WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 || 3 | 4 |

Ch. plumosus, 2n=8, цитологический комплекс thummi: I(AB), II(CD), III(EF) и IV(G). Центромеры морфологически выражены. Гомологи ПХ IV не конъюгируют. Вид полиморфен за счет парацентрических инверсий и B-хромосом. В кариотипе пять активных районов. BR локализованы: одно в плече В ПХ I(АВ), по цитофотокарте Максимовой (1976), в 16 районе и два в плече G ПХ IV - в 7 и 8 отделах. NО – локализован в плече G отделе 2, пуф (PВ) – в плече В ПХ I (АВ) в 21 районе.

Изменения функциональной активности ПХ исследовали по индексам: компактности (CR***) - отношение абсолютной длины III хромосомы к ширине ее центромеры (Ильинская, 1989), ядрышкового организатора (NОR***) - отношение максимального диаметра к ширине интактного района 6 ПХ IV (Stockert, 1990), колец Бальбиани - BR1GR

4

5

6

и BR2GR*** - отношение максимального диаметра, соответственно, BR1G и BR2G к ширине интактного района 6 ПХ IV (Лычёв, 1968), BRВ*** - отношение максимального диаметра BR плеча В к ширине интактного района 17 (Лычёв, 1968) и пуфа (PВR***) - отношение максимального диаметра пуфа к ширине интактного района 21 (Лычёв, 1968). Учитывали не отмеченные в контроле пуфы de novo. Их описание проводили по классификации Максимовой (1983), выделяющей пять классов пуфовой активности. Учитывали только пуфы IV – V классов, т.к. при работе со световым микроскопом малые пуфы практически неотличимы от междисков. Детальное картирование пуфов, инверсионных последовательностей дисков ПХ и обозначение последовательностей дисков проводили по Шобанову (1994 а, б).

Таблица 1

Шкала сопряженности токсического действия холинотропных препаратов

с морфофункциональными изменениями у личинок Ch. plumosus

Бал-лы

Динамика локомоторной активности и поведения экспериментальных личинок

Дыхательные движения

Ответ на раздражение пинцетом

Окраска и упругость тела

% погибших

Состоя-ние

1

Активные, на дне

Попытка свернуться в кольцо

Ярко-красная

0

норма

2

Снижение активности

Различ-ные стадии интоксикации

3

Медленные, на дне, единичные особи неподвижны

Красная

4

Медленные, на дне; 30% неподвижны

5

Медленные, на дне; 50% неподвижны

Темно-красная. Лизис тканей

6

Редкие движения на дне;большинство неподвижны

Темно-красная.

Лизис тканей

1-3

7

5-25

8

Судорожные сокращения подталкивателей

25-50

9

Неподвижны

Едва заметные судорожные сокращения подталкивателей

Темная.

Лизис тканей

50-90

10

Отсутствует

100

гибель

Определение степени компактности ПХ проводили по Ильинской (1989). В норме о функциональной активности ПХ свидетельствует изменение значений индекса компактности в пределах от 5.7±0.1 до 10.3±0.1; о снижении функциональной активности ПХ – как уменьшение значения до 4.6 ± 0.1, так и увеличение до 14.7±0.3 и выше.

При сравнении цитогенетических эффектов для нивелирования погрешностей (связанных со стрессовым воздействием на основе изменения температурных условий, отсутствия субстрата и пищи в период острого эксперимента) данные нормировались на контроль, т.е. значения индексов контроля принимались за единицу. Статистическую обработку проводили в среде специализированных пакетов Excel, Statistiсa 6. Для характеристики группы использовали среднее арифметическое и стандартное отклонение. Для оценки значимости различий использовали однофакторный дисперсионный анализ при Р < 0.05, для анализа различий дисперсий – Ф-тест Фишера.

Схема проведения акклимации. При исследовании влияния акклимации 50 личинок были зафиксированы у проруби сразу после вылова, 50 – через сутки после адаптации к лабораторным условиям.

Схема проведения эксперимента по влиянию атропина и пилокарпина. При анализе цитогенетических эффектов атропина использовали концентрации 0.1 мг/мл, 0.13 мг/мл, 0.2 мг/мл 0,4 мг/мл и 1 мг/мл при экспозицях - 12, 24, 48, 72 и 96 ч, - пилокарпина – 0.5 мг/мл, 0.67 мг/мл, 1 мг/мл, 2 мг/мл и 5 мг/мл при экспозициях - 12, 24, 48, 72 ч, т.к. уже на 3 сут (72 ч) наблюдалась гибель личинок. Подбор концентраций проводили с учетом более сильного воздействия атропина, как блокатора м-холинорецепторов.

Схема проведения эксперимента по комбинированному влиянию холинотропных препаратов. Личинок помещали в четыре ёмкости: с чистой водой (контроль, раствор 1); в раствор атропина в концентрации 0.13 мг/мл (раствор 2) и 0.4 мг/мл (раствор 3); и - пилокарпина - 0.67 мг/мл (раствор 4); добавление к раствору атропина 0.13 мг/мл пилокарпина 0.67 мг/мл (5), перемещение из раствора атропина 0.4 мг/мл в пилокарпин 0.67 мг/мл (6), добавление к раствору атропина 0.4 мг/мл пилокарпина 0.67 мг/мл (7). Через 24 ч часть личинок оставалась в растворах 1–4; часть - из растворов 2 и 3 помещали в новую ёмкость с раствором 4; и часть - находилась в ёмкостях с растворами 2 и 3, к которым был добавлен раствор 4. Личинок фиксировали через 24, 48 и 72 ч, как после их перемещения из атропина в пилокарпин, так и при добавлении пилокарпина к атропину. Параллельно фиксировали контрольных личинок и личинок из растворов атропина и пилокарпина через 12, 24, 48, 72 и 96 ч. В эксперименте использовали концентрации атропина, составляющие 1/15 и 1/5 доли от LC50 и более высокую концентрацию пилокарпина – 1/3 LC50.

Схема проведения эксперимента на обратимость. Личинки были помещены в раствор пилокарпина 2 мг/мл. Через 12 ч после начала воздействия часть личинок оставалась в растворе пилокарпина, другая часть была перемещена в емкость с чистой водой. Личинок зафиксировали: 1) через 12 ч воздействия пилокарпином, 2) через 36 ч воздействия пилокарпином, 3) через 60 ч воздействия пилокарпином, 4) через 24 ч нахождения в воде (после 12 ч воздействия пилокарпином), 5) через 48 ч нахождения в воде (после 12 ч воздействия пилокарпином). Контроль устанавливался через 12, 36 и 60 ч. Во всех экспериментах при каждой экспозиции и концентрации исследовали по 10 личинок (по 10 клеток от каждой личинки).

Глава 3. СОСТОЯНИЕ АКТИВНЫХ РАЙОНОВ И КОМПАКТНОСТИ

ПОЛИТЕННЫХ ХРОМОСОМ CHIRONOMUS PLUMOSUS

Активность функциональных участков ПХ и инверсионный полиморфизм

У личинок обнаружены следующие генотипические комбинации (табл. 2).

Таблица 2

Генотипические комбинации личинок Ch. рlumosus из озера Сазанка

№ № п/п

Генотипические комбинации

Частота встречаемости, % (от 760 особей)

1

А1.1 В1.1 С1.1 D4.4 Е1.1 F1.1 G1.1

6

2

А1.2 В1.1 С1.1 D4.4 Е1.1 F1.1 G1.1

2

3

А1.1 В1.2 С1.1 D4.4 Е1.1 F1.1 G1.1

10

4

А1.1 В1.1 С1.1 D1.4 Е1.1 F1.1 G1.1

10

5

А1.1 В2.2 С1.1 D4.4 Е1.1 F1.1 G1.1

2

6

А1.1 В1.2 С1.1 D4.4 Е1.1 F1.1 G1.1

2

7

А1.2 В1.2 С1.1 D4.4 Е1.1 F1.1 G1.1

10

8

А1.2 В1.1 С1.1 D1.4 Е1.1 F1.1 G1.1

12

9

А1.2 В1.1 С1.1 D4.4 Е1.2 F1.1 G1.1

2

10

А1.1 В2.2 С1.1 D1.4 Е1.1 F1.1 G1.1

2

11

А1.1 В1.2 С1.1 D1.4 Е1.1 F1.1 G1.1

10

12

А1.1 В1.2 С1.1 D4.4 Е1.2 F1.1 G1.1

2

13

А1.2 В2.2 С1.1 D1.4 Е1.1 F1.1 G1.1

2

14

А1.2 В1.2 С1.1 D1.4 Е1.1 F1.1 G1.1

12

15

А1.2 В1.1 С1.1 D1.4 Е1.2 F1.1 G1.1

4

16

А1.2 В1.2 С1.2 D1.4 Е1.2 F1.1 G1.1

2

17

А1.5 В1.2 С1.1 D4.4 Е1.1 F1.1 G1.1

2

18

А1.2 В1.2 С1.1 D4.4 Е1.1 F1.1 G1.1 + В-хромосома

2

19

А1.2 В1.1 С1.1 D1.4 Е1.1 F1.1 G1.1 + В-хромосома

2

20

А1.2 В2.2 С1.1 D1.4 Е1.1 F1.1 G1.1 + В-хромосома

2

21

А1.2 В1.2 С1.1 D1.4 Е1.1 F1.1 G1.1 + В-хромосома

2

Выявлены различия в активности NО на основе естественного полиморфизма между группами личинок с разными генотипическими комбинациями: pluA1.2D1.4 и plu B1.2D1.4; plu A1.2B1.2D1.4 и plu B1.2D1.4; plu A1.2B1.2 и plu B1.2D1.4.

Наибольшая активность NО наблюдалась у личинок с plu B1.2D1.4. У гетерозиготных по последовательности plu В2 личинок по сравнению с гомозиготными (plu В1.1, и plu В2.2) активность BRB увеличена за счет территориального сближения PB и BRB в результате гетерозиготной инверсии. При анализе активности функциональных участков ПХ в зависимости от числа инверсий в кариотипе выявлено увеличение активности BR2G у личинок с наименьшим числом гетерозиготных инверсий, значение BR2GR увеличивалось (от 1.59 при трех инверсиях до 1.63 при двух и 1.88 при одной). Отмечена тенденция к уменьшению разброса значений индексов функциональной активности ПХ в группе подопытных личинок по сравнению с контролем (табл. 3).

Снижение разнородности работы активных участков ПХ личинок в условиях стрессового воздействия токсикантов свидетельствует о мобилизации внутриклеточных ресурсов, подавляющих проявление индивидуальных реакций особей на основе естественного генетического полиморфизма, и позволяет в экспериментах на генотоксичность пренебрегать индивидуальными различиями функциональной активности ПХ особей с разными зиготическими комбинациями.

Таблица 3

Величина дисперсии в период акклимации и при воздействии холинотроных

препаратов

Индекс активности ПХ

В период акклимации

воздействие

Pages:     | 1 || 3 | 4 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»