WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 | 2 || 4 | 5 |

Пациентов для исследования подбирали из числа ранее обследованных больных туберкулезом, с установленным диагнозом, которые получали стандартную противотуберкулезную терапию основными ПТП. Для ускоренной характеристики (в течение 14 дней) микобактериальной популяции, её состава и свойств, проводился посев мокроты больных в жидкие питательные среды (бульон Middelbrook 7H9) в системе MGIT-BACTEC-960. При отсутствии ответа на проводимое лечение в течение 3-х месяцев, а также при развитии у больных явлений непереносимости, при получении окончательных результатов посевов на твердую среду Lwenstein-Jensen, пациенты рассматривались на возможность включения.

Мокроту для исследований получали как при самостоятельном её выделении больными, так и с помощью фиброоптической бронхоскопии. У пациентов с МЛУ к ПТП образцы изолировали до момента изменения культуры, высеваемой из мокроты. Наличие роста МБТ в системе MGIT-BACTEC-960 регистрировалось на 4-5 день от момента посева. Тесты на лекарственную чувствительность или устойчивость проводили в культурах, культивированных как на твердой среде Lwenstein-Jensen, так и в системе MGIT-BACTEC-960, с использованием техники точки излома и стандартного метода пропорций, при добавлении критических стандартных концен­траций ПТП. Культура считалась чувствительной, если число колоний МБТ выросших в пробирке с препаратом не превышало 20 при посеве 107 микробных тел.

Уровень устойчивости данного штамма МБТ выражался максимальной концентрацией препарата, при которой еще наблюдалось размножение МБТ. Устойчивость МБТ к ПТП диагностировали, когда <1% ингибирования оригинального инокулята МБТ наблюдалось на среде Lwenstein-Jensen, содержащей следующие концентрации препаратов: изониазид – 0,25 мгл–1; рифампицин – 32,0 мгл–1, пиразинамид – 125 мгл–1, этамбутол – 1,0 мгл–1, стрептомицин – 4,0 мгл–1, протионамид – 32,0 мгл–1 (рекомендации ВОЗ). Минимальные подавляющие концен-трации (МПК) ПТП, как первой, так и второй линии терапии и спарфлоксацина определяли с использованием штаммов, устойчивых к ПТП первой линии. Точки излома для определения чувствительности МБТ к спрафлоксацину: 1 мкгмл–1 – чувствительны; 1–4 мкгмл–1 – умеренно чувствительны; >4 мкгмл–1 – устойчивы.

Схема интенсивной фазы терапии включала прием внутрь покрытых пленочной оболочкой таблеток спарфлоксацина в дозе: в первый день 400 мг, далее по 200 мг на один прием после завтрака под прямым наблюдением. При назначении в комбинации со спарфлоксацином ПТП руководствовались их действующими инструкциями по медицинскому применению. Больных предостерегали от воз-действия прямой инсоляции и предупреждали о вредности ультрафиолетового облучения в течение 10-ти дней после окончания лечения спарфлоксацином.

При МЛУ к ПТП режимы терапии выбирались в соответствии с характером ус-тойчивости МБТ к ПТП. В режиме 1 (устойчивость H-25, R-80, S-50, E-5) применялась схема 3SPX (200 мг)+3Сs (12,5 мг/кг)+3PAS (0,2 мг/кг/2)+3Z (25 мг/кг)+3К (15 мг/кг/сут). В режиме 2 (устойчивость H-25, R-80, S-50, К-50) – 3SPX (200 мг)+3Сs (12,5 мг/кг)+3Pt (12,5 мг/кг/2)+3Z (25 мг/кг)+3Е (25 мг/кг)+3Cap (15 мг/кг/сут). В режиме 3 (устойчивость H-1, R-10, E-2, S-50) – 3SPX (200 мг)+3H (10 мг/кг/сут/2)+3Rb (5 мг/кг/сут)+3Е (25 мг/кг)+3Z (25 мг/кг)+3K (15 мг/кг/сут). Всем больным назначали пиридоксина гидрохлорид до 60 мг/сут на два приема, после еды. При приеме циклосерина, больные получали до еды глютаминовую кислоту по 0,5 г. три раза в сутки.

При сохранении чувствительности МБТ к ПТП назначался режим 4 – 3SPX (200 мг)+3H (10 мг/кг/сут/2)+3R (10 мг/кг/сут)+3Z (25 мг/кг)+3S (16 мг/кг/сут).

Методами динамического контроля лечения у больных являлись: клинический осмотр (ежедневно); компьютерная томография (до лечения, через 1, 2, 3 месяца); определение МБТ в мокроте методами люминесцентной микроскопии с окраской исследуемого материала по методу Циль-Нильсена, с контрольным исследованием материала, посеянного на твердую питательную среду Lwenstein-Jensen (до лечения, через 1, 2, 3 месяца); определение в мокроте неспецифической микрофлоры и ее чувствительности к антибиотикам широкого действия (до лечения, через 7, 14, 21, 30, 60 и 90 дней от начала лечения); исследование крови, мочи, пигментной, ферментативной и белково-синтетической функций печени (до начала лечения, 2 раза в месяц и по показаниям); осмотр офтальмолога (до начала лечения, в конце курса и в ходе лечения по показаниям); электрокардиографическое исследование для контроля продолжительности интервала QT (раз в две недели, а при увеличении продолжительности интервала – дважды в неделю).

В ходе исследования оценивалась эффективность (динамика клинических, лабораторных и микробиологических данных) и безопасность (частота и характе-ристика нежелательных явлений (НЯ), которые анализировались на основе субъективных и объективных явлений непереносимости) терапии.

Каждое лекарственное средство имеет свой спектр характерных побочных реакций, основанный на его фармакологических свойствах. На этом основании, при развитии того или иного НЯ, в первую очередь попадал под подозрение препарат, для которого данный тип побочной реакции являлся характерным. Полученная информация вносилась в программный комплекс ARISg5 (Global Adverse Reaction Information System) в виде гипотезы и с его помощью проводился анализ, подтверждавший или опровергавший нашу гипотезу о связи указанного нами НЯ с приемом конкретного препарата. При наличии связи препарат отменялся, пациенту назначалась альтернативная схема терапии, но данный пациент подлежал контролю и оценке по разделу безопасности независимо от сроков отмены препарата.

По окончанию интенсивной фазы терапии, пациенты продолжали продолженную фазу химиотерапии еще 3 месяца в условиях стационара или амбулаторно.

3. Анализ данных

Для всех количественных данных применена описательная статистика: подсчитаны среднее значение и стандартное отклонение, которые вместе со значением n представлены в итоговых таблицах. Чувствительность примененных статистических критериев и количество животных в исследуемых группах было достаточным для проведения сравнительного анализа количественных данных (расчет объемов выборок проводился тестом «Анализ мощности исследования» программы Statistica v.6.0). Для определения достоверности межгрупповых различий, данные, в зависимости от типа распределения, анализировались параметрическими или непараметрическими критериями. Тип распределения определялся критерием Shapiro-Wilk при 5% уровне значимости. В качестве параметрического критерия применялся однофакторный дисперсионный анализ (ANOVA) с последующим, в случае выявления различий, применением критерия Ньюмена-Кейсла. В качестве непараметрического критерия применялся тест Крускал-Уоллиса с последующим, в случае выявления различий, применением критерия Данна. Различия определялись при 5% уровне значимости. Расчет проводился программой Statistica v.6.0 (StatSoft).

Результаты исследования и их обсуждение

1. Экспериментальные исследования

Острая токсичность

Анализ данных показал, что значение ЛД50 спарфлоксацина лежит выше макси-мальной тестируемой дозы, поскольку введение более высоких доз неосуществимо ввиду ограниченной растворимости спарфлоксацина в максимально допустимом объеме растворителя для мышей и крыс, при данном пути введения. Так, ЛД50, для самцов и самок, составил более 3100 мг/кг (мыши) и более 1400 мг/кг (крысы) для внутрибрюшинного, и более 11500 мг/кг (мыши) и более 4340 мг/кг (крысы) для внутрижелудочного пути введения.

Через 10 мин после однократного введения тестируемого препарата в макси-мальных дозах, у мышей и крыс регистрировали беспокойство, атаксию, тремор головы и конечностей. В период наблюдения (14 дней) гибели животных не регистрировалось, их общее состояние в опытных и контрольных группах не различалось. Патоморфологическое исследование показало, что однократное введение спарфлоксацина в тестируемых дозах не вызывало патологических изменений во внутренних органах. Половых различий в показателях токсичности у мышей и крыс не выявлено (ANOVA).

Хроническая токсичность

У всех животных получавших спарфлоксацин в дозе 285 и 570 мг/кг в период с 20-го по 35-й дни введения регистрировались симптомы кишечной диспепсии. Других симптомов интоксикации не выявлено. Животные оставались активными, опрятными, охотно поедали корм. Статистических отличий в показателях средних выборочных значений массы тела между группами получавшими тестируемое вещество и контролем не выявлено. Смертности животных не было.

Спарфлоксацин независимо от вводимой дозы не оказывал существенного влияния на спонтанную двигательную активность крыс и их эмоциональное поведение (по числу актов уринации и дефекации).

В тестируемых дозах, при ежедневном, в течение 180 дней, внутрижелудочном введении, по данным ЭКГ, спарфлоксацин не вызывал нарушения сердечной деятельности у лабораторных крыс. Статистических различий в исследованных показателях, между группой получавшей максимальную дозу спарфлоксацина и контрольной группой, ни в одном из периодов наблюдения не выявлено.

Спарфлоксацин значимо не влиял на количественное содержание форменных элементов и уровень гемоглобина в крови. Концентрация глюкозы в крови живот-ных получавших спарфлоксацин оставалась в пределах фоновых показателей или данных контрольной группы. Изменения биохимических показателей сыворотке крови зависели от длительности введения и дозы препаратов. Функциональные сдвиги происходили к 60-му дню введения препарата, постепенно нарастали к 180-му дню. Наиболее выраженными они были в группе получавшей максималь-ную дозу спарфлоксацина (570 мг/кг). По окончании восстановительного периода (210 день) изменения в биохимических параметрах обнаруживались только у крыс получавших максимальную дозу спарфлоксацина и проявлялись в увеличении, по сравнению с контролем, уровня активности АЛТ и ЩФ.

Не выявлено неблагоприятного действия спарфлоксацина на функцию почек.

При макроскопическом исследовании внутренних органов различий между группами животных получавших спарфлоксацин в терапевтической для крыс дозе и контролем не обнаружено. В группах получавших спарфлоксацин в максималь-ной дозе (570 мг/кг), на 60-й день введения выявлено увеличение размеров печени, по сравнению с контрольной группой. На 120-й день увеличение размеров печени отмечено при введении спарфлоксацина в дозе 280 мг/кг. Статистический анализ данных средних выборочных значений абсолютной массы печени, полученных распределено по дозам и срокам, показал, что изменения со стороны печени с большой долей вероятности носят обратимый характер.

Раздражающего воздействия тестируемого вещества в месте введения (желудок, верхние отделы тонкого кишечника) при макроскопическом исследовании на всех сроках исследования не выявлено.

Изменения гистологической картины прямо зависели от дозы препарата и сроков его введения. У крыс, получавших спарфлоксацин в терапевтической дозе, патологических изменений, по сравнению с контролем не выявлено. У животных, получавших спарфлоксацин в дозе 285 мг/кг в течение шести месяцев выявлены минимальные изменения в печени (единичные мелкие очаги некрозов из 10–15 клеток, очаги гиалиново-капельной дистрофии гепатоцитов, слабо и умеренно выраженная мезенхимально-воспалительная реакция) и толстом кишечнике (уме-ренно выраженный гиперпластический колит). Через месяц восстановительного периода (на 210-й день) в печени выявлялась только слабо выраженная мезенхи-мально-воспалительная реакция. В толстой кишке выраженность гиперпластичес-ких изменений значительно снизилась. У крыс, получавших спарфлоксацин в дозе 570 мг/кг в течение 180 дней в печени выявлена умеренно-выраженная вакуольная дистрофия гепатоцитов (около 30% клеток), выраженная мезенхи-мально-воспалительная реакция, в мелких желчевыводящих протоках – холестазы, единичные очаги некрозов до 30 клеток. В толстой кишке – морфологическая картина выраженного гиперпластического колита. Через месяц восстановитель-ного периода (на 210-й день) в печени сохранялись дистрофические изменения в 10% гепатоцитов и умеренная мезенхимально-воспалительная реакция. В толстой кишке выраженность гиперпластических изменений значительно уменьшилась.

По результатам токсикологических исследований, спарфлоксацин отнесен к V классу токсичности (практически нетоксичен) и его клиническое применение у человека в течение 3-х месяцев является безопасным. При данной длительности терапии спарфлоксацином, в ряде случаев, могут наблюдаться функциональные нарушения со стороны печени и желудочно-кишечного тракта, которые исчезнут после окончания проведения терапии.

Активность спарфлоксацина в отношении МБТ (чувствительных и устой-чивых к основным ПТП) in vitro, в сравнении с ломефлоксацином

В результате проведенных исследований установлено, что МПК субстанции спарфлоксацина – 0,125–0,5 мкг/мл, МБК – 0,25–1,0 мкг/мл. МПК ломефлокса-цина составила 0,5–1,0 мкг/мл, МБК – 2–4 мкг/мл. В сравнительном аспекте спарфлоксацин, по уровню МПК и МБК, превосходил активность ломефлокса-цина в 4–8 раз.

Сравнительная эффективность различных доз спарфлоксацина в лечении генерализованного туберкулезного воспаления у мышей, вызванного лекарственно-устойчивыми МБТ, в сравнении с ломефлоксацином

К началу периода введения (1-й день) у всех подопытных животных наблю-дались клинические признаки туберкулезного процесса.

В период с 14-го по 45-й дни введения погибло, в общей сложности, 12 под-опытных животных: 10 из контрольной группы и 2 из группы, получавшей спар-флоксацин в дозе 6,5 мг/кг.

Тестируемые дозы спарфлоксацина, по показателю среднего выборочного зна-чения относительной массы легких и селезенки, индексу противовоспалительной эффективности, показателю объемной плотности очагов поражения в легочной ткани, а также результатам микробиологических исследований дозозависимо отли-чались в диапазоне доз от 6,3 мг/кг до 50 мг/кг. Лучшие результаты отмечены при лечении мышей спарфлоксацином в дозах 50 мг/кг и 100 мг/кг. Двукратное увели-чение дозы спарфлоксацина с 50 мг/кг до 100 мг/кг не приводило к значимым качественным изменениям.

Показатель противовоспалительной активности при лечении ломефлоксацином в дозе 400 мг/кг, не отличался от данных, полученных при лечении спарфлоксацином в дозах 12,5 и 25 мг/кг. Показатели высеваемости колоний МБТ из легких и селезенки мышей, получавших ломефлоксацин, сопоставимы с таковыми при лечении животных спарфлоксацином в дозе 12,5 мг/кг.

Таким образом, доза 50 мг/кг является оптимальной для животных для достижения антимикобактериального эффекта. В пересчете на дозу для человека – это 200 мг/кг массы тела.

Pages:     | 1 | 2 || 4 | 5 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»