся са­мок ос­та­ви­ли до на­сту­п­ле­ния ес­те­ст­вен­ных ро­дов. За раз­ви­ти­ем по­лу­чен­но­го по­том­ст­ва ве­ли на­блю­де­ние: про­во­ди­ли взве­ши­ва­ние, за­ме­ры дли­ны те­ла, хво­ста, учи­ты­ва­ли сро­ки от­ли­пания ушей, про­ре­зы­ва­ния глаз, об­рас­та­ния шер­ст­ным по­кро­вом, под­виж­ность и ак­тив­ность вы­са­сы­ва­ния мо­ло­ка ма­те­ри в те­че­ние пер­вых дней жиз­ни. На дан­ном этапе, ка­ких ли­бо раз­ли­чий в изу­чае­мых по­ка­за­те­лях вы­яв­ле­но не бы­ло.

3.6. Изучение подострой и хронической токсичности «АСК»

Целью изучения подострой токсичности является выявление избирательного влияния вещества на функциональное состояние отдельных органов, тканей и систем, а также его способность к кумуляции.

Кумулятивные свойства «АСК» изучали в эксперименте на белых крысах, которым аплицировали в течение 45 дней «АСК» в разведениях: 1-ой группе - 1:10; 2-ой группе - 1:100; 3-ей группе - 1:1000, 4-я группа животных служила контролем. Все животные содержались на едином рационе.

В течение всего опыта за подопытными животными вели наблюдение, учитывали поедаемость корма, прием воды, состояние слизистых оболочек, волосяного покрова, поведение, взвешивали в начале и в конце эксперимента.

В результате у грызунов не зарегистрировали гибели, не отмечали признаков интоксикации и заболеваний. Динамика массы тела представлена на рисунке 1.

Рис.1. Динамика массы тела крыс при применении «АСК» в течение 45 дней, г

Таким образом, применение «АСК» в течение 45 дней не вызвало значимых различий в массе тела животных.

В конце опыта были проведены: убой всех грызунов, анатомическое вскрытие и взвешивание внутренних органов. Патологических изменений во внутренних ор­ганах опытных животных не выявлено. Результаты представлены в таблице 2.

Таблица 2

Весовые индексы внутренних органов белых крыс при применении «АСК» в течение 45 дней (в % к массе тела)

Наименование

органа

№ группы

1

2

3

4

Тушка

Печень

Сердце

Почки

Семенники

Селезенка

Желудочно-кишечный тракт

78,8±0,852 3,97±0,140 0,38±0,050 0,75±0,033

1,18±0,028 0,43±0,032

10,1±0,350

77,18±0,351 4,1±0,180

0,38±0,021

0,74±0,031 1,16±0,087 0,41±0,051

9,92±0,221

76,95±0,641

3,94±0,153 0,36±0,024 0,74±0,042 1,21±0,051 0,38±0,042

10,11±0,361

77,1±0,41

3,86±0,23 0,39±0,041 0,71±0,022 1,13±0,011 0,38±0,042

13,21±0,182

Из таблицы 2 видно, что достоверных различий по массе тушек и внутренних органов у белых крыс в опытных и контрольных группах не выявлено.

Морфологические и биохимические показатели сыворотки кро­ви белых крыс при применении «АСК» в течение 45 дней не имеют существенных различий и находятся в пределах нормы колебания. У опытных животных наблюдали увеличение в крови всех исследуемых показателей, очевидно, это связано с улучшением обменных процессов в организме.

Pages:     | 1 || 3 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»