WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 | 2 || 4 | 5 |   ...   | 9 |

В ходе моделирования хронического ЭТ выявлены сходные изменения в обеих моделях, более выраженные при сочетанном введении ЛПС и ТХМ. На 30-е сут хронического ЭТ при окраске по Маллори в аденогипофизе преобладали базофилы с просветлениями в цитоплазме, в ряде случаев - пикнотическими ядрами. В некоторых аденоцитах выявлено набухание, явления вакуольной дегенерации. По мере увеличения длительности эксперимента увеличивалось количество хромофобных клеток. Нарушения в аденогипофизе на 90-е сут ЭТ характеризовались более выраженными стромально-сосудистыми изменениями: на фоне увеличения периваскулярного отека и полнокровия обнаружен набухший эндотелий с признаками повреждения. Клеточные элементы распределены неравномерно, среди хромофильных клеток превалировали базофилы, в отдельных клетках которых обнаружены признаки дегенерации и вакуолизации цитоплазмы.

При морфометрии аденогипофиза выявлено достоверное снижение объемной доли (ОД) базофилов к 60-м сут хронического ЭТ (в 1,4 раза – при моделировании ЭТ с развитием гепатофиброза; в 1,45 раза – при ЭТ с развитием нефросклероза). На 90-е сут экспериментального ЭТ происходило дальнейшее уменьшение объемной доли базофилов по сравнению с количеством базофилов в аденогипофизе крыс контрольной группы (в 1,7 и в 1,3 раза соответственно, P<0,05). При этом по мере увеличения длительности ЭТ у животных обеих экспериментальных групп увеличивалось количество вакуолизированных базофилов. Обращало на себя внимание достоверное увеличение ОД соединительной ткани (Р<0,05) и ОД ацидофильных аденоцитов на всем протяжении эксперимента (табл. 2).

Таблица 2

Морфометрические показатели аденогипофиза у крыс при хроническом ЭТ

(модель с преимущественным поражением печени, M±m)

Объемная доля, %

Контрольная группа

Сроки эксперимента

30 сут

60 сут

90 сут

Ацидофилы

Базофилы

Хромофобы

Строма

Сосуды

39,03±1,66

21,00±1,09

32,07±0,4

2,1±0,11

5,8±0,13

38,14±1,58

18,06±1,38

31,2±2,13*

6,1±0,09*

6,5±0,11*

47,05±1,75*#

14,81±1,08*#

17,58±1,18*#

7,1±0,11*

13,46±0,18*#

45,34±1,47*

12,11±1,71*#

19,64±1,11*

9,8±0,14*#

13,11±0,09*

Примечание: здесь и далее * - Р<0,05 по сравнению с крысами контрольной группы; # - Р<0,05 по сравнению с предыдущим сроком эксперимента

Иммуногистохимичексое исследование выявило прирост экспрессии эндотелиальной нитроксидсинтазы (NOS-3) в клетках аденогипофиза (в 7,3 раза при хроническом ЭТ с преимущественным поражением печени, в 5,11 раз - при ЭТ с преимущественным поражением почек). Достоверно увеличилась доля эндотелиоцитов, гиперэкспрессирующих NOS-3 (в 3,87 и в 2,39 раза), и доля клеток с умеренной экспрессией фермента (в 2,95 и в 1,93 раза, соответственно). Был показан прирост экспрессии TRAIL в аденоцитах, а при исследовании каспазы-3 было зарегистрировано увеличение доли иммунопозитивных клеток до 80% среди всех аденоцитов (P<0,05) на 90-е сут эксперимента. Нарастание экспрессии маркеров ФНО-зависимого апоптоза в динамике хронического ЭТ убедительно свидетельствует о достоверном участии данного механизма апоптоза в рассматриваемом патологическом процессе.

При изучении ультраструктуры на 30-е сут ЭТ изменения были обнаружены преимущественно в адренокортикотропоцитах аденогипофиза. В них уменьшалось число везикул, митохондрии были увеличены в размерах, с просветлением матрикса и небольшим количеством крист. Цистерны ЭПС были значительно расширены с образованием вакуолеоподобных полостей. В остальных аденоцитах выраженных изменений не отмечалось. В дальнейшем уже во всех выявленных аденоцитах обнаруживалось расширение цистерн на фоне снижения числа секреторных гранул. Уменьшение размеров митохондрий, просветление митохондриального матрикса, деградация крист и увеличение секрета выявлены на фоне вакуолей, образованных цистернами ЭПС.

При морфометрии электронограмм выявлялось увеличение фактора формы ядра, указывающее на увеличенную инвагинацию кариолеммы и свидетельствующее об активации внутриядерных процессов трансляции. Уменьшение ОД митохондрий и отношения яркости матрикса митохондрий к яркости цитоплазмы в системе RGB по мере увеличения длительности хронического ЭТ являлось косвенным отражением внутриклеточного энергодефицита. ОД везикул к окончанию эксперимента (90-е сут) уменьшилась в 1,75 раза по сравнению с группой сравнения (P<0,05).

Изменения в гипофизе, как органе центральной гормональной регуляции, при хронических дисметаболических процессах и интоксикации, описывались достаточно подробно [Филаретов А.А., 1996; Мхитаров В.А. с соавт., 2000; Акмаев И.Г., 2001, 2007; Григоренко А.А. с соавт., 2002; Fernandes G.A. et al., 2002; Beishuizen A., Thijs L.G., 2003]. Применительно к концепции настоящего исследования важным является выявленное сочетание более выраженного повреждения и гибели базофилов аденогипофиза при наличии гипертрофии ацидофилов, в совокупности рассматриваемое как субстрат гипофизарных механизмов гормонального дисбаланса при хроничсеком ЭТ.

Морфологические изменения надпочечников и дисбаланс гормонов адреналовой оси у крыс при хроническом эндотоксикозе.

В надпочечниках крыс на 30-е сут хронического ЭТ (более – в пучковой и сетчатой зонах коркового вещества) выявлялись многочисленные эндокриноциты с мелкоглыбчатым распадом ядерного хроматина, резкой вакуолизацией и делипоидизацией цитоплазмы. Участки повреждения были окружены зонами рыхлой соединительной ткани, с признаками гиалиноза и кальциноза. Обнаружено уменьшение объема всех зон коркового вещества. Увеличение ОД мозгового вещества было обусловлено выраженной гипертрофией клеток, в цитоплазме которых наблюдалась резкая вакуолизация цитоплазмы. К 90-м сут развивалась выраженная атрофия коркового вещества, максимально измененной выглядела сетчатая зона. Наблюдаемое увеличение ОД соединительной ткани в корковом веществе, была расценено как адаптационная перестройка.

При морфометрии выявлены различия в интенсивности повреждения эндокриноцитов между зонами коркового вещества и мозговым веществом надпочечника. ОД клубочковой зоны надпочечника на 30-е сут ЭТ уменьшалась, а в последующем превышала аналогичные значения в контрольной группе в 1,2 и 1,46 раза, соответственно (P<0,05). Средний объем ядер эндокриноцитов увеличивался в 1,57 раза, а ядерно-цитоплазматичское отношение оказывалось повышенным только на относительно ранних сроках развития ЭТ, а к 90-м сут не имело достоверных отличий от показателей в контрольной группе. Сопоставление данных изменений позволяет трактовать их как проявление функционального напряжения клеток клубочковой зоны с развитием истощения по мере развития хронического ЭТ.

Аналогичные, но выраженные в большей степени изменения регистрировались в пучковой зоне надпочечника (табл. 3).

Таблица 3

Морфометрические показатели пучковой зоны коркового вещества

надпочечников крыс при хроническом ЭТ

(модель с преимущественным поражением печени, M±m)

Показатели

Контрольная группа

Сроки эксперимента

30 сут

60 сут

90 сут

ОД зоны, %

Средний объем ядер, мкм3

Ядерно-цитоплазма-тическое отношение

18,22±0,08

23,19±0,48

0,125±0,011

12,30±0,08*

23,00±1,19

0,171±0,017*

19,01±0,15*#

19,58±1,09*#

0,123±0,010#

25,39±0,16*#

16,43±0,94*#

0,078±0,009*#

Сетчатая зона коркового вещества при количественном анализе была наименее измененной. Ее ОД в общем объеме паренхимы органа практически не изменялась, а колебания среднего ОД ядер имели ту же динамику, что и в других зонах коркового вещества. Увеличение ядерно-цитоплазматического отношения в сетчатой зоне сохранялось до 60-х сут, что свидетельствовало о более поздних сроках развития декомпенсации и истощения этих клеток при хроническом ЭТ.

В мозговом веществе надпочечника регистрировались качественно отличные изменения. ОД мозгового вещества к 30-м сут ЭТ была увеличенной, а затем уменьшалась. Параллельно увеличивались ОД ядер и ЯЦО, что свидетельствовало о постепенном нарастании функциональной активности сохранившихся медуллярных эндокриноцитов на поздних сроках эксперимента. Обращало на себя внимание неоднородность повреждения ткани надпочечника: зоны с наличием относительно высокого процента клеток с повышенной функциональной активностью и низким содержанием дистрофически измененных и/или некротизированных клеток мозаично чередовались с участками выраженных альтеративных изменений.

При радиальной морфометрии эндокриноцитов основные патологические изменения заключались в значительном снижении вариабельности интенсивности окраски по секторам и уменьшении тангенса угла кривой яркости цитоплазмы. Интенсивность выявленных изменений увеличивалась в ряду пучковая зона < клубочковая зона < сетчатая зона.

При иммуногистохимическом выявлении эндотелиальной нитроксидсинтазы в надпочечниках объемная плотность иммунопозитивных клеток при хроническом ЭТ была выше, чем в контроле, они совпадали по локализации с участками максимального повреждения и стромальной пролиферации. Начиная с 30-х сут эксперимента, в надпочечниках выявлялось увеличение экспрессии TRAIL и каспазы-3, оно было максимально выражено на 60-е сут хронического ЭТ, независимо от модели и сохранялось до окончания опыта.

При ультрамикроскопическом изучении эндокриноцитов пучковой зоны коркового вещества надпочечника на 30-е сут хронического ЭТ обнаружено резкое снижение количества липидосодержащих везикул. Оставшиеся везикулы были электронно-прозрачными, при этом часть из них было увеличена в размерах и вакуолизирована. На 60-е сут везикулы в спонгиоцитах оказывались значительно меньше, они были более однородными по размеру, неравномерно заполнены умеренно электронно-плотным содержимым (концентрирующимся в центре) и окруженным светлым ободком. Увеличение количества рибосом свидетельствовало об усилении синтетических процессов в клетке. К окончанию эксперимента (90-е сут) часть эндокриноцитов не содержало везикул, в других спонгиоцитах внутреннее пространство везикул было заполнено содержимым слабой электронной плотности. В премембранном слое везикул обнаруживались мелкие гранулы, выстилавшие везикулы изнутри, по типу «ожерелья». Обращало на себя внимание уменьшение количества крист в митохондриях и просветление митохондриального матрикса. Уменьшение ОД везикул зарегистрировано на ранних сроках эксперимента (30-е сут) в 1,53 раза по сравнению с контрольной группой и достоверное снижение ОД везикул на 90-е сут ЭТ (в 2,36 раз по сравнению с предыдущим сроком эксперимента) в сочетание с уменьшением активности митохондрий являлось доказательством истощения эндокриноцитов.

Итак, в условиях хронического ЭТ наблюдается длительно существующее повреждение эндокриноцитов, преимущественно коркового вещества органа, приводящее в итоге к атрофии надпочечников и частичному стромальному замещению утраченного объема паренхимы. Частично эти процессы реализуются через ФНО-опосредованный апоптоз эндокриноцитов NO-зависимые механизмы индукции стромальной пролиферации

При исследовании гормонов адреналовой оси у животных с хроническим ЭТ было зарегистрировано незначительное увеличение уровня АКТГ на 30-е сут с последующим повышением до 90-х сут эксперимента (рис. 2).

При этом наибольший скачок АКТГ на 90-е сут – в 6,9 раза, был обнаружен у животных модели хронического ЭТ с преимущественным поражением почек, в то время как у крыс с преимущественным поражением печени уровень изучаемого гормона увеличивался в 5,5 раза (P<0,05).

Рис. 2. Гормоны адреналовой оси в сыворотке крови крыс при хроническом ЭТ. За единицу принято значение показателя в контрольной группе животных.

Уровень кортизола в крови на 30-е сут хронического ЭТ был максимальным и превышал показатель в контроле в 4,39 раза, затем начинал падать, так что на 90-е сут эксперимента, несмотря на высокое содержание АКТГ, уровень кортизола был в 1,6 раза ниже, чем у животных контрольной группы (P<0,05).

Pages:     | 1 | 2 || 4 | 5 |   ...   | 9 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»