WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 || 3 | 4 |   ...   | 5 |
  1. В условиях патогенетически значимых экзогенных влияний (курение) сочетанное носительство функционально измененных генотипов, содержащих минорные аллели по интронным и экзонному полиморфизмам гена р53 и G399A полиморфизму гена репарации XRCC1, способствует формированию немелкоклеточной формы РЛ у лиц зрелого возраста.
  2. Носительство комбинации функционально полноценных генотипов w/w-Arg/Arg-w/w (мажорные аллели) по интронным и экзонному полиморфизмам гена р53 повышает риск возникновения НМРЛ в пожилом возрасте.
  3. Комбинация гетерозиготных генотипов гена р53 по 3, 6 интрону и 4 экзону w/dup16-Arg/Pro-w/m ассоциирована с более высокими показателями общей выживаемости больных НМРЛ, чем комбинация гомозиготных генотипов w/w-Arg/Arg-w/w.

Реализация и апробация работы. Основные положения диссертации докладывались и обсуждались на итоговой научно-практической конференции «Актуальные вопросы здравоохранения регионов Сибири, г.Красноярск (2005); научно-практической конференции НИИ онкологии ТНЦ СО РАМН «Иммунология на рубеже веков: к 75-летию со дня рождения академика РАМН Н.В. Васильева», г. Томск (2005); четвертой Всероссийской конференции молодых ученых в рамках 13 международного конгресса по приполярной медицине г. Новосибирск (2006); 16 ежегодном конгрессе Европейского респираторного общества, г. Мюнхен (2006); региональной конференции молодых ученых имени академика РАМН Н.В. Васильева, г. Томск (2007); 12 ежегодном конгрессе Международного сообщества по изучению рака легкого, г. Сеул (2007).

Публикации. Результаты исследования опубликованы в 23 печатных работах, отражающих основные положения диссертации.

Объем и структура работы. Диссертационная работа изложена на 147 страницах машинописного текста, состоит из введения, трех глав, включающих обзор литературы, материалы и методы исследования, главы с изложением собственных результатов, заключения, выводов, списка цитируемой литературы. Библиографический указатель включает 201 источник, из них 60 отечественных, 141 зарубежных. Работа иллюстрирована 47 таблицами и 6 рисунками.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Характеристика групп больных

В исследование были включены 170 пациентов с патологией легких, из них 136 больных НМРЛ, 34 больных МРЛ (таблица 1). Больные РЛ T1-4N0-3M0-1 находились на стационарном лечении в торако-абдоминальном отделении ГУ НИИ онкологии ТНЦ СО РАМН (зав. отделением – д.м.н. профессор С.А. Тузиков). Из всех обследованных 93% (158) составили мужчины, 7% (12) - женщины, возрастной интервал составил от 42 до 80 лет (60,2±8,6 лет).

Таблица 1. Характеристика групп обследованных

Группы

РЛ

НМРЛ

МРЛ

Контроль

n

170

136

34

198

Пол, м/ж

158/12

125/11

33/1

198/0

Возраст, M±m

60,2±8,6

60,2±8,6

58,7±7,7

58,0±4,4

Примечание: РЛ - рак легкого, НМРЛ - немелкоклеточный рак легкого, МРЛ - мелкоклеточный рак легкого.

Гистологическое исследование проводилось в отделении патологической морфологии ГУ НИИ онкологии ТНЦ СО РАМН (руководитель отделения – д.м.н. профессор В.М. Перельмутер). Стадия онкологического процесса определялась в соответствии с четвертым пересмотром Международной классификации опухолей по системе TNM (Женева, 1987), а также вторым пересмотром (UICC, 1992) и дополнением к классификации TNM (UICC, 1993), одобренным Американским комитетом по раку (AJCC). Формирование групп осуществлялось после постановки диагноза на основании клинического, морфологического, эндоскопического и рентгенологического обследования.

В качестве популяционного контроля использовали выборку здоровых лиц европеоидного происхождения, проживающих в г. Новосибирске (188 практически здоровых мужчин, средний возраст – 58,6±6,8 лет), данные любезно предоставлены М. И. Воеводой (г.Новосибирск). Во все обследованные группы больных и в контрольную группу здоровых были включены индивидуумы только европеоидного происхождения, поскольку существуют значительные межрасовые различия в распределении исследуемых генотипов и аллелей (Martinson et al., 1997; Yudin et al., 1998; Коршунова Т.Ю. и соавт., 2004).

Работа проводилась с соблюдением принципов добровольности и конфиденциальности в соответствии с «Основами законодательства РФ об охране здоровья граждан» (указ Президента РФ от 24.12.1993 № 2288). Получено разрешение этического комитета НИИ онкологии ТНЦ СО РАМН.

Методы исследования

Геномная ДНК была выделена из цельной венозной крови с использованием протеиназы К с последующей фенольно-хлороформной экстракцией (Дейвис К., 1990). Оценка полиморфизмов генов проводилась с помощью ПЦР и ПЦР-ПДРФ-анализа. Характеристика исследованных локусов и условий их анализа представлены в таблице 2 и 3.

Визуализация продуктов ПЦР-ПДРФ реакции проводилась методом гель-электрофореза. Продукты амплификации или рестрикции анализировали в агарозном или полиакриламидном геле. Использовали 2% агарозный гель при получении продуктов реакции свыше 300 п.н.о., 7% полиакриламидный гель - при получении продуктов ПЦР реакции от 300 п.н.о. и 10% - менее 300 п.н.о.

Таблица 2. Характеристика полиморфизмов изучаемых генов

Ген

Локус

Локализация

в гене

Тип

полиморфизма

Белок

CCR5

3p21

экзон

делеция

32 н.о.

Хемокиновый рецептор

XRCC1

19q13.2

экзон 10

SNP,

транзиция

G399A

Белок эксцизионной репарации

p53

17p13.1

интрон 3

Дупликация

16 н.о.

Белок-онкосупрессор

экзон 4

SNP,

трансверсия

G199C

интрон 6

SNP,

транзиция G13494A

Таблица 3. Условия анализа полиморфизма локусов изучаемых генов

Ген

Последовательность

праймеров

Метод, фермент рестрикции

Температура отжига, С

CCR5

GAAGGTCTTCATTACACCTG

AGAATTCCTGGAAGGTGTTС

ПЦР

50

XRCC1

GCCCCGTCCCAGGTAAG

AGCCCCAAGACCCTTTCACT

ПЦР-ПДРФ

MspI

55

p53

интрон 3

TGGGACTGACTTTCTGCTCTT

TCAAATCATCCATTGCTTGG

ПЦР

57

экзон 4

CTGGTAAGGACAAGGGTTGG

ACTGACCGTGCAAGTCACAG

ПЦР-ПДРФ

BstU1

63

интрон 6

TGGCCATCTACAAGCAGTCA TTGCACATCTCATGGGGTTA

ПЦР-ПДРФ

MspI

57

Статистическая обработка данных проводилась с использованием пакета прикладных программ «Statistica for Windows 6.0». При сравнении частот генотипов использовался стандартный критерий 2 Пирсона, при условии, когда объем выборки не превышал 5 случаев, использовали критерий 2 с поправкой Йетса и критерий Фишера. Подсчитывали отношение шансов (OR - odds ratio) для оценки ассоциации между определенными генотипами и риском развития заболевания по стандартной формуле OR=a/b x d/c, где a и b – количество больных, имеющих и не имеющих мутантный генотип, соответственно, и d и с – количество человек в контрольной группе, имеющих и не имеющих мутантный генотип. OR указан с 95%-ным доверительным интервалом (Confidence interval CI) (Лакин Г.Ф., 1989; Флейс Д., 1989).

Для всех изученных полиморфных вариантов генов в выборках популяционного контроля и пациентов распределение генотипов соответствовало ожидаемому при равновесии Харди-Вайнберга.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Мультифункциональный белок р53 является ключевым участником процессов поддержания генетической стабильности и сбалансированного действия систем регуляции деления клеток. В настоящее время активно изучают взаимосвязь с ЗНО полиморфизма гена р53 в кодирующем районе, затрагивающем ДНК-связывающий домен (4 экзон), однако данные различных авторов неоднозначны. В популяции Западной Сибири полиморфизм 4 экзона изучался В.В. Ляховичем с соавторами (1997), была показана ассоциация Arg аллеля с РЛ и РЖ (рак желудка). Сведений по интронному полиморфизму в российской популяции нет. На первом этапе мы изучили распределение генотипов гена р53 (3 интрон, 4 экзон, 6 интрон) в группах больных раком легкого и здоровых лиц для выяснения их взаимосвязи с раком легкого в зависимости от возраста и курения. Пациенты были разделены на группы зрелого (40-59 лет) и пожилого возраста (60-74 лет), согласно рекомендациям ВОЗ (1963 г.) (Ревнивых И.Ю., 2003), а также в соответствии с морфологической формой РЛ (НМРЛ и МРЛ).

Распределение частот генотипов 4 экзона гена р53 у больных раком легкого представлено в таблице 4.

Таблица 4. Частота генотипов 4 экзона гена р53 у больных РЛ

Группы обследованных

Частота генотипов, %

Arg/Arg

Arg/Pro

Pro/Pro

здоровые

46

(88/192)

43

(80/192)

11

(24/192)

РЛ

54

(95/177)

39

(69/177)

7

(13/177)

МРЛ

50

(17/34)

41

(14/34)

9

(3/34)

НМРЛ

55

(75/136)

38

(52/136)

6

(9/136)

Больные НМРЛ зрелого возраста

курящие

40

(19/48)

54*

(26/48)

p<0,000

6

(3/48)

некурящие

80

(4/5)

0

20

(1/5)

Больные НМРЛ пожилого возраста

курящие

73*

(27/37)

p<0,004

27

(10/37)

0

некурящие

54

(7/13)

38

(5/13)

8

(1/13)

Pages:     | 1 || 3 | 4 |   ...   | 5 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»