WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 |   ...   | 2 | 3 || 5 | 6 |   ...   | 10 |

Анализ В-1 и В-2 клеток вПКЧ условно здоровых лиц позволилопределить среднестатистическоеколичество этих субпопуляций. Былопроанализировано 60 условно здоровых лиц, ирезультаты представлены в Таблице 2.

Таблица 2. Среднестатистическое содержаниесубпопуляций В-1 и В-2 лимфоцитов впериферической крови взрослых условноздоровых лиц(N = 60).

Субпопуляции

Содержание

Относительно лимфоцитов (%)

Относительно общих В-клеток(%)

Абсолютное количество (кл/л)

ОбщиеВ-клетки

12 ± 5,0

0,099-0,336 х109

В-1клетки

1,3 ± 0,8

10,8 ± 6,7

0,022-0,115 х109

В-2клетки

10,7 ± 4,2

89,2 ± 7,1

0,081-0,323 х109

B-1 клетки вызываютзначительный интерес за счет того, что ихассоциируютс продукцией аутоантител, в том числе и приаутоиммунной патологии. Значительная роль B-1клеток была отмечена при ревматоидномартрите, системной красной волчанке исиндроме Шегрена. Увеличение количестваCD5+ B-клетокнаблюдали у пациентов, страдающихмиастенией,инсулин-зависимым диабетом и тиреоидитомХашимото. Доля CD5+В-клеток может составлять треть и более от всех В-клеток(Рис. 11).

Следующейсубпопуляцией В-клеток, вызывающейзначительный интерес у исследователей,являются В-клетки памяти. Идентификация CD27 какмаркера памяти B-клеток позволила надежно иэффективно идентифицировать впериферической крови наивные В-клетки(IgM+/CD27-)и B-клетки памяти (CD27+) (Рис. 12).

CD27 антигенпредставляет собой трансмембранныйгликопротеин. Он обнаружен на медуллярных тимоцитах,периферических T лимфоцитах,активированных B лимфоцитах и NK клетках. Еголигандом является молекула CD70.Взаимодействие CD27 с его лигандом(CD70) на T клетках является одним из условийдифференцировки B-клеток в плазматическиеклетки. В свою очередь, существующие данныеуказывают на то, что отсутствие IgD-CD27+ B-клеток памяти взначительной степени объясняет нарушениепродукции иммуноглобулинов, несмотря нафункциональную передачу сигналовмолекулой CD40 у пациентов с синдромом X-связанногогипер-IgM.

Таблица 3. Среднестатистическое содержаниесубпопуляций В-клеток памяти в периферическойкрови взрослых условно здоровых лиц(N = 60).

Субпопуляции

Содержание

Относительно лимфоцитов (%)

Относительно общих В-клеток(%)

Абсолютное количество (кл/л)

ОбщиеВ-клетки

12 ± 5,0

0,099-0,336 х109

В-клеткипамяти

4,3 ± 2,5

31,25 ± 8,45

0,012-0,040 х109

Анализ В-клеток памятив ПКЧ условно здоровых лиц позволилопределить среднестатистическоеколичество этой субпопуляции. Былопроанализировано 60 условно здоровых лиц, ирезультаты представлены в Таблице 3.

Гуморальный иммунныйответ играет значимую роль в устранениикак внутриклеточных, так и внеклеточныхпатогенов. Этот процесс проистекает засчет дифференцировки зрелых B-клеток вплазматические клетки, которыесекретируют большие количества антител.Однако большинство антигенов вызывают иммуннуюреакцию лишь при наличии и участии Т–лимфоцитов. Этоотносится к белковым и клеточнымантигенам, а также к вирусам, которыеобъединяют в понятие "Т-зависимые"антигены.Лишь небольшое количество антигеновспособно вызывать иммунный ответ безучастия Т-клеток. Некоторые бактериальныелипополисахариды при достаточно высокой концентрацииспособны к поликлональной активациизначительной части популяции В-лимфоцитов,т.е. для такой стимуляции антигеннаяспецифичность роли не играет. Линейныеантигены, медленно распадающиеся ворганизме и имеющие организованнуюопределенным образом и частоповторяющуюся детерминанту (полисахаридпневмококков, полимеры D-аминокислот,поливинилпироллидон) также способнынепосредственно стимулироватьВ-лимфоциты. Индуцируемый Т-независимымиантигенамииммунный ответ практически несопровождается формированием клеток памяти. Прииммунном ответе на Т-независимые антигенывырабатываются иммуноглобулины класса Ми эффективность Т-независимого ответа вомного раз ниже. В свою очередь, Т-зависимыеантигены в отсутствии Т-клеток лишены иммуногенности.При ответе на эти антигены требуетсяподключение Т-лимфоцитов. Т-зависимыеантигеныобеспечивают и определяют кооперативноевзаимодействие В- и Т-клеток. В результате такоговзаимодействия происходит переключениесинтеза с IgMна IgG.

Рис. 12.Гистограмма распределения CD27 и CD19 на лимфоцитах периферической крови.Квадрант С2 - субпопуляция В-клеток памяти.

Основываясь насовременных данных, различают два путиобразования различных репертуаров антител: T-зависимыйпуть в герминальных центрах и T-независимыйпуть вне них. Точная функция второго пути игенерирование IgM+CD27+B-клеток в настоящее время окончательно невыяснена. Однако, IgM+CD27+B-клетки играют существенную роль вгуморальномответе против T-независимых патогеновтаких, как инкапсулированные бактерии(Weller S., et al., 2004).

Рис. 13 Гистограммыраспределения CD3, HLA-DR иCD19 налимфоцитахпериферической крови. CD3-CD19+В-клетки (квадрант А-J1),CD3-HLA-DR+ клетки (квадрантБ-J1).

Активация зрелыхB-клеток с T-зависимым антигеном приводит кобразованиюплазматических клеток двумя независимымипутями дифференцировки. Активированные Bклетки могут войти в экстрафолликулярныепролиферативные центры, где они быстродифференцируются в короткоживущиеплазматические клетки, секретирующиеIgM. С другойстороны,активированные B-клетки могут попасть вгерминальный центр, где происходятразличные молекулярные перестройки, такие, каксоматические гипермутации, переключениеизотипов Ig иотборвысокоафинных вариантов.Антиген-селективные В-клеткигерминального центра являютсяпредшественниками двух типов клеток(высокоафинных В-клеток памяти идолгоживущих плазматических клеток),которые являются ответственными за долгосрочнуюгуморальную устойчивость (Calame K., 2001; Banchereau J., et al., 1992).

Помимо перечисленныхвыше молекул рецепторного ико-рецепторного комплекса, на поверхности В-клетокэкспрессируются антигены МНС класса II (HLA-DR). Онипринимают участие в представлениеантигенов, а В-клетки являютсяантиген-представляющими клетками. ОднакоHLA-DR антигены также представлены наактивированных Т- и NK-клетках. Этим объясняетсянесовпадение относительного количества CD3-CD19+ В-клетки и CD3-HLA-DR+ клетки при некоторых патологиях(Рис. 13).

Рис. 14. Гистограммыраспределения CD19, CD5и CD27 налимфоцитах периферической крови. А – анализ по зоне СD19позитивных клеток (зона D). Б – распределение СD19 позитивныхклеток находящихся в зоне D. Квадрант Е1 - В-1клетки (CD19+CD5+), квадрант Е4 -В-клетки памяти (CD19+CD27+).

Оценка относительногои абсолютного количества В-клеток являетсяодним из важных диагностических признаков.При воспалительных заболеванияхнаблюдаютсяколебания количества В-клеток взависимости от типа и стадии иммунного ответа.

Все изложенное вышеприводит к тому, что наиболее полнуюхарактеристику относительного количестваB-клеток и ихсубпопуляционного состава можно получить приследующей комбинации МА: CD19/CD5/CD27/CD45.

В связи с тем, чтомолекула CD19представляет собой линейно специфический маркерВ-клеток и не встречается на другихпопуляциях клеток периферической крови, данныйантиген рекомендуется для количественнойоценки общей популяции B-клеток. Однако, CD5 и CD27 такжеэкспрессируются на поверхности Т-клеток.Гейтирование по зоне СD19 позитивных клеток,как показано на Рис. 14, позволяет четколокализовать как В-1 клетки (CD19+CD5+),так и В-клетки памяти (CD19+CD27+).

Таким образом, внастоящее время оценка и характеристикаВ-клеточной популяции лимфоцитов является нетолько важной задачей с точки зрениянаучныхинтересов, но и позволяет врачу-клинициступолучить дополнительную информацию о возможномналичии аутоиммунного процесса. Одновременно,что очень важно, современные подходыпозволяют оценить эффективность ужесформировавшегося ответа по наличиюВ-клеток памяти. Расширение потенциальныхвозможностей современной проточнойцитометрии значительно увеличиваютточностьоценки всех этих диагностически-значимыхмоментов. Применение многоцветногоокрашивания и многоэтапного гейтированияпозволяют провести многопараметрическийанализ клеток периферической крови с высокойточностью и достоверностью в одной пробепациента. Данный подход значительно облегчаетинтерпретацию полученных результатованализа и позволяет судить офункционировании В-клеточного звенаиммунной системы больных приразнообразных патологических состояниях.

Идентификация NK-клеток(натуральных киллеров).

Среди большихгранулярных лимфоцитов (LGL, Large Granular Lymphocytes)выделяют отдельную популяцию клеток,получившую название натуральных киллеров или NK-клеток (Natural Killer). NK-клеткиявляются важным компонентом врожденнойиммунной системы за счет наличияцитолитической активности против клеток-мишенейи способности продуцировать цитокины.Первоначально они были описаны наосновании их функциональной способностиуничтожать клетки некоторых опухолейгемопоэтического происхождения безпредшествующей стимуляции. Таким образом, одной изосновных функций данной субпопуляцииклетокиммуной системы является защитасобственного организма отвидоизмененного «своего».

Как уже было сказановыше, NK-клетки являются носителями двухосновныхфункций. Первая - это лизис опухолей иинфицированных вирусами клеток. Вторая - регуляцияврожденного и адаптивного иммунныхответов за счет секреции хемокинов (CCL3, CCL4,CCL5 и XCL1) и цитокинов (GM-CSF,TNF-, и IFN-).

Способность NK-клетоквзаимодействовать и убивать опухолевые, ноне нормальные клетки была описана, апозже и объяснена рядом авторов. Этотэффектпроисходит за счет несколькихспециализированных рецепторов, распознающих молекулыMHC классаI, которыеэкспрессируются на нормальных клетках. Этирецепторы формируются на NK-клетках приассоциации молекул CD94 с молекулами семейства NKG2 (CD159).

NK-клетки являютсясубпопуляцией лимфоцитов наиболеечувствительной к физиологическим ипсихологическим стрессам. В настоящеевремя доказано выраженное воздействие высокихфизических нагрузок на NK-клетки. Ихцитолитическая активность увеличиваетсяпри нарастании физической нагрузки иуменьшаетсяпосле ееокончания.

В периферической кровиNK-клеткисоставляют от 5 до 20 % циркулирующих лимфоцитов. Подругим данным, среди лимфоидной популяциипериферической крови человека NK-клетки составляетприблизительно 10-15%. Существует взаимосвязь междуизменением активности NK-клеток и ихколичеством с клиническими признакамизаболеванийу людей. Так, относительное количествоNK-клеток и ихактивность существенно изменяется нетолько при опухолевых процессах и вируснойинфекции, но и при гнойном воспалении,нарушении функций центральной нервной системы(ЦНС), аутоиммунных заболеваниях и такдалее(Whiteside T.L. et al., 1994).. Вероятно,что в результате применения более тонких и точныхметодов исследований, таких как проточнаяцитометрия и многопараметрический анализ,будут выявлены и другие изменения всубпопуляциях этих клеток при иныхпатологиях.

Рис. 15. Гистограмма распределениялимфоцитов периферической крови с использованиеммоноклональных антител против CD3 и CD16+CD56, меченых FITC и PE. На даннойгистограммеотображены только CD45 позитивные лимфоциты.Квадранты:I1- NK-клетки; I2 – T-NK-клетки; I3 – негативные по CD3 и CD16+CD56 лимфоциты;I4 - T- клетки.

Для выявления NK-клеток средидругих лимфоцитов используют МА,распознающие различные маркеры,экспрессируемые на их поверхности. Однакомногие поверхностные молекулы NK-клетокпредставлены и на других субпопуляцияхлимфоцитов, и это накладывает своиособенности на идентификацию натуральных киллеров.В связи с этим для их локализации средидругих лимфоцитов используют уникальнуюкомбинацию из нескольких маркеров, такихкак, CD56 и CD16 (Рис. 15). С другой стороны, NK-клетки неэкспрессируют такие линейные маркеры, как CD3, CD14 иповерхностные Ig и это также используется при ихлокализации.

Одним из основныхмаркеров используемых для выявленияNK-клетокявляетсямолекула CD16. Антиген CD16 представляет собойнизко-аффинный рецептор для IgG (FcRIII).Данный антиген существует в двух различныхформах, кодируемых двумя различными генами:FcRIIIA (илиIII-2) и FcRIIIB (или III-1). Генетическаяразнородность CD16 приводит кальтернативным путям ассоциации молекул с мембранойклеток. Первая трансмембранная форма (FcRIIIA, 50-65 kDa) экспрессируетсяна NK-клетках,моноцитах и макрофагах. Вторая форма(FcRIIIB, 48 kDa), ассоциированнаяс мембраной за счетгликозилфосфатидилинозитола (GPI), экспрессируется только нанейтрофилах.

Другим антигеномявляется молекула CD56. Данный антигенумеренно экспрессируется на субпопуляциях клетокпериферической крови, таких как большиегранулярныелимфоциты и всех клетках с NK активностью.Молекула CD56 также экспрессируется отдельнымисубпопуляциями T лимфоцитов (Dargent J.L.,et al., 1998).

Pages:     | 1 |   ...   | 2 | 3 || 5 | 6 |   ...   | 10 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»