WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

загрузка...
   Добро пожаловать!

Pages:     | 1 || 3 | 4 |   ...   | 5 |

Структура и объём диссертации. Диссертация изложена на 148 страницах печатного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, 3 глав собственных исследований, обсуждения результатов, выводов и списка литературы, включающего 221 отечественный и 71 зарубежный источник. Работа иллюстрирована 33 рисунками и 14 таблицей.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материал и методы исследований

Объектом исследования были 130 белых лабораторных крыс со средней массой 200,0±10,0 г. На первом этапе исследования основные морфофункциональные характеристики суставов, гистологические параметры были изучены у 20 здоровых животных, которые составили серию контроля.

Для оценки влияния естественных регуляторов метаболизма на морфофункциональные параметры в условиях аутоиммунного воспаления у 110 крыс воспроизведен АдА с однократным введением полного адъюванта Фрейнда (Чернух А.М., 1979).

В работе использовались следующие методы:

1. Общелабораторные методы включали в себя оценку общего состояния животных (потребность в еде, состояние шерсти, подвижность) и местные проявления артрита (объём движений в суставах, их болезненность при пальпации, окружность коленных суставов, накожная температура в подколенной области). Осуществлялся также общий анализ крови (Лиманский и др., 1984) - определение СОЭ по методу Панченкова, подсчет количества лейкоцитов, количества эритроцитов в счетной камере Горяева.

2. Биохимические методы исследования включали:

а) определение состояния процессов ПОЛ по уровню МДА, общепринятого маркёра ПОЛ (Коробейникова Э.Н., 1989);

б) определение состояния метаболизма ПГ, характеризующего степень деструкции соединительной ткани (по содержанию ГАГ в сыворотке крови (Карякина Е.В., Косягин Д.В., 1982).

3. Для оценки степени выраженности иммунопатологических процессов изучали содержание циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) (Гриневич Ю.А., Алферов А.И., 1984).

4. Морфологические исследования включали оценку состояния макропрепарата и микроструктуры тканей коленного сустава (СО и СХ).

Гистологические препараты изучали следующими методами:

а) морфологический - окраска тканей сустава гематоксилином-эозином и пикрофуксином по Ван Гизону для изучения их структуры в целом (Меркулов Г.А., 1961);

б) гистохимический - окраска толуидиновым голубым для выявления ГАГ, как основного структурного компонента суставного хряща и пиронином по Браше для выявления рибонуклеотидов (показателя функциональной активности клеток);

в) морфометрический - количественная и качественная характеристика клеточных элементов (гистиоцитов, лимфоцитов, плазмоцитов и фибробластов) и морфологических проявлений патологических изменений суставных тканей - СО и СХ.

Морфологические признаки имеющихся изменений количественно определяли с помощью морфометрического анализа по 5 основным признакам поражения синовиальной оболочки: пролиферация синовиоцитов, отложение фибрина, воспалительная клеточная инфильтрация, пролиферация фибробластов, очаговый фиброз и 5 признакам поражения суставного хряща: убыль ГАГ, узурация поверхностного слоя, дистрофия хондроцитов, потеря хондроцитов, разволокнение матрикса.

Степень выраженности ПП тканей оценивалась с помощью окулярной измерительной сетки (Автандилов Г.Г., 1984) как по клеточному составу СО (соотношение фибробластов, гистиоцитов, лимфоцитов и плазмоцитов в %%), так и в баллах. Функциональная активность воспалительно-клеточных элементов определялась по пиронинофилии лимфоцитов и плазмоцитов (Шехтер А.Б., Крель А.А., Расщупкина З.П., 1985).

Для обоснования эффективности применения естественных регуляторов метаболизма у крыс с экспериментальным АдА изучали различные по своим механизмам действия субстанции - полиферментный препарат, хондропротектор и антигипоксант.

С этой целью, кроме 1-ой серии из 20 интактных крыс, составившей серию контроля и после обследования выведенной из эксперимента, сформированы следующие группы: 2-я серия - 20 животных с индуцированным адъювантным артритом, не получавших никаких препаратов (1-я серия сравнения); 3-я - 20-ти животным с воспроизведённым артритом (2-я серия сравнения, плацебо-контроль) ежедневно в течение 16 дней, в равных количествах, вводили внутрижелудочно плацебо в виде взвеси талька в воде; 4-я - 20-ти животным осуществлялось ежедневное (16 дней) внутрижелудочное введение вобэнзима ( 42,85 мг/кг массы тела); 5-я - 10 животных, которым ежедневно, так же 16 дней внутрижелудочно вводилась дона (21,4 мг/кг); 6-я - 10-ти животным внутрисуставно вводился оксибутират натрия 2 раза в неделю (5,7 мг/кг); 7-я - 20 животных получали ежедневно, внутрижелудочно, вобэнзим и дону (42,85 мг/кг и 21,4 мг/кг соответственно); 8-я - 10-ти животным проводилось внутрижелудочное введение вобэнзима и доны, с одновременным введением 2 раза в неделю внутрисуставно оксибутирата натрия (42,85мг/кг, 21,4 мг/кг и 5,7 мг/кг соответственно).

В работе были использованы следующие субстанции:

1. Полиферментное средство «Вобэнзим (WOBENZYM)» фирмы MUCOS Pharma GmbH & Co. (Германия), представляющее собой смесь протеолитических энзимов: панкреатина, трипсина, липазы, амилазы, химотрипсина, бромелаина, папаина, а также рутина.

2. Хондропротектор «Дона (DONA)» фирмы Rottapharm (Италия), содержит глюкозамина сульфат.

3. Антигипоксант «Оксибутират натрия» (Россия), натриевая соль гамма оксимасляной кислоты.

4.Тальк (силикат магния) - индифферентный наполнитель для приготовления паст и таблеток был использован в качестве плацебо.

Количество вводимых препаратов рассчитывалось на основании дозировок, рекомендованных в инструкциях по их применению.

Введение препаратов начинали на третьи сутки после моделирования артрита, когда появлялись его выраженные клинические признаки. Животных выводили из опыта после обследования методом декапитации под эфирным наркозом сразу после окончания введения препаратов. Кровь для исследования бралась из тела после декапитации. Коленные суставы забирались целиком для гисто-морфометрического исследования.

Все полученные данные обрабатывали общепринятыми методами статистического анализа. Первичная статистическая обработка проводилась методами вариационной статистики с вычислением средней арифметической (М), ее ошибки (m), коэффициента достоверности (t), показателя вероятности (Р). Все расчеты проводились с применением пакета статистических программ STATISTICA 6.0.

Результаты исследований и обсуждение

Основные биологические показатели и морфо-функциональные параметры суставов здоровых животных

Здоровые крысы в начале эксперимента характеризовались обычным для данного вида поведением, животные были активны, проявляли любопытство, ели с аппетитом. Шерсть была гладкая, блестящая, чистая. Отсутствовали выделения из глаз и ушей. Движения в коленных суставах были свободные и безболезненные.

Окружность правого коленного сустава составляла 4,15±0,03 мм, накожная температура в подколенной ямке - 34,06±0,04°С.

Гематологические показатели соответствовали норме. СОЭ составляла 3,00±0,02 мм/ч, в крови количество лейкоцитов - 12,60±0,04109/л, количество эритроцитов - 6,50±0,131012/л.

Уровень МДА в крови, характеризующий процессы ПОЛ у здоровых крыс, составлял 2,86±0,11 мкмоль/л. Количество ГАГ в сыворотке крови, отражающее состояние метаболизма ПГ, составляло 1,39±0,04 г10-2/л по уроновым кислотам и 3,58±0,05 г10-2/л по гексозам.

Содержание ЦИК в сыворотке крови соответствовало нормальной реактивности иммунной системы и составляло 8,25±1,18 усл.ед.

Клеточный состав СО здоровых крыс характеризовался значительным преобладанием фибробластов с единичными лимфоцитами, гистиоцитами и плазмоцитами. ПП СО и СХ у здоровых животных отсутствовали (сумма баллов ПП равна 0).

По окончании срока наблюдения (16 дней) у животных контрольной серии (1-я серия, здоровые крысы) не было выявлено изменений во внешнем виде и поведении. У них сохранялась, высокая двигательная активность, гладкая и блестящая шерсть, чистые глаза и уши. Подвижность в обоих коленных суставах, объём активных и пассивных движений оставалась такой же, как в начале эксперимента, болезненность при пальпации коленных суставов отсутствовала.

Окружность сустава оставалась неизменной. Также не обнаружено каких-либо изменений накожной температуры в области правого коленного сустава.

СОЭ оставалось на нормальных цифрах, отсутствовали изменения в количестве лейкоцитов и эритроцитов.

Биохимические показатели (уровень МДА и ГАГ) оставались такими же, как и в начале эксперимента.

Неизменным оставалось количество ЦИК в сыворотке крови.

Изменение биологических и морфо-функциональных характеристик у крыс при воспроизведении АдА

У всех 110 иммунизированных животных после введения под подошвенный апоневроз правой стопы полного адъюванта Фрейнда развивался артрит. Формирование АдА подтверждалось общеклиническими методами исследования. На 2-3-и сутки после иммунизации крысы становились вялыми, агрессивными, малоподвижными, шерсть становилась тусклой, взъерошенной. При движении они избегали наступать на больную конечность. У всех иммунизированных животных отмечалось снижение аппетита. На 2-3-и сутки после иммунизации развивались выраженные отёки мягких тканей стопы и припухлость в области поражённых суставов - межфаланговых, плюснефаланговых, голеностопного и коленного. Отмечалось значительное снижение объёма активных и пассивных движений в опытных коленных суставах и выраженная болезненность при их ощупывании (животное проявляло агрессивность и отдёргивало лапу). Максимальное увеличение окружности правых коленных суставов наблюдалось на 2-3 день после введения адъюванта и оставалось неизменным до конца эксперимента, составляя в среднем 3 мм. В табл.1-4 представлены основные изучаемые параметры у крыс с воспроизведенным АдА по сравнению со здоровыми животными.

Табл.1

Местные признаки состояния коленных суставов у здоровых крыс и при АдА (M±m)

Серии

Окружность сустава в мм

Температура в °С

1-я

n=20

4,15±0,03

34,06±0,04

2-я (АдА)

n=20

6,80±0,027

Р1-2<0,001

36,96±0,04

Р1-2<0,001

3-я (АдА+плацебо)

n=20

6,90±0,06

Р1-3<0,001

Р2-3>0,5

36,90±0,03

Р1-3<0,001

Р2-3>0,2

Табл.2

Гематологические показатели у здоровых крыс и при АдА (M±m)

Серии

СОЭ в мм/ч

Кол-во лейкоцитов,

109/л

Кол-во эритроцитов,

1012/л

1-я

n=20

3,00±0,02

12,60±0,04

6,50±0,13

2-я (АдА)

n=20

6,20±0,12

Р1-2<0,001

13,42±0,02

Р1-2<0,05

4,46±0,07

Р1-2<0,001

3-я (АдА+ плацебо)

n=20

6,10±0,12

Р1-3<0,001

Р2-3>0,5

13,28±0,06

Р1-3<0,05

Р2-3>0,5

4,66±0,06

Р1-3<0,001

Р2-3>0,2

Табл.3

Биохимические характеристики крови у здоровых крыс и при АдА (M±m)

Серии

МДА в мкмоль/л

ГАГ в г10-2/л

Уроновые кислоты

Гексозы

1-я

n=20

2,86±0,11

1,39±0,04

3,58±0,05

2-я (АдА)

n=20

5,93±0,21

Р1-2<0,001

4,25±0,25

Р1-2<0,001

5,93±0,22

Р1-2<0,001

3-я (АдА+ плацебо)

n=20

6,57±0,42

Р1-3<0,001

Р2-3>0,2

4,23±0,23

Р1-3<0,001

Р2-3>0,5

6,04±0,30

Р1-3<0,001

Р2-3>0,5

Табл.4

Содержание ЦИК в сыворотке крови у здоровых крыс и при АдА (M±m в у.е)

Серии

ЦИК

1-я

n=20

8,25±1,18

2-я (АдА)

n=20

28,91±2,73

Р1-2<0,001

3-я (АдА+плацебо)

n=20

31,50±4,70

Р1-3<0,001

Р2-3>0,5

Pages:     | 1 || 3 | 4 |   ...   | 5 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»