WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 | 2 ||

Исходя из интенсивности окрашивания, суммарное количество вещества, экстрагировавшегося из 1 мл образца и разделившегося на тонкослойной хроматографии, соответствует ~110 мкг фосфолипидов, но анализ фосфора в экстракте препарата выявил ~9,4 мкг фосфолипидов. В использованной системе растворителей, триглицериды с различным жирнокислотным составом, как в тестовых системах, так и в церебролизине, распределились по всей пластине (тристеарат глицерина – внизу, триолеат глицерина–наверху (рис.4).

Рис. 4 Тонкослойная хроматография экстракта из 1 мл церебролизина.

Было определено, что церебролизин содержит следующие классы фосфолипидов: диацилфосфоэтаноламин, диацилфосфосерин, а также тристеарат глицерина. Концентрация фосфолипидов составляет ~10 мкг/мл. Можно предположить, что неиндентифицированные фракции соответствуют триглицеридам. Это предположение косвенно подтверждается данными газовой хроматографии, согласно которым в 1 мл церебролизина может содержаться до 100 мкг триглицеридов. По полученным данным, их содержание в исследуемом аппарате достоверно соответствует 97 мкг/мл триглицеридов.

Исследования позволили установить присутствие в препарате фосфолипидов и, предположительно, ганглиозидов. Ганглиозиды широко представлены в плазматической мембране нейронов и максимально концентрируются в области синапсов, обеспечивая синаптическую пластичность.

Протективная роль церебролизина: микроэлементы. Изучение эффектов церебролизина осуществлялось на основе неврологического тестирования, влияния препарата на содержание микроэлементов и уровни экспрессии иРНК металлотионеинов 1 и 2 в головном мозге крыс при введении препарата в условиях очаговой ишемии головного мозга. Влияние церебролизина на МЭ состав головного мозга животных изучался при интраназальном и внутрибрюшинном введении препарата.

Исследование позволило отметить интересный феномен аккумуляции цинка в обонятельных луковицах, гипоталамусе и лобной коре у крыс получавших церебролизин, особенно при интраназальном введении. Интраназальное введение сульфата цинка привело к накоплению цинка в обонятельной луковице. Интраназальное назначение 0,12 М раствора цинка сульфата (10 дневный курс) с последующим десятидневным курсом интраназального введения церебролизина приводило к статистически значимому трёхкратному возрастанию количества цинка в лобной коре и гипоталамусе и к 4-кратному увеличению содержания цинка в обонятельной луковице ( Рис.5).

* - достоверно значимое различие между показателями (р<0,05)

Рис. 5 Содержание цинка в обонятельной луковице у крыс.

Внутрибрюшинное назначение церебролизина вызывало почти полуторное увеличение содержания цинка в лобной коре и гипоталамусе. Более выраженное накопление цинка при последовательном назначении цинка и церебролизина может определяться стимуляцией цинк-транспортных белков в мозге (предположительно, металлотионеинов и/или специфических цинк-транспортеров). Цинк важен для синтеза и внутримолекулярной стабилизации эндорфинов, гипоталамических рилизинг-факторов, нейроактивной субстанции Р, нейропептида Y.

Содержание лития в гипоталамусе и обонятельной луковице было достоверно выше у животных, получавших терапию церебролизином (261,6+5,44 мкг/кг - в обонятельной луковице; 1534,2+12,31 мкг/кг – в гипоталамусе). Литий является нейромодулирующим элементом, способствующим выживанию клеток в условиях ишемии.

Содержание марганца увеличивалось в 2,5-раза в обонятельной луковице и в 1,2-раза в гипоталамусе. Марганец присутствует в составе пируваткиназы и в рибосомальном синтезе нейроспецифических белков и миелиновых липопротеидных комплексов.

Содержание селена увеличивалось в 1,2 раза в коре лобной доли мозга, в 3,8-раза в обонятельной луковице и в 1,8-раза в гипоталамусе. Наблюдаемое увеличение содержания селена в обонятельной луковице, гипоталамусе и лобной коре при назначении церебролизина отражает, вероятно, антиоксидантные и нейропротективные эффекты церебролизина.

Микроэлементы чрезвычайно важны и для анти-оксидантного действия церебролиина: Se-цистеин формирует активные центры глутатионпероксидазы и тиоредоксинредуктазы; Zn и Mn металл-содержащие кластеры в супероксиддисмутазы.

Таким образом, введение церебролизина в организм подопытных животных увеличивает содержание нейроактивных микроэлементов цинка, лития, марганца и селена в тканях головного мозга. Степень накопления этих микроэлементов в разных отделах мозга зависит от способа введения церебролизина. Наиболее эффективным для накопления микроэлементов в обонятельной луковице являлось интраназальное введение препарата. Установленное в настоящем исследовании избирательное накопление цинка, марганца, селена и лития в различных отделах мозга может выступать важным компонентом фармакодинамики церебролизина.

Протективная роль церебролизина: металлотионеины. Применение препарата церебролизин оказывало значительное влияние на уровни экспрессии иРНК металл-транспортных белков металлотионеинов. В коре крыс подвергавшихся хронической ишемии, уровень иРНК МТ-1, определявшихся с помощью количественной полимеразной цепной реакции увеличился в 8 раз, а МТ-2 в 7,8 раз. В то же время, применение церебролизина на той же модели и в тех же условиях увеличило экспрессию иРНК металлотионеинов 1 и 2 в 16.2 и 16.5 раз, соответственно. Металлотионеины представляют собой эффективный метод защиты клеток от АФК и, следовательно, оказывают значительное влияние на выживаемость клеток (Park J.D., 2001; West A.K. et al, 2008). Увеличение уровней металлотионеина оказывает положительное влияние на функционирование головного мозга через замедление кальциевого каскада эксайтотоксичности и элиминации свободных радикалов. Таким образом, полученные результаты свидетельствуют, что церебролизин индуцирует экспрессию иРНК МТ-1 и МТ-2, что способствует нейропротекторному действию препарата.

ВЫВОДЫ

  1. Пептидная фракция церебролизина состоит из пептидов массой до 10000 Да, при этом основная масса пептидов находится в диапазоне 2000-5000 Да.
  2. В пептидной фракции церебролизина идентифицированы мотивы тиролиберина, энкефалина, глутатиона и коллагена.
  3. Церебролизин содержит фосфолипиды из класса сфингмомиелинов: фосфотидилсерин и фосфотидилэтаноламин, а также тристеарат глицерина в количестве около 10 мкг/мл, а также триглицериды в количестве около 97 мкг/мл. Определены следующие жирные кислоты: стеариновая (~45,0 мкг/мл), миристоиловая, пальмитиновая (~25,0 мкг/мл), пальмитолеиновая (~5,6 мкг/мл), олеиновая (~3,5 мкг/мл), линолевая (~1,5 мкг/мл) и арахидоновая (~1,1 мкг/мл).
  4. Церебролизин способствует значительному накоплению лития в гипоталамусе и, в несколько меньшей степени, в обонятельных луковицах у крыс; умеренному накоплению селена в обонятельных луковицах, гипоталамусе и лобной коре; ведёт к возрастанию содержания цинка и марганца в лобной коре, гипоталамусе и в обонятельных луковицах.
  5. Интраназальный способ введения церебролизина приводит к большей, в сравнении с внутрибрюшинным введением, компенсации неврологического дефицита.
  6. Применение церебролизина, на модели экспериментальной хронической ишемии мозга у крыс, увеличивает экспрессию иРНК металлотионеинов 1 и 2 в 16.2 и 16.5 раз, соответственно, что в 2.1 и 2.3 раза выше по сравнению с группой контроля.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Основные теоретические положения диссертации могут быть использованы на лекциях и практических занятиях, проводимых на кафедрах фармакологии и клинической фармакологии в государственных образовательных учреждениях высшего профессионального образования. Возможно применение результатов исследования в экпериментальной медицине для разработки средств доставки элементов и пептидов в мозг, а так же для реконструкции поврежденных и синтеза новых опорных коллагеновых и других белков. Кроме того, данные о составе оригинального церебролизина могут применяться для отличия от фальсификата препарата в деятельности Роспотребнадзора, правоохранительных органов и учреждениях судебно-медицинской экспертизы.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

  1. Kataev A.S., Kudrin A.V., Gromova O.A.. Trace element status of the brain in rats following cerebrolysin administration // Journal of Trace Elements in Biology and Medicine, - 2003, Vol,19, №5, P.43-47.
  2. Катаев А.С., Громова О.А., Кудрин А.В., Волков А.Ю.. Изменение микроэлементного гомеостаза в некоторых отделах головного мозга у крыс при назначении препарата Магне В6 // Неврология и психиатрия им. С.С.Корсакова, 2003, - №5, 47-49.
  3. Катаев А.С., Громова О.А., Кудрин А.В., Волков А.Ю.. Изменение содержания цинка в головном мозге крыс при интраназальном введении церебролизина // Неврология и психиатрия им. С.С. Корсакова - 2004, №1, С 63-64.
  4. Громова О.А., Катаев А.С., Третьяков В.Е., Машковский С.А., Гусев Е.И., Валькова В.А., Никонов А.А., Глибин А.И.. Олигопептидная мембранная фракция церебролизина// Неврология и психиатрия им. С.С. Корсакова - 2006, №3, С 93-98.
  5. Sotnikova NY, Gromova, OA, Kataev А.S.. Trace element status of the brain in rats following cerebrolysin administration // Journal of Trace Elements in Biology and Medicine, 2004, Vol.21,N3, P.3-5.
  6. Громова О.А., Катаев А.С., Сотникова Н.Ю., Кудрин А.В.. Протективная роль церебролтзин-индуцированной продукции металлотионеинов-1 и -2 в ответ на развитие церебральной очаговой ишемии у крыс // Журнал Цитокины и воспаление, 2005, №1, 47-49.
  7. Gromova ОА, Kataev А.S., Sotnikova NYu, Kudrin, A.V.. Аntioxidant properties of cerebrolysin // Rus. J. Of Immunology//2004, №1, Р. 16-19.
  8. Громова О.А., Гусев Е.И., Никонов А.А., Катаев А.С.. Витаминная активность препарата церебролизин // Cудинииi захворювання головного мозку, журнал Украiнськоi асоцiацi боротьби з iнсультом, 2006, №3, с. 50-57.
  9. Катаев А.С., Громова О.А., Красных Л.П., Гусев Е.И., Никонов А.А.. Витаминный состав церебролизина. // сб. трудов Съезд неврологов Ярославль, 2006, 29 мая- 2 июня.
  10. Катаев А.С.. Влияние интраназального введения церебролизина и сульфата цинка на распределение кобальта в головном мозге крыс. // Материалы научно-практической конференции студентов и молодых ученых ИвГМА «Неделя науки – 2006», 2006 г..
Pages:     | 1 | 2 ||






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»