Вторая реакция,используемая для количественногоопределения Sn(II), основана навосстановлении Fe(III) стандартным растворомSn(II) в солянокислом растворе споследующим образованием окрашенногокомплекса Fe(II) c о-фенантролином. Она легла воснову разработанной намиспектрофотометрической методикиопределения олова(II) в реагенте. Линейнаязависимость оптической плотностирастворов комплекса Fe(II) с о-фенантролиномот концентрации олова(II) наблюдается винтервале 0,5-7,0 мкг/мл в измеряемомрастворе.Рассчитан условный молярный коэффициентпогашения, который составляет 19 800±594л·моль-1·см-1 (n=5,P=0,95).
Разработана методикаопределения олова(II) при переводе его волово(IV), заключающаяся в предварительном«мокром» озолении реагентаконцентрированной серной кислотой вприсутствии хлорной кислоты в качествеокислителя с последующимспектрофотометрическим определениемолова с пирокатехиновым фиолетовым.Правильность разработанной методикиоценивали методом «введено» - «найдено»(табл.12).
Таблица12. Результаты определенияолова(II) по олову(IV)
Введено олова(II), мг
Найденоолова(IV), мг
10,00
10,22
10,00
9,71
10,00
9,41
10,00
10.19
10,00
9.89
10,00
9,38
10,00
10,65
10,00
10,31
Для доказательстваправильности разработанныхспектрофотометрических методикопределения олова(II) в реагенте мыиспользовали метод индикаторных трубок(ИТ). В методе индикаторных трубоканалитическим сигналом является длинаокрашенной зоны (L0, см), возникающая в индикаторнойтрубке после контакта определяемоговещества с индикаторным порошком изависящая от концентрации определяемоговещества. Индикаторные трубкипредставляют собой полые стеклянныетрубки различного диаметра (d, см) иразличной длины (L, см), заполненныеиндикаторным порошком.
В качестве индикаторныхпорошков использовали ксерогеликремниевой кислоты, модифицированныефосфорномолибденовой гетерополикислотой(ГПС) Н3[P(Mo3O10)4], ееаммонийной солью (NН4)3[P(Mo3O10)4] иреактивом Вавеле (смесьфосфорномолибденовых кислот 12 и 18 рядовН3[PMo12O40] и Н3[PMo18O60]). Для выполненияпоставленной задачи определяли:
6) условия стабилизацииолова(II) в измеряемом растворе, учитываяего низкое содержание в реагенте.
Установлено, что дляопределения олова(II) в реагенте с помощьюметода индикаторных трубок следуетиспользовать ксерогель, модифицированныйреактивом Вавеле*, с содержанием молибдена60 мг/г. Оптимальные условия анализа:внутренний диаметр индикаторных трубок– 1 мм, длина 10см, ввод пробы - с помощьюперистальтического насоса, скорость вводапробы не выше 100 мкл/мин в течение 4-5 минутобъемом 0,5 мл, в среде 1М НСl.
Разработаны методикиопределения олова(II) в реагенте с помощьюиндикаторных трубок по градуировочномуграфику и методу добавок. Результатыпредставлены в табл. 13.
Таблица 13. Результатыопределения олова(II) в реагентах методомИТ
по градуировочномуграфику
№ серии
Введено Sn(II), мкг
Найдено Sn(II), мкг
sr
4
15,0
14,0 ± 3,5
0,09
5
15,0
15,7 ± 4,0
0,10
6
20,0
23,6 ± 3,4
0,06
7
20,0
21,6 ± 2,7
0,05
8
20,0
21,4 ± 2,0
0,04
Данные, полученныеметодом индикаторных трубок, хорошосогласуются с результатамиспектрофотометрических методик тех жесерий реагента, что подтверждаетправильность и хорошую воспроизводимостьразработанной методики (табл. 14).
Определениестерильности и пирогенности реагентапроводили в лаборатории технологии иметодов контроля радиофармпрепаратов ФГУПГНЦ РФ - Институт биофизики. Проведеннымиисследованиями было установлено, чтореагенты являются стерильными иапирогенными в течение всего срокагодности.
*Индикаторные порошки разработанына кафедре аналитической химии МГУ им.М.В.Ломоносова под руководством д.х.н.,профессора Е. И. Моросановой.
Таблица 14. Результатыопределения Sn(II) в реагенте дляприготовления РФП «Альбумин,99мТс» различнымиметодами
N
серии
Введено
олова(II),
мкг
Найдено
Sn(II), мкг/фл
ИТ
«рениевая»
методика
«железная»
методика
ввиде Sn(IV)
с пирокатехи-новымфиолетовым
1
2
3
4
5
6
4
15,0
14,8;12,8;17,1
15,1; 15,3; 15,5
12,8; 14,9; 17,1
12,8;17,1;16,1
5
15,0
12,8;14,8; 14,0
13,3; 13,6; 15,5
17,1; 13,3; 13,5
14,2;17,1;15,4
6
20,0
17,8;19,0; 21,6
18,8; 19,8; 17,3
20,2; 22,7; 21,9
17,6;19,2;21,7
7
20,0
22,8;20,5; 21,5
20,0; 20,4; 21,5
17,6;18,2; 19,3
19,2;21,4;22,0
8
20,0
22,3;20,8; 21,2
21,5; 19,8; 20,7
17,6; 18,3; 18,6
20,0;16,9;18,9
Примечание к табл. 14.Каждая цифра в колонках 3, 4, 5, 6 таблицысоответствует результату анализа одногофлакона с реагентом.
Изучена стабильностьпри хранении реагента при температуре +2-8оС. Хранение реагентав течение 12 месяцев при температуре+2-8оС вусловиях холодильника не изменяет егосвойств.
Изучена стабильностьпри хранении реагента в течение 14 суток прикомнатной температуре от +18 до +20оС. Установлено, чтохранение реагента при указанных условияхне влияет на его свойства.
Характеристики и нормы показателейкачества реагента для приготовленияпрепарата «Альбумин,99мТс» представлены втабл. 15.
Таблица 15.Характеристики и нормы показателейкачества реагента
А. Наличие двухвалентного оловаустанавливали по окрашиванию всветло-желтый цвет раствора комплексавосстановленного оловом(II) железа(II) со-фенантролином
Б. Наличие альбумина пообразованию синего комплекса привзаимодействии реагента с биуретовымреактивом
Содержание альбумина вофлаконе, мг
9,0 –11,0
Содержание Sn(II) вофлаконе, мкг
12,0 –18,0
Стерильность
Стерильный
Пирогенность
Апирогенный
Хранение
Взащищенном от света месте при температуреот +2 до +8 оС
Срок годности
1год
Дляприготовления РФП «Альбумин,99мТс» вофлакон с реагентом, содержащиммодифицированный двухвалентнымоловом альбумин, вводят шприцем 1-5 млраствора пертехнетата натрия, 99мТс, изгенератора путем прокола иглой черезрезиновую пробку. Флакон с содержимымпомещают в свинцовый контейнер,перемешивают, не взбалтывая, при комнатнойтемпературе в течение 30 минут. Препаратготов к применению по истеченииуказанного времени. Препаратпредставляет собой прозрачный бесцветныйили слегка желтоватый раствор.
При контроле качестваРФП определяли те параметры, которые могутизменяться при его приготовлении, а именно:рН и РХП –относительную активность 99мTc, не связанного сальбумином. В препарате «Альбумин,99мTc»радиохимическими примесями могут бытьрастворимые химические соединения 99мTc, не вступившие вовзаимодействие с альбумином – свободныйпертехнетат натрия,99мТс.
Для разработки методикиопределения свободного Na99мТсO4 использовали методыбумажной хроматографии (БХ) и тонкослойнойхроматографии (ТСХ). В качестве неподвижныхфаз применяли хроматографическиепластинки со слоем силикагеля 0,22 мм фирмы“Merck”, хроматографическую бумагу FN 17 фирмы“Filtrak”, Whatman 1, Whatman 31ET. В качестве подвижныхфаз использовали: 85%-ный метанол,метилэтилкетон, ацетон – метанол (1:1),ацетон – вода(95:5), 0,9 % раствор хлорида натрия. Былоустановлено, что оптимальной системой дляопределения свободного Na99мТсO4, является системаацетон-вода (95:5). В данной системе пятноNa99мТсO4 идет с фронтомрастворителя компактно, присутствие«хвостов» минимально, в то время как РФПостается на старте. Величина Rf для 99мТсО4 составляет 0,94±0,07,для РФП 0-0,1.
Относительнаяактивность радиохимической примеси впрепарате не превышала 5%. Характеристики инормы показателей качества препаратапредставлены в табл. 16.
Таблица 16.Характеристики и нормы показателейкачества РФП «Альбумин,99мТс»
