WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 || 3 | 4 |   ...   | 5 |

Не более 0,5%

6

Частиц, не проходящих сквозь отверстие с диаметром 7мм

-

Не более 3%

7

Частиц, проходящих сквозь отверстие с диаметром 0,5мм

-

Не более 3%

8

Микробиологическая чистота

Категория 4а

Категория 4а

9

Радиоактивная чистота

Соотв. требованиям ОФС 42-001-03

Соотв. требованиям ОФС 42-001-03

Кроме того, определена микробиологическая и радиоактивная чистота анализируемого сырья.

Полученные показатели включены в проекты НД на «Кактуса крупноцветкового побеги свежие» и «Кактуса крупноцветкового побеги».

3. Фитохимическое изучение побегов кактуса крупноцветкового и разработка методов их стандартизации

Изучение качественного состава биологически активных веществ

На основании проведенных исследований с помощью качественных реакций в сырье кактуса обнаружены аминокислоты, полисахариды, фенолкарбоновые кислоты и флавоноиды. Последние группы БАВ представлены в следовых количествах.

Для изучения полисахаридов кактуса крупноцветкового применены методы ТСХ, ВЭЖХ и С13-ЯМР-спектроскопии.

Качественный состав свободных сахаров в свежесобранном и высушенном сырье определяли с помощью ВЭЖХ-анализа на колонке ALTECH OA-1000 Organic Acids размером 6.5х300 мм, используя в качестве подвижной фазы – 0,005 N раствор серной кислоты. В результате по временам удерживания идентифицированы такие сахара как мальтоза, лактоза, галактоза, глюкоза, ксилоза, рамноза, арабиноза (табл.2)

Таблица 2

Характеристика ВЭЖХ-хроматограммы свободных сахаров побегов кактуса крупноцветкового

Название

Время удерживания, мин

Соотношение сахаров в пробе,%

Свежее сырье

Высушенное сырье

мальтоза

11,18

6,27

4,14

лактоза

11,48

7,94

7,85

галактоза

11,75

12,63

12,18

глюкоза

13,45

5,21

7,49

ксилоза

14,08

9,84

10,17

рамноза

15,61

9,72

5,32

арабиноза

15,97

52,11

43,7

Путем осаждения 96 % спиртом из предварительно очищенного от липофильных веществ водного извлечения из побегов кактуса крупноцветкового получена сумма полисахаридов. Для определения её мономерного состава проведен гидролиз с помощью трифторуксусной кислоты (ТФУ) в запаянных ампулах при температуре 100-105°С в сушильном шкафу в течение 2 ч.

В гидролизате полисахаридного комплекса методом ТСХ в системе растворителей – этилацетат:спирт изопропиловый:вода (5:3,2:1,6) установлено наличие глюкуроновой кислоте (Rf около 0,58); рамнозы (Rf около 0,73); мальтозы (Rf около 0,37); галактозы (Rf около 0,51); лактозы (Rf около 0,30); и глюкозы (Rf около 0,54).

С использованием метода денситометрии определено количественное содержание некоторых идентифицированных сахаров (табл.3).

Таблица 3

Результаты количественной оценки состава сахаров, обнаруженных в гидролизате полисахаридного комплекса побегов кактуса крупноцветкового

п/п

Наименование моносахарида

Количество мг в 100 мг полисахаридного комплекса

1

Глюкоза

1,15

2

Галактоза

3,00

3

Мальтоза

0,37

4

Рамноза

Следы

5

Лактоза

Следы

6

Кислота глюкуроновая

0,21

Наряду с этим, полисахаридный комплекс кактуса крупноцветкового был охарактеризован с помощью метода С13ЯМР-спектроскопии. Спектры снимали в растворе диметилсульфоксида (ДМСО), D2О и смеси D2О и натрия гидроксида (табл.4).

Таблица 4

Химические сдвиги полисахаридных комплексов, выделенных из побегов кактуса крупноцветкового

Анализируемый раствор полисахаридного комплекса

С1

С25

С6

Другие

Полисахариды побегов кактуса крупноцветкового в ДМСО

107,5

104,4

99,6

84,0 81,1 77,7 76,6 74,5 71,8 69,2

60,8

172,7 52,9 38,8 178,9


Полисахариды побегов кактуса крупноцветкового в D2О+NaOH

107,5

104,4

99,6

84,0 81,1 77,7 76,6 74,5 71,8 69,2

60,8

172,7 52,9 38,8 178,9


Полисахариды побегов кактуса крупноцветкового в D2О

107,5

104,4

99,6

84,0 81,1 77,7 76,6 74,5 71,8 69,2

60,8

172,7 52,9 38,8 178,9

Полученные данные позволили в ряде случаев сделать заключение о характере связи между сахарами, а также о форме, в которой сахара входят в состав полисахарида. В частности, по ЯМР-спектру определены сигналы, характеризующие -D-связанные звенья глюкозы, галактозы и мальтозы, а также связанные межзвенной -связью -рамнозофуранозы и --D-галактопиранозы

При этом следует отметить схожесть составов полисахаридных комплексов, выделенных из свежего и высушенного сырья.

Поскольку в ходе предварительного фитохимического анализа побегов кактуса крупноцветкового обнаружены свободные аминокислоты, нами было проведено исследование их качественного состава. Изучение проводили на образцах, выделенных из свежих и высушенных побегов кактуса крупноцветкового методом ТСХ с использованием растворов стандартных образцов аминокислот.

Анализ осуществляли на пластинах «Sorbfil ПТСХ-П-А» в системе растворителей н-бутанол–ледяная уксусная кислота–вода в соотношении 80:20:20 с последующим детектированием зон адсорбции аминокислот 0,2% раствором нингидрина в ацетоне.

В результате в свежесобранном и высушенном сырье установлено наличие глицина (Rf около 0,18), кислоты глютаминовой (Rf около 0,32), метионина (Rf около 0,52) и триптофана (Rf около 0,54).

Для подтверждения и уточнения качественного состава аминокислот проведен ВЭЖХ-анализ на колонке Waters AccQ Taq размером 3,9х150 мм при использовании градиентного метода элюирования: элюент А: натрия ацетат- кислота фосфорная конц. – триэтиламин- вода – EDTA (19%:6-7%:1-2%:72-73%:0,1%); элюент В: ацетонитрил; Элюент С: вода.. (рисунок 3). Идентификацию аминокислот производили по времени удерживания в калибровочном стандарте (табл.5).

Таблица 5

Характеристика ВЭЖХ-хроматограммы свободных аминокислот в побегах кактуса крупноцветкового

Название аминокислоты

Свежее сырье

Высушенное сырье

Время удерживания. мин

Соотношение в смеси, %

Время удерживания. мин

Соотношение в смеси, %

Глицин

18,71

1,24

18,73

2,32

Гистидин

19,92

6,02

19,91

5,98

Аргинин

20,65

9,87

20,63

8,47

Тирозин

21.44

5,67

21,44

6,03

Аланин

22,89

1,79

22,88

3,20

Пролин

23,47

4,81

23,48

4,74

Лизин

35,11

20,52

35,11

19,97

Триптофан

40,06

41,3

40,04

41,01

Согласно полученным данным в свежесобранных и высушенных побегах кактуса подтверждено наличие таких аминокислот как глицин, кислота глютаминовая, метионин и триптофан, а также обнаружены гистидин, аргинин, тирозин, аланин, пролин, лизин. Кроме того, установлено, что состав аминокислотный свежесобранного и высушенного сырья аналогичны.

Разработка методик количественного определения биологически активных веществ в сырье кактуса крупноцветкового

Согласно данным литературы и результатам проведенного фитохимического исследования сырья кактуса крупноцветкового установлено, что основными группами БАВ этого ЛРС являются полисахариды и аминокислоты, в связи с этим нами разработаны методики их количественной оценки.

Количественное определение суммы полисахаридов в побегах кактуса крупноцветкового

С учетом современных требований к анализу БАВ, для количественного определения полисахаридов в сырье кактуса нами предлагается спектрофотометрический метод, позволяющий оценивать содержание полисахаридов по количеству моносахаров (полученных после гидролиза полисахарида), образующих окрашенный комплекс с пикриновой кислотой в щелочной среде, который имеет поглощение в области 460 нм.

В ходе разработки методики были подобраны следующие параметры: измельченность высушенного сырья, время гидролиза полисахаридов, время образования окрашенного комплекса. В результате было установлено, что оптимальным является экстракция сырья водой в течение 1 ч при соотношении сырье:экстрагент 1:25. использование сырья, измельченного до размера частиц, проходящего сквозь сито с отверстиями диаметром 0,5 мм (для высушенного сырья), время гидролиза 2 часа и время реакции образования комплекса продуктов гидролиза полисахаридов с пикриновой кислотой - 30 мин.

Рис. 1. УФ-спектр поглощения комплекса гидролизата полисахаридов побегов кактуса крупноцветкового высушенных (1), свежих (2) с пикриновой кислотой и комплекса глюкозы с пикриновой кислотой (3)

Pages:     | 1 || 3 | 4 |   ...   | 5 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»