WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     || 2 | 3 |

На правах рукописи

Каландаров Зафар Саидович

ТЕРАПЕВТИЧЕСКАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ

ПРОБИОТИКА СУБТИЛБЕН

ПРИ КОЛИБАКТЕРИОЗЕ ТЕЛЯТ

16.00.03 – ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата ветеринарных наук

Душанбе – 2006

Работа выполнена в Таджикском научно-исследовательском ветеринарном институте Академии сельскохозяйственных наук Республики Таджикистан и Таджикском аграрном университете.

Научный руководитель:

доктор ветеринарных наук, профессор, академик ТАСХН Сатторов И. Т.

Официальные оппоненты:

доктор ветеринарных наук Муминов А. М.

кандидат биологических наук

Каримов М. Ш.

Ведущая организация: Среднеазиатский ящурный институт.

Защита диссертации состоится 15 сентября 2006 г. в 10 ч на заседании диссертационного совета Д 050.001.01 при Таджикском научно-исследовательском ветеринарном институте Академии сельскохозяйственных наук Республики Таджикистан по адресу: 734005, г. Душанбе, ул. Каххорова, 43.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Таджикского научно-исследовательского ветеринарного института по адресу: 734005, г. Душанбе, ул. Каххорова, 43.

Автореферат разослан 10 августа 2006 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета,

кандидат ветеринарных наук

Турдиев Ш. А.

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы. Ведущее место среди причин гибели молодняка крупного рогатого скота (КРС) занимают желудочно-кишечные болезни, наносящие огромный ущерб животноводству.

Поэтому в условиях интенсификации животноводства проблема повышения эффективности лечебно-профилактических мероприятий при желудочно-кишечных болезнях различной этиологии (незаразные, бактериальные, вирусные, при воздействии микотоксинов и др.) является острой для современной ветеринарии (Архангельский И. И. и др., 1960; Анохин Б. М., 1980; Коромыслов Г. Ф., 1980; Аликаев В. А. и др., 1981; Самохин В. Т., 1981; Соколова Н. Л. и др., 1982; Урбан В. П., 1985; Воронин Е. С. и др., 1990; Шахов А. Г., 2000; Гаффаров Х. З. и др., 2002 и др.).

Для терапии и профилактики болезней желудочно-кишечного тракта (ЖКТ) широко применяют антибиотики, сульфаниламиды, нитрофураны и другие химиопрепараты, бесконтрольное использование которых имеет вредные последствия: отрицательное влияние на формирование иммунитета и характер иммунологических реакций, нефротоксическое и гепатотоксическое действия, неблагоприятное влияние на нервную и кроветворную системы, аллергия и дисбактериозы, возникновение устойчивости микроорганизмов к этим лекарственным средствам.

В результате развивающегося дисбактериоза изменяются процессы кишечного микробного пищеварения, усиливается перистальтика, меняются консистенция химуса и значения рН кишечного содержимого, нарушается водно-солевой обмен. Обезвоживание тканей и интоксикация организма приводят к гибели животных.

Накопление антибиотикорезистентных бактерий в организме животных и окружающей среде снижает эффективность лечебных и профилактических мероприятий и приводит к тяжелым экологическим последствиям.

В настоящее время для профилактики и терапии желудочно-кишечных болезней и повышения продуктивности молодняка сельскохозяйственных животных широко применяют различные симбиотические микроорганизмы, среди которых наиболее перспективными признаны молочнокислые, пропионовокислые, бифидобактерии, Bacillus subtilis и др., проявляющие избирательную антагонистическую активность в отношении патогенной кишечной флоры, эффективно и быстро восстанавливающие микробиоценоз кишечника (Антипов В. А., 1991; Панин А. Н. и др., 1993, 1999; Паршин П. А. и др., 1997; Малик Н. И. и др., 2000, 2001 и др.).

Основные преимущества пробиотиков в сравнении с другими антимикробными препаратами – высокая эффективность, отсутствие побочных действий и экономичность (Шахназаров В. Ю., 1990; Проскурин Ю. Н., 2000; Стечин Б. Т. и др., 2005 и др.).

Установлено, что использование пробиотиков из представителей эндогенной микрофлоры для лечения и профилактики энтеритов животных недостаточно эффективно из-за слабой противобактериальной активности этих препаратов, которая значительно выше у препаратов на основе спорообразующих бактерий B. subtilis.

Вышеизложенное обусловливает актуальность настоящей работы, целью которой явились разработка эффективного при колибактериозе телят пробиотического препарата на основе местных штаммов B. subtilis и исследование физико-химических и биологических свойств этого препарата.

Для достижения поставленной цели решены следующие задачи:

1. Подобрать местные штаммы B. subtilis, обладающие высокой противомикробной активностью, для создания на их основе пробиотика.

2. Разработать эффективный пробиотический препарат на основе этих штаммов, изучить их антагонистическую активность и исследовать физико-химические и биологические свойства препарата.

3. В экспериментальных и производственных условиях определить терапевтическую эффективность пробиотика субтилбен при колибактериозе новорожденных телят.

Научная новизна. Подобраны штаммы B. subtilis и изучена их антибактериальная активность в отношении музейных штаммов и изолятов возбудителей инфекционных болезней ЖКТ животных.

Разработан пробиотический препарат субтилбен на основе местных штаммов B. subtilis (Патенты TJ 390, TJ 391), отработаны методы изготовления и контроля препарата, изучены его антимикробные свойства, безвредность и стабильность.

Определена профилактическая и лечебная эффективность субтилбена при колибактериозе телят, отработан рациональный способ применения препарата.

Практическая ценность. На основании полученных результатов пробиотик субтилбен предложен в качестве противобактериального препарата.

Материалы диссертации вошли в нормативную документацию на препарат:

- Инструкцию по изготовлению и контролю иммунобиотика субтилбен для профилактики и лечения желудочно-кишечных и респираторных болезней животных и пчел (утв. Главным управлением ветеринарии (ГУВ) Министерства сельского хозяйства (МСХ) Республики Таджикистан (РТ) 25.11.2004 г.);

- Технические условия на иммунобиотик субтилбен (утв. ГУВ МСХ РТ 25.11.2004 г.);

- Наставление по применению иммунобиотика субтилбен для профилактики и лечения желудочно-кишечных и респираторных болезней животных и пчел (утв. ГУВ МСХ РТ 25.11.2004 г.);

- Решение 26-го заседания Межправительственного совета по сотрудничеству в области ветеринарии СНГ от 24.11.2004 г. (Душанбе) о практическом использования препарата субтилбен в ветеринарной практике СНГ.

Основные положения диссертационной работы, выносимые на защиту:

- результаты подбора штаммов B. subtilis для создания пробиотического препарата и изучения их противомикробной активности;

- технология изготовления и методы контроля физико-химических и биологических свойств субтилбена;

- результаты изучения антибактериальной активности и безвредности субтилбена;

- результаты экспериментальных и производственных испытаний эффективности препарата при колибактериозе телят.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены на заседаниях ученого совета Таджикского научно-исследовательского ветеринарного института (ТаджНИВИ) (2003 – 2005 гг.); республиканских конференциях и семинарах-совещаниях (Душанбе, 2003 – 2006 гг.); Х Международном симпозиуме ветеринарных диагностов и Семинаре по биотехнологии МЭБ (Италия, 2001 г.); Международной научно-практической конференции «Биолого-экологические проблемы заразных болезней диких животных и их роль в патологии сельскохозяйственных животных и людей» (Покров, 2002 г.); Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы болезней животных в современных условиях» (Душанбе, 2003 г.), посвященной 60-летию ТаджНИВИ; Второй Международной научной конференции «Мониторинг распространения и предотвращения особо опасных болезней животных» (Самарканд, 2004 г.); 26-ом заседании Межправительственного совета по сотрудничеству в области ветеринарии СНГ (Душанбе, 2004 г.).

Публикации. По результатам исследований опубликованы 8 научных работ, получены 2 патента РТ.

Структура и объем диссертации. Работа состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, практических предложений, списка литературы и приложения.

Диссертация изложена на 114 страницах, иллюстрирована 9 таблицами и 9 рисунками. Список литературы содержит 255 источников. В приложение включены материалы, подтверждающие внедрение результатов исследования в практику.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Работа выполнена в 2000 – 2005 гг. в лабораториях вирусологии ТаджНИВИ и микробиотехнологии Таджикского аграрного университета (ТАУ) в соответствии с республиканской научно-технической программой «Разработать и внедрить новые высокоэффективные комплексные препараты по профилактике и терапии респираторно-кишечных инфекций молодняка сельскохозяйственных животных» на 2001 – 2005 гг., зарегистрированной в Национальном патентно-информационном центре (НПИЦентр) РТ (№ госрегистрации 00000967).

Научно-производственные опыты, апробация и производственная проверка полученных результатов проведены в 8 животноводческих хозяйствах РТ.

Диагностические исследования. Колибактериоз диагностировали на основании анализа эпизоотологических данных с учетом клинических признаков болезни, патологоанатомических изменений и результатов бактериологического исследования патологического материала от больных, павших и вынужденно убитых больных телят.

Животные. Эксперименты проводили на 196 белых мышах (массой 18 – 20 г), 81 кролике породы шиншилла (массой 2,5 – 2,7 кг), 265 телятах черно-пестрой породы (массой 31 – 33 кг), производственные испытания – 590 телятах черно-пестрой породы (массой 31 – 33 кг). Разброс в экспериментальных группах по исходной массе тела не превышал 10%.

В работе применяли разработанный ТаджНИВИ пробиотик субтилбен, представляющий собой комплекс взвеси микробных клеток местных штаммов (BS TJ 09, BS TJ Д 24, BS TJ Д 26) B. subtilis и минеральных и растительного веществ.

Культивирование B. subtilis проведено при участии Бобоева Д. А. по общепринятым и специально разработанным методам.

При разработке субтилбена использовали 5 штаммов B. subtilis, выделенных из ЖКТ новорожденных телят (BS TJ 06, BS TJ 07, BS TJ 08, BS TJ 09, BS TJ 10), и 2 штамма из коллекции ТАУ (BS TJ Д 24, BS TJ Д 26).

Для стандартизации и контроля качества субтилбена, а также изучения его стабильности при хранении разработаны методы качественного и количественного контроля препарата.

Физико-химические свойства субтилбена

Внешний вид, наличие механических примесей, плесени определяли визуально при рассмотрении отобранных образцов при хорошем естественном освещении на белом фоне на расстоянии 25 – 30 см от глаз.

Концентрацию водородных ионов (рН) 10% водной суспензии определяли потенциометрически (ГФ XI, вып. 1, с. 175).

Массовую долю влаги определяли по ГОСТу 24061-89.

Биологические свойства субтилбена

Однородность определяли методом микроскопии.

Подсчет количества микробных клеток (м.к.) B. subtilis. Культуру разводили физиологическим раствором в 10 – 15 раз и заправляли суспензией подготовленную камеру Горяева, в 5 квадратах которой под микроскопом определяли количество м.к. и рассчитывали их число в 1 см3.

Определение количества жизнеспособных клеток B. subtilis. В пробирку, содержавшую 1 г субтилбена добавляли 9 см3 стерильного физиологического раствора, после тщательного перемешивания 0,5 см3 суспензии переносили во вторую пробирку с 4,5 см3 физиологического раствора, из которой 0,5 см3 разведенной суспензии – в третью, из третьей – в четвертую, из четвертой – в пятую, из пятой – в шестую пробирку с 4,5 см3 физиологического раствора.

Из последней (шестой) пробирки по 0,5 см3 суспензии пипеткой засевали в шесть чашек Петри с агаром СБД (комплекс минеральных и растительного компонентов), колебательными движениями распределяя суспензию по всей поверхности агара. Культивировали 36 ч при 37оС, после чего учитывали результаты исследования (определяли количество больших и малых по диаметру колоний).

Стерильность субтилбена определяли по ГОСТу 28085-89.

Для исключения контаминации микоплазмами производили посевы проб субтилбена на среду Эдварда (жидкую, полужидкую и твердую), обогащенную 20% сыворотки крови лошади, 10% дрожжевого экстракта, 0,5% глюкозы с добавлением фенол-рота в конечной концентрации 0,001%.

Изучение антагонистических свойств субтилбена в сравнительном аспекте (контроль – бактерин-SL) проводили методом двукратных серийных разведений в жидкой и плотной питательной средах на музейных штаммах (6) и изолятах E. coli (4), S. dublin (3), P. multocida (4), Pr. vulgaris (2), выделенных от больных диареей телят в животноводческих хозяйствах РТ.

Идентификацию сальмонелл и пастерелл, изучение антагонистической активности B. subtilis в отношении этих возбудителей проводили при участии Хасанова Н. Р.

Динамику антагонистической активности субтилбена в отношении односуточной бульонной культуры E. coli (концентрация – 1 млрд м.к./мл) определяли методом двукратных серийных разведений в жидкой питательной среде (контроль – силикат алюминия с примесью силикатов магния и кальция).

Токсические свойства субтилбена

Безвредность субтилбена изучали в соответствии с «Методическими указаниями по определению токсических свойств препаратов, применяемых в ветеринарии и животноводстве» (М., 1988).

Pages:     || 2 | 3 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»