WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 |   ...   | 6 | 7 || 9 | 10 |

Молекулы CD29 частоиспользуются в качестве дополнительногопризнака покоящихся CD4+CD45RA–CD45R0+ Т-клеток памяти.Для этого маркера отсутствуют четкие указания назависимость его экспрессии от стадииактивации CD4+Т-лимфоцитов. Роль ионов кальция в индукцииэкспрессии этих молекул также до сих порнеизвестна. ИР-фракция значительнообогащена CD4+CD45R0+CD29+Т-клетками по сравнению с исходнойпопуляцией в крови донора. Однако назначительной доле (в среднем околополовины) CD4+CD45RA–CD45R0+ ИР Т-клеток этот антигенотсутствует. Скорее всего, на этой,достаточно поздней стадии активации CD4+ Т-лимфоцитов,происходит полная замена изоформы CD45RA наCD45R0. Вероятно, на этой стадии активациибольшая часть CD4+CD29+Т-лимфоцитов состоит из резистентных кдействию иономицина клеток. Никаких работпо сравнительному анализу функциональныхсвойств CD45R0+CD29–и CD45R0+CD29+CD4+Т-клеток до настоящего времени непроводилось.

Дополнительнымпризнаком покоящихся CD4+CD45RA–CD45R0+ Т-лимфоцитовпамяти человека принято считать присутствие впопуляции CD28+ клеток. Действие иономицина налимфоциты ПКЧ сопровождается значительнымобогащением популяции CD4+CD45RA–CD45R0+CD28+CD29+CD62LlowТ-клетками. Неодинаковая чувствительность к иономицинуCD62Lhigh иCD62LlowТ-лимфоцитов хорошо совпадает собщепринятым подразделением популяцииCD4+ Т-клетокчеловека по путям миграции по организму.Для CD4+Т-лимфоцитов человека имеются указания наразличную чувствительность к апоптозуCD28– иCD28+ клеток– наиболееготовыми к апоптозу клетками принятосчитать CD4+CD95highCD28–клетки. Согласносовременной классификации, наиболееполнофенотип ИР CD4+ Т-клеток человека совпадает спопуляцией«центрального ядра» Т-клеток памяти. В этойпопуляции CD4+Т-лимфоцитов памяти представлены покоящиесяТ-клетки человека, полностью прошедшиезависимую от антигена дифференцировку входе первичного иммунного ответа. Данныеклетки обладают ограниченной способностьюк миграции по высоко-эндотелиальнымвенулам.

ИР Т-клетки были описаныранее для селезенки и лимфатических узловмыши. Использование лабораторных животныхдает редкую возможность проводитьэксперименты методом адоптивногопереноса: выделенные и охарактеризованныепопуляции иммунных клеток доноров (мышей)переносят наивным сингенным реципиентам, вкоторых и проверяют invivo функциональные свойстваперенесенных клеток. Только выделенные ИРТ-клетки из селезенок переболевших иливакцинированных мышей-доноров оказалисьспособны адоптивно переносить наивнымреципиентам невосприимчивость кпоследующему заражению Mycobacterium tuberculosis иNeisseria meningitidis всоответствующих моделях. Приведенныеданные прямо свидетельствуют оспособности ИР Т-клеток к выполнениюосновных функций Т-лимфоцитов памяти,связанных с распознаванием антигеноввозбудителя и быстрого и усиленного ответана них in vivo,приводящего к эффективной защитереципиентов от патогена. Большинствоспецифичных к антигену Т-лимфоцитовселезенки и лимфатических узлов мыши такжесосредоточено в ИР-фракции Т-клеток.

ИР Т-клетки человекасохраняют способность отвечать настимуляцию смесью ФМА с иономицином. Длявыделенных CD4+CD45R0+Т-клеток памяти человека также показана значительноменьшая зависимость пролиферации ипродукцииIL-2 отконцентрации ионов кальция в среде пристимуляции МА к CD3, по сравнению с наивнымиCD4+ Т-клетками того же донора.Следовательно, резистентность к действию иономицинаТ-клеток памяти «не мешает» имосуществлять важнейшие функции Т-клетокпамяти in vivoи in vitro.

Полученныеэкспериментальные данные суммированы ввиде схемы, приведенной на Рис. 30, иллюстрирующей изменениегомеостаза ионов кальция в CD4+ Т-лимфоцитах впроцессе их активации и дифференцировкиin vivo. Даннаясхема носит гипотетический характер, таккак не все стадии активации идифференцировки CD4+ Т-клеток in vivo описаны одинаково подробно.

Рис. 30. Диаграмма,иллюстрирующая возникновениерезистентности к действию иономицина,CD4+Т-лимфоцитов памяти человека в ходезависимой отантигена дифференцировки из наивныхпредшественников как результатнормального развития первичного иммунногоответа in vivo.

Ионы кальция всегдаприсутствуют в организме. Они необходимыдля протекания множества биохимическихреакций в клетках. При дифференцировкеin vivo активированныхТ-лимфоцитов роль ионов кальция постоянноменяется. Все покоящиеся наивные CD4+CD45RA+CD45R0– Т-клеткичувствительны к действию низких дозиономицина. Индукция активации наивныхТ-лимфоцитов всегда приводит к повышениюCa2+ внутриклеток. На этой стадии активации Т-клеткисохраняют чувствительность к действиюиономицина. Более поздние стадии активациизначительноменьше зависят от присутствия ионовкальция, и часть активированных клетокприобретает резистентность к действиюиономицина. Покоящиеся CD4+CD45RA–CD45R0+ Т-клетки памятивообще резистентны к действию иономицина,но это не препятствует осуществлению имисвоих физиологических функций, связанных сраспознаванием антигенов возбудителя и быстрого иусиленного ответа на них invivo, приводящего кэффективной защите организма от патогенов.

ВЫВОДЫ

  1. Разработанный алгоритмоптимизации настройки приборов и созданияпротоколовцитометрического анализа длястандартизации исследований изучаемыхпараметров клеток иммунной системыприменим для работы на большинствепроточных цитометров ведущих фирмпроизводителей.
  2. Последовательное введениелогически ограниченных зон примногоцветном анализе лимфоцитов выявляетналичие отдельных минорных субпопуляций,различие в плотности экспрессии маркероввнутри изучаемой субпопуляции клеток,стадию дифференцировки и степень ихактивации.
  3. Результаты проведенныхскрининговых исследований условно здоровых лиц вразличных регионах России с определениемсреднестатистическиих значений параметровиммунного статуса сопоставимы сосреднестатистическими значениямипараметров иммунного статуса человекаопубликованными в литературе.
  4. Методологический подход,включающий введение впервичную панель скриниговогоисследования иммунной системы антител длявыявления аутореактивных клонов В-клеток (В1, CD19+CD5+), улучшаетдиагностику и мониторинг за пациентами с аутоиммуннымизаболеваниями(аутоиммунный тиреоидит).
  5. В клинико-диагностическойпрактике наиболее предпочтителенчетырехцветный цитометрический анализ посравнению с двух- и трехцветным, что даетвозможность получать достоверные данные,характеризующие как субпопуляционный состав,так и ряд функциональных параметровиммунокомпетентных клеток при уменьшенииколичества образцов и времени,затраченного на получение конечногорезультата.
  6. Предложена и внедрена впрактическую работу четырехцветная панельмоноклональных антител к различнымкластерам дифференцировки лимфоцитовпериферической крови учитывающая степеньактивации различных субпопуляций Т-клеток,В-клеток и NK-клеток:

IgG/IgG/IgGCD45 - изотипическийконтроль;

CD19/CD5/CD27/CD45 - В1, В2, В-клеткипамяти;

CD16/CD56/CD3/CD45 - субпопуляцииNK-клеток;

CD8/CD4/CD3/CD45 - субпопуляцииТ-клеток;

CD8/CD38/CD3/CD45 - активированныеТ-цитотоксические и NK-клетки;

CD4/CD25/HLA-DR/CD45 - активированныеТ хелперы;

CD45RA/CD45R0/CD4/CD45 -активированные Т хелперы и Т-клетки памяти;

TCR-/TCR-/CD3/CD45 - - и -Т-клетки;

CD4/CD25/CD127/CD45 - Т-регуляторныеклетки.

  1. Разработаные критерии применениямногоцветных параметров для иммунофенотипированияклеток, в том числе при использованиипервичной панели для скрининговыхисследований и вторичной панели для болееуглубленного анализа включают: а) анализгистограмм на наличие клеток с измененнойэкспрессией линейных маркеров; б)сравнение полученных значений с референтными; в) анализплотности экспрессии значимых маркеровлимфоцитов; г) оценка степени активациииммунокомпетентных клеток.
  2. Дифференцировка Т-лимфоцитов отнаивных Т-хелперов (CD4+CD7+CD45RA+CD45R0–CD25–CD29–CD62L+CD69–CD95–HLA-DR–)к Т-клеткам памяти (CD4+CD7-CD45RA–CD45R0+CD28+CD29+CD62Llow)сопровождается изменениемрецепторного репертуара и перестройкойсистемы Ca2+-гомеостаза, чтоприводит к возникновению ихрезистентности к действию кальциевыхионофоров.
  3. Обоснованное применениемногоцветного цитометрического анализазначительнорасширяет возможностиклинико-диагностических и научныхисследований иммунной системы человекаи биологических объектов.

СПИСОК РАБОТ,ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ.

Коллективныемонографии и главы в книгах.

  1. Дозморов И.М.,Багаева Л.В., Коваленко Е.И., Кузин И.И.,Литвинов И.С., Луцан Н.И., Луценко Г.В.,Молотковская И.М., Петров Р.В., ПрохороваА.Л., РысеваИ.А., Хайдуков С.В., Сапожников А.М.,Свирщевская Е.В. Альтернативность вдействии гликопептидов бактериальнойстенки на иммунную систему и ее компаненты.// Синтетические иммуномодуляторы. Под ред.Р.В. Петрова,М.: Наука, 1991 С. 38-96.
  2. Nesmeyanov V.A., Khaidukov S.V.,Komaleva R.L., Sumaroka M.V., Litvinov I.S., Dorodnikh E.G., Valyakina T.I., MalakhovA., Brisken K. The molecular mechanism of muramyl peptides' biological activity. //Haemotology and Blood Transfusion, Modern Trends in Human Leukemia IX, R.Neth et al. (Eds.),Springer-Verlag Berlin Heidelberg, 1992, P. 290-293.
  3. Vlasova E.V., Galanina O.E.,Khaidukov S.V., Tuzikov A.B., Tzvetkov Y.E., Shashkov A.S., Nifant’ev N.E., Bovin N.V. Specificityof Workshop mAb S071-S076 towards synthetic selection receptors and cell linesA431 and HL-60. // Leucocyte Typing V. White Cell DifferentiationAntigens. S.F.Schlossman et al. (Eds.), Oxford University Press vol. 1, 1995, P. 1534-1535.
  4. Vlasova E.V., Kovalenko E.I.,Lukin S.V., Khaidukov S.V., Nifant’ev N.E., Piskarev V.E., Bovin N.V. Myeloid Blind Panel biochemical analysis:Specificity of anti-carbohydrate MA submitted to Myeloid cells section. //Leucocyte Typing VI. White Cell Differentiation Antigens, Tadamitsu Kishimoto(Eds.), Garland Publishing, Inc. NY & London, 1997, P.1038-1040
  5. Избранные вопросысовременной проточной цитометрии. // Подред. Хайдукова С.В., Зурочки А.В. Челябинск,Издательство “Челябинскаягосударственная медицинская академия”, 2007, 85С.
  6. Сибиряк С.В.,Хайдуков С.В., Зурочка А.В., Черешнев В.А.Оценка апоптоза в иммунологическихисследованиях: Краткое методическоеруководство. // Екатеринбург, УрО РАН, 2008, 60С.
  7. Вопросысовременной проточной цитометрии.Клиническое применение. // Под ред. Хайдукова С.В.,Зурочки А.В. Челябинск. Издательство"Челябинская государственная медицинскаяакадемия". 2008, 196 С.

Статьи в журналах поперечню ВАК Министерстваобразования и науки РоссийскойФедерации.

  1. Юровский В.В.,Сафонова Н.Г., Хайдуков С.В., Василов Р.Г.,Демин В.В. Синтез и иммунохимическое изучениеантигенной детерминанты H-2d-молекулыглавного комплекса гистосовместимостимыши. //Биоорг. химия, 1986, 12(1), С. 89-99
  2. Гиляревский С.Д.,Хайдуков С.В., Лунева Н.М., Несмеянов В.А.Фенотипирование и функциональнаяхарактеристика линии клеток лимфосаркомыкрысы. // Иммунология, 1987, 2, С. 33-36.
  3. Несмеянов В.А.,Хайдуков С.В., Комалева Р.Л., Андронова Т.М.,Иванов В.Т.. Влияние N-ацетилглюкозаминил-1-4-N-ацетилмурамоил-L-аланил-D-изоглутамина наэкспрессию Ia-антигенов макрофагами мыши. //Биологические мембраны, 1989, 6(3), С.245-249
  4. Sumaroka M.V.,Litvinov I.S., Khaidukov S.V., Golovina T.N., Kamraz M.V., Komal'eva R.L., Andronova T.M., Makarov E.A., Nesmeyanov V.A., Ivanov V.T. Muramyl peptide-binding sites are located inside target cells. // FEBS Lett. 1991, 295(1-3), P. 48-50.
  5. Stratieva-Taneeva P.A.,Khaidukov S.V., Kovalenko V.A., Nazimov I.V., Samochvalova L.V., NesmeyanovV.A. Bispecific monoclonal antibodies to human Interleikin 2 and horseredishperoxidase. //Hybridoma, 1993, 12(3), P. 271-284.
  6. Vlasova E.V., Byramova N.E.,Tuzikov A.B., Zhegis L.S., Rapoport E.М., Khaidukov S.V., Bovin N.V. Monoclonalantibodies directed to synthetic carbohydrate antigen Ley. // Hybridoma, 1994, 13(4), P.295-301.
  7. Pukhalsky A., Toptygina A.,Khaidukov S. Interleukin-2 receptor chain as apossibile target forlow doses of mafosfamide. // Mediators of Inflammation, 1995, 4(3), P.175-180.
  8. Хайдуков С.В.,Комалева Р.Л., Несмеянов В.А. Макрофаги -основная мишень дисахаридсодержащихмурамил-пептидов. // Иммунология, 1995, № 3, С.26-30.
  9. Марквичева Е.А.,Мареева Т.Ю., Хайдуков С.В., Бронин А.С.,НесмеяновВ.А., Зубов В.П. Влияние иммобилизации вгранулы гидрогеля наструктурно-функциональные особенности гибридныхклеток в процессе культивирования. //Биологические мембраны, 1995, 12(2), С. 122-129.
  10. Khaidukov S.V., Komaleva R.L.,Nesmeyanov V.A. N-acetylglucosamine-containing muramyl peptides directly affectmacrophages. // Int J Immunopharmacol. 1995, 17(11), P. 903-911.
  11. Шиян С.Д.,Пухальский А.Л., Хайдуков С.В., ТоптыгинаА.П., Бовин Н.В. Взаимодействие лейкоцитовпериферической крови с a1-кислым гликопротеином, егоуглеводными цепями и неогликоконъюгатами. //Гематалогия и трансфузиология, 1996, 41(2),C. 24-29.
  12. Шебзухов Ю.В.,Токсамбаева С.Ж., Хайдуков С.В., Мысякин Е.Б. Влияниефактора активации тромбоцитов и егосинтетических аналогов на экспрессиюIa-антигеновперитонеальными макрофагами мыши. // ЖурналЭпидемиологии, Микробиологии иИммунобиологии, 1996, № 3, C. 114-117.
  13. Калашникова Е.А.,Хайдуков С.В., Пухальский А.Л. Влияниеразных доз дексаметазона и составаклеточной популяции на продукцию in vitro фактора некрозаопухолей и интерлейкина-6мононуклеарами периферической крови человека.// Бюллетени Экспериментальной Биологии иМедицины, 1996,№ 6, C.667-672
  14. Еремеев В.В.,Лядова И.В., Майоров К.Б., Хайдуков С.В., МорозА.М., Апт А.С.. Получение и частичнаяхарактеристика специфических к антигенаммикобактерий клонов Т-клеток от мышей сгенетическиразличной чувствительностью ктуберкулезу. // БюллетениЭкспериментальной Биологии и Медицины, 1997, 123(4), C. 431-434.
  15. Хайдуков С.В.,Бочарова И.В., Межлумова М.Б., Литвинов И.С.,Яхин Р.Т., Никоненко Б.В. Иммунологическаяпамять, индуцированная Mycobacterium bovis (BCG) у инбредныхмышей. // Бюллетени ЭкспериментальнойБиологии и Медицины, 1997, 123(11), C. 553-555.
  16. Коваленко Е.И.,Саблина М.А., Хирова Е.В., Хайдуков С.В., БовинН.В. Встраивание неогликолипидов в мембрануклеток K562.Модель для изучения углеводзависимоголизиса клеток-мишеней естественнымикиллерами. //Биоорг. Химия, 1998, 24(3), C. 224-228.
  17. Водовозова Е.Л.,Хайдуков С.В., Гаенко Г.П., Бондарчук Т.Н.,Михалев И.И., Гречишникова И.В., Молотковский Юл.Г.Транспортировка цитотоксических липосом кзлокачественным клеткам с помощью углеводныхдетерминант. // Биоорг.
    Pages:     | 1 |   ...   | 6 | 7 || 9 | 10 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»