WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 || 3 |

- раздражающее действие оценивают по способности изделия, материала или экстракта вызывать воспалительную реакцию при прямом контакте с тканью;

- оценка сенсибилизирующего действия проведена на крысах и морских свинках;

- имплантационный тест оценивают местное действие имплантата на окружающую ткань (на макроскопическом и микроскопическом уровне). Имплантацию осуществляли с учётом предполагаемой области его использования. После эксперимента проводили забор ткани для гистологического исследования.

- гистологические исследования тканевой реакции на подкожную и внутримышечную имплантацию исследуемого материала крысам;

- общетоксическое действие (острая токсичность) исследовали при однократном воздействии вытяжки из материала на подопытных животных (мыши) в течение 24 часов при введении экстракта внутрибрюшинно. При забое исследовали массу внутренних органов (таб.1.).

Исследования эффективности операции в эксперименте

Эффективность оценивали в сравнительном анализе нового изделия относительно известного имплантата. Исследования проводили на экспериментальной модели склероукрепляющей операции с применением вискоэластичного препарата. При выборе вискоэластиков было выявлено, что к имплантации на длительный срок допущены только производные гиалуроновой кислоты.

Эксперимент был проведен на 16 половозрелых кроликах породы Шиншилла весом от 2,5 до 5,0 кг. Животные были разделены на две группы по 8 кроликов: первой проводили имплантацию «Склеропланта-М» с использованием вискоэластика; второй - имплантировали материал «Склероплант-М» без использования вискоэластичных материалов. Определяли основные этапы техники операции. Были изучены особенности введения «Склеропланта - М» во время операции, характер травматизации тканей; а в послеоперационном периоде изучали динамику течения и наличие осложнений.

Оценку эффективности осуществляли методами прижизненной биомикроскопии и морфологическими исследованиями места имплантации:

- морфологические исследования проводили в различные сроки эксперимента (7, 14, 30 дней, а также через 6 и 12 месяцев после операции);

- электронная микроскопия позволила изучить состояния имплантированного склерального лоскута в различные сроки после операции.

Клинические исследования

Клинические исследования были выполнены на базе Центрального отделения микрохирургии глаза ФГУЗ Клинической больницы № 86 ФМБА России.

Основной группе пациентов (42 человека - 84 глаза) проведена склероукрепляющая операция с использованием «Склеропланта-М» с вискоэластиком. Контрольную группу составили 18 пациентов (36 глаз), которым была проведена классическая операция методом Н.Н.Пивоварова. Срок наблюдения за больными составил 1-3 года.

Величина близорукости у оперированных больных варьировала от 2,0 до 7,0 диоптрий. Среди оперированных пациентов 36 женщин (60%) и 24 мужчины (40%). Возраст больных от 9 до 22 лет.

Образование анализируемых групп, выбор методик и сроков наблюдения производили в соответствии с «Методическими рекомендациями по оценке эффективности методов профилактики и лечения близорукости и прогнозирования ее течения» Минздрава СССР 1985 г.

Состояние глаз оценивали следующими методами:

- электронная биомикроскопия: микроскопия глаз в послеоперационном периоде на щелевой лампе. Клиническую картину оценивали по наличию хемоза, выделений из глаз, выраженности и характеру отека конъюнктивы, состоянию склерального лоскута, подвижности глазного яблока.

- эхобиометрия: определение длины передне-задней оси (ПЗО) глаза. Её уменьшение в среднем на 0,42±0,074 мм свидетельствовало об эффективности проведенной операции;

- фотографирование глаз с имплантированным склеральным лоскутом проводили на фото-щелевой лампе;

Техника операции: Под местной анестезией, состоящей из двукратных инстилляций 1% раствора дикаина и ретробульбарной инъекции 2,0 мл 2% раствора новокаина, были сделаны линейные разрезы конъюнктивы в 4 квадрантах между прямыми мышцами глаза (на 10ч 30мин, 1ч 30мин, 4ч 30мин, 7ч 30мин), длиной 4 мм, параллельно лимбу, отступив от него на 6-8 мм. Склеральный лоскут фиксировали рабочей частью канюли и имплантировали под склеру, одновременно проводя вискодиссекцию. Введение лоскута не представляло затруднений за счет наличия в канале вискоэластичного препарата. Фиксация лоскута осуществляли размещением его края под прямыми мышцами глаза. Операцию заканчивали наложением узловых конъюнктивальных швов из рассасывающегося материала и парабульбарной инъекцией дексаметазона и антибиотика.

Результаты экспериментальных исследований.

Таблица №1

Исследования биологической безопасности.

Методы исследования

Пороговое значение

Результаты измерений

рН-метрия

±0,2

0,03

УФ-спектроскопия (от200 до360 нм)

0,15

0,10

Определение белка

100 мг/мл

80 мк/мл

Наличие прионовых инфекций

отс.

отс.

Из таблицы видно, что в экстрактах из исследуемого материала не обнаружено запредельной концентрации токсических веществ. Он был рекомендован для испытаний in vivo.

При исследовании цитотоксичности на фибробластах токсических эффектов: лизиса, замедления или остановки роста клеток не обнаружено. Гибель клеток составила менее 10%, что не превысило порогового значения (30%).

При исследовании раздражающего действия инстилляцию вытяжек из «Склеропланта М» в конъюнктивальный мешок повторяли троекратно (на 3 кроликах, 6 глаз). Наблюдение за животными в процессе эксперимента показало отсутствие какой-либо реакции как в раннем периоде (от 15 мин до 1 часа), так и в отдалённом периоде от 1 до 7 суток. Это говорит об отсутствии раздражающего действия и аллергизирующей реакции немедленного типа экстрактов на конъюнктиву.

При изучении сенсибилизирующего эффекта ни в одном случае процент дегрануляции тучных клеток сенсибилизированных животных в прямом взаимодействии с вытяжкой из материала не превысил порогового значения 8% и составил в эксперименте: 2%. Морские свинки не показали аллергизирующего действия в хроническом эксперименте. Размер окрашенного пятна не превысил 2 мм в диаметре.

При изучении острой токсичности при внутрибрюшинном введении экстракта из испытуемого материала гибели животных не было. В течение срока наблюдения не отмечено снижения аппетита и веса. Статистически достоверных различий в массе органов не найдено.

При имплантации на протяжении срока наблюдения от 1 месяца до 1 года случаев отторжения имплантируемого материала или вторичной инфекции не наблюдалось.

Морфологические исследования после имплантации под кожу на сроке 1 месяц выявили сформированную тонкую фибробластическую капсулу с макрофагальным монослоем. Нейтрофильных и эозинофильных лейкоцитов, свидетельствующих о продолжающемся воспалении минимальное количество. В макрофагальном слое имелось незначительное количество гигантских клеток. Наблюдали единичные лимфоциты.

Через 6 месяцев на гистологических препаратах имеет место полностью сформированная капсула, замещающаяся плотной соединительной тканью. Клетки воспалительного ряда отсутствуют, есть остатки макрофагального монослоя.

Через 1 год на срезах видна полностью сформированная соединительно-тканная капсула с чётко выраженными коллагеновыми волокнами, ориентированными вдоль имплантата. Характерным признаком внутримышечной имплантации пластин «Склеропланта-М» является формирование тонкой соединительнотканной капсулы и меньшим проявлением воспалительной реакции.

Таким образом, в результате проведённых экспериментальных исследований биологической безопасности «Склеропланта - М» по критериям, принятым для материалов, пожизненно имплантируемых в организм человека, доказано, что имплантат не оказывает отрицательного действия.

На основании проведенных исследований было выдано заключение для регистрации в Росздравнадзоре за № 062.0282.Р.05.

Исследования эффективности применения «Склеропланта - М» на кроликах подтверждались гистологическими исследованиями заднего отрезка глаз (в месте имплантации «Склеропланта-М») по характеру приживления имплантата. В процессе эксперимента проводили биомикроскопическое наблюдение за состоянием оперированных глаз. Показано, что имплантация данного материала ни в одном из случаев не вызвала отрицательных реакций, как в раннем, так и в отдаленном послеоперационном периоде. Животные были подвижны, глаза спокойны.

При наблюдении за оперированными кроликами в течение 6 месяцев общей, местной и локальной реакции на проведение вискосклеропластики не наблюдали; животные были подвижны, глаза спокойны.

Гистологические исследования

В экспериментальной группе гистологические срезы тканей глаза в области проведения вискосклеропластики на сроке 6 месяцев проведенной операции показали, что введенный имплантат плотно прилегал к склере глаза. В месте прилегания, наблюдалось набухание соединительнотканных структур, вакуолизация цитоплазмы фибробластов и мелкие очаговые или диффузные круглоклеточные лимфоидные инфильтраты. В соединительной ткани склеры кролика значительно увеличилось содержание крупных клеточных элементов – склеробластов и склероцитов, были видны вновь образованные гиперемированные капилляры, наблюдался умеренный отек, базофилия, умеренная метахромозия.

Через 1год, в соединительной ткани наблюдалось увеличение капиллярной сети на поверхности, больше, чем в контрольной группе. Имплантат тесно прилегал к склере. Зона операции была представлена плотной волокнистой соединительной тканью. При этом регенеративная пролиферация в области операции осуществлялась за счет увеличения количества фибробластов, и, в большей степени, склероцитов.

В контрольной группе через 6 месяцев после операции отмечался умеренный отек с набуханием соединительнотканных структур. Имплантат плотно прилегал к склере кролика. В соединительной ткани были видны единичные гиперемированные капилляры, наблюдался умеренный отек, базофилия и метахромозия.

Через 1 год зона операции была представлена плотной волокнистой соединительной тканью со слабой васкуляризацией поверхностных слоев склеры кролика.

Таким образом, гистологические исследования показали, что после операции с применением «Склеропланта-М» в сочетании с вискоэластичным препаратом, в тканях склеры кролика произошли изменения, приводящие к активации физиологических регенеративных процессов в зоне воздействия за счет увеличения количества фибробластов, и в большей степени склероцитов, что неизменно приводит к склероукрепляющему эффекту.

Результаты клинических исследований

Показанием к проведению склероукрепляющей операции является прогрессирование близорукости на 1,0 и более диоптрий в год, сопровождающееся увеличением передне-задней оси глаза.

Противопоказанием к проведению операции служит наличие общих, системных, а также острых и хронических инфекционно - воспалительных заболеваний глаз.

Пациентам обеих групп проводили многоплановое клинико-функциональное офтальмологическое обследование, как перед операцией, так и на различных сроках послеоперационного периода.

Функциональные результаты операций

В обеих группах у всех пациентов операция прошла без осложнений. У больных, оперированных с использованием «Склеропланта-М» и вискоэластика отмечено ареактивное течение раннего послеоперационного периода, в то время как в контрольной группе больных наблюдали явления отека конъюнктивы, симптомы асептического воспаления.

Слабо выраженные клинические признаки послеоперационного воспаления оперированных глаз в основной группе больных исчезали к 3-4 дню от начала операции. Полная адаптация раны и исчезновение косметических признаков вмешательства после были отмечены на 5-7 дней раньше, чем в контрольной группе.

В сроки наблюдения до 1 года, после проведенного оперативного лечения было осмотрено 53 человека (88,3%).

Ослабление клинической рефракции отмечалось в основной группе на 0,5-2,25 дптр., в контрольной группе на 0,25-2,0 дптр., что в среднем составило соответственно 1,30±0,75 и 1,2±0,5 дптр.

Через 2 года после проведения операции было обследовано 27 человек (45%).

Ослабление клинической рефракции в основной группе пациентов составило 0,5-1,25 дптр., в контрольной группе – 0,5 -1,0 дптр., что в среднем составило 0,75 ±0,15 и 0,75±0,05 дптр.

Через 3 года было осмотрено 9 пациентов (15%) от числа всех оперированных.

Ослабление клинической рефракции в основной группе варьировало в пределах 0,25-1,25 дптр., а в контрольной – 0,25 – 0,75 дптр., средние величины соответственно составили 0,75±0,27 и 0,5±0,12 дптр.

Таким образом, приведенные выше результаты свидетельствуют об ослаблении клинической рефракции глаз в среднем на 1,25 диоптрий в послеоперационном периоде у 100% больных.

Анализ анатомических параметров оперированных глаз выявил наличие корреляции между величиной ослабления клинической рефракции и уменьшением длины ПЗО.

Pages:     | 1 || 3 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»