WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!

Pages:     ||
|

Сроки облучения (мес)

5

7

10

Количество животных

1

0,37

50

9

9

9

2

100

9

9

9

3

500

9

9

9

4

0,7

50

9

9

9

5

100

9

9

9

6

500

9

9

9

7

0,8

50

9

9

9

8

100

9

9

9

9

500

9

9

9

10

2,7

50

9

9

9

11

100

9

9

9

12

500

9

9

9

13

БИОКОНТРОЛЬ

9

9

9

ВСЕГО

351

В связи со статической неопределенностью периодичности работы персонала в условиях воздействия фактора при моделировании, животные находились в свободном режиме передвижения, и количество импульсов, подаваемых в неделю на каждом уровне воздействия, составляло 50, 100 и 500, независимо от их дробности. Хронический эксперимент продолжался 10 месяцев. Забор биологического материала производили через 5, 7 и 10 месяцев после воздействия. Эвтаназию животных осуществляли декапитацией с предварительной наркотизацией. Протокол экспериментов в разделах выбора, содержания животных и выведения из опыта был составлен в соответствии с принципами биоэтики и правилами лабораторной практики, которые представлены в «Международных рекомендациях по проведению медико-биологических исследований и использованию животных» (1985) и приказе МЗ РФ № 267 от 19.06.2003г «Об утверждении правил лабораторной практики».

СМГ шейного утолщения фиксировали в жидкости Карнуа с последующей заливкой в парафин после стандартной процедуры обезвоживания.

Для обзорных целей серийные фронтальные парафиновые срезы СМГ толщиной 5-6 мкм окрашивали гематоксилином-эозином, позволяющим визуально (630) оценить состояние кровенаполнения сосудов микроциркуляторного русла СМГ.

Для идентификации морфофункциональных типов нейронов (10 полей зрения при 630) по классификации В.П. Федорова (2002) срезы окрашивали толуидиновым синим по методике Ниссля. Выделяли три типа нейронов. Нормохромные нейроны (НХН), для которых характерна овальная или округлая форма, их перикарионы упакованы мелкодисперсным базофильным веществом, которое является ультрамикроскопическим эквивалентом гранулярной эндоплазматической сети. Ядро округлое, светлое, с четким и центрально расположенным ядрышком сферической формы. Этот тип клеток отражал состояние покоя. Гипохромные нейроны (ГПОХН) представляют собой клетки со светлоокрашенной, вакуолизированной нейроплазмой. Ядра светлые, обычно увеличены в объеме и могут располагаться эксцентрично, а также ядрышко. По этим признакам можно косвенно судить о повышении функциональной активности нейронов, которое может развиваться вследствие слишком быстрого удаления из клетки продуктов специфического синтеза. Гиперхромные нейроны (ГПХН) – темные, с повышенной хромностью перикариона. Ядро имеет неровные границы, ядрышко трудно различимо на фоне глыбок хроматина. Они характеризуются сниженной функциональной активностью.

Для оценки нейроглии (НГ) была разработана и использована методика дифференцированного подсчета глиоцитов вокруг перикарионов нейронов для каждого морфофункционального типа (на 100 клеток,630). На основе отношения среднего числа мантийных глиоцитов к каждому нейрону определяли перинейрональный индекс.

Дополнительная оценка направленности синтетических возможностей нервных клеток проводилась по методике А.Н. Яцковского (1987) основанной на выявлении функциональных типов хроматина (эу- и гетерохроматина).

Коэффициент поражаемости определялся по хромности нейронов при окраске по методике Ниссля. В 10 полях зрения (х630) проводили количественную оценку по программе Image J. Достаточность выборки определяли с помощью метода аккумулированных средних (Е.С. Вентцель, 1999).

Совместное использование в диссертационной работе нескольких подходов: морфологических, математических и статистических позволило адекватно оценить воздействие факторов и установить, что выбранные подходы являются наиболее перспективными и эффективными методами исследования. Описательная статистика включала расчеты математического ожидания, стандартной ошибки, эксцесса, асимметрии, минимального и максимального значения ряда данных (Д.К. Соколов, 1974; С. Гланц, 1999; В.А. Медик, М.С. Токмачев, Б.Б.Фишман, 2000; В.Н. Чернов с соавт., 2003; К.С. Жижин, 2007; Г.Г. Автандилов, 2007 и др.). Парный двухвыборочный t-тест Стьюдента использовался для проверки гипотезы о различии средних для двух выборок, когда имеется естественная парность наблюдений. Корреляционный анализ позволил выявить глубину связей между морфологическими эквивалентами функции и определить целостность ответа СМГ на воздействие. Регрессионный анализ позволил установить множественные, нелинейные связи между параметрами иЭМП и морфологическими критериями и на основании этого построить математическую модель степени участия иЭМП в формировании биоэффекта. На основе дисперсионного анализа показана вариабельность реагирования морфологических критериев СМГ для выявления их чувствительности в условиях воздействия иЭМП с различными параметрами. (В.И. Шумаков, 1973; В.Т. Куприй, 1989; В.М. Зайцев с соавт., 2003; И.Э. Есауленко с соавт., 2006 и др.). Фотосъемка гистологических препаратов проведена с использованием компьютерного комплекса анализаторов изображений на базе Leica DMR.

Результаты исследования и их обсуждение

  1. Морфофункциональное состояние СМГ контрольных животных в возрастной динамике

У контрольных животных с возрастом выявлено снижение активности спинномозговых ганглиев по всем морфологическим критериям.

  1. Морфофункциональное состояние СМГ в условиях 5-тимесячного воздействия иЭМП с различной ПНТ и периодичностью импульсов

При 5-тимесячном воздействии иЭМП происходило достоверное усиление активности СМГ, о чем свидетельствовало достоверное повышение количества ГПОХН на фоне достоверного снижения НХН, возрастание НГ у всех морфофункциональных типов нейронов при всех параметрах иЭМП и достоверное преобладание ядер с эухроматином в ГПОХН. При ПНТ 2,7 кА/м2 и периодичности 100 и 500 и/н было установлено расширение капиллярной сети. При остальных параметрах иЭМП отмечалось умеренное кровоснабжение органа.

  1. Морфофункциональное состояние СМГ в условиях 7-мимесячного воздействия иЭМП с различной ПНТ и периодичностью импульсов

Семимесячное воздействие иЭМП приводило к перераспределению морфофункциональных типов нейронов СМГ в сторону достоверного повышения числа активно функционирующих клеток при максимальном снижении «покоящихся», что отчетливо выражало повышение функциональной активности. Отмечалось усиление кровоснабжения при всех параметрах воздействия иЭМП. Между большинством морфологических критериев установлены сильные положительные и отрицательные корреляционные связи

  1. Морфофункциональное состояние СМГ в условиях 10-тимесячного воздействия иЭМП с различной ПНТ и периодичностью импульсов

Воздействие иЭМП в течение 10 месяцев с разными периодичностями и/н и ПНТ приводило к перераспределению морфофункциональных типов нейронов СМГ в сторону достоверного повышения числа ГПХН за счет достоверного снижения количества НХН и ГПОХН. Это вызывало снижение функциональных потенций СМГ. Но при периодичности 100 и/н и ПНТ 0,7 и 0,8 кА/м2 наблюдался эффект «окна» по отношению к морфофункциональным типам нейронов, который проявлялся в отсутствии сдвигов в содержании нейронов СМГ. Отмечалось снижение кровоснабжения при всех параметрах воздействия иЭМП. Между большинством морфологических критериев установлены сильные положительные и отрицательные корреляционные связи.

  1. Математическая модель степени участия параметров иЭМП в формировании биоэффектов СМГ.

На основе регрессионного анализа установлено, что между параметрами иЭМП: продолжительностью воздействия, ПНТ, и/н и динамикой изменения изучаемых морфологических критериев существуют множественные, нелинейные связи. Был проведен сравнительный анализ выявленных изменений от сочетанного воздействия изучаемых параметров иЭМП и построена математическая модель для каждого морфологического показателя с целью выявления степени участия иЭМП в формировании биоэффектов.

В качестве инструментального метода использовался дисперсионный анализ, поскольку изучаемые морфологические показатели имели различную размерность. Тактика проведения анализа состояла в выявлении статистически значимых зависимостей каждого из изученных показателей и установлении наиболее чувствительных.

Динамика НХН в условиях эксперимента достоверно зависела от всех параметров воздействия. С увеличением срока воздействия наблюдалось снижение числа НХН, что, видимо, являлось следствием изменения функциональной активности СМГ в соответствии с возрастом. Величина коэффициента детерминации подтверждала довольно высокую активность НХН в математической модели и составляла 68,5%.

Уравнение регрессии, описывающее динамику воздействия изучаемых параметров на изменение числа НХН, выглядит следующим образом:

НХН = 134,591 + -3,76721 время + -0,020594 количество и/н +

-1,16692 ПНТ

Динамика НГ-НХН проявлялась достоверными изменениями и находилась под влиянием продолжительности действия ПНТ иЭМП и с их увеличением, возрастала глия. Оценка сочетанного действия факторов свидетельствовала об их статистически достоверном (р=0,0000) влиянии. А также, величина коэффициента детерминации подтверждала довольно высокую активность НГ-НХН в математической модели и составляла 32,3%.

Уравнение регрессии, описывающее динамику воздействия параметров на изменение НГ-НХН, выглядит следующим образом:

НГ-НХН = 4,99579 + -0,127553 время + -0,0001536 количество и/н +-0,1073 ПНТ

Динамика ГПОХН, из результатов линейного регрессионного анализа проявлялась изменением числа ГПОХН и испытывала зависимость от ПНТ и длительности воздействия иЭМП. Очевидно, что увеличение продолжительности воздействия ЭМ-фактора вызывало повышение ГПОХН СМГ в эксперименте. Таким образом, можно предположить реализацию эффекта «время-доза». Модель сочетанного воздействия параметров иЭМП на ГПОХН имеет достаточный уровень значимости. В моделировании морфофункционального состояния СМГ коэффициент детерминации составлял 80,6%.

Уравнение регрессии, описывающее динамику воздействия изучаемых параметров на состояние ГПОХН, выглядит следующим образом:

Pages:     ||
|



© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.